Resumo: A imobilização de células sobre superfícies constitui um grande interesse para diversas áreas, tais como bioengenharia, imunologia, engenharia tecidual e biomedicina. A técnica Layer-by-Layer (LbL) vem ganhando destaque, uma vez que possibilita a formação de filmes de multicamadas de polieletrólitos (PEMs), um grupo versátil e de grande aplicabilidade. Trata-se de uma deposição alternada de polieletrólitos de cargas opostas em uma superfície. O uso de polímeros naturais confere uma série de vantagens, tais como biocompatibilidade, biodegradabilidade e baixa toxicidade. Quitosana (CHI) e ácido hialurônico (HA) são polieletrólitos naturais e comumente associados para formação de PEMs. Trabalhos anteriores demonstraram a elevada afinidade do HA com os receptores CD44, presentes na superfície de algumas células. Estudos mostram que vários tipos de câncer exibem níveis elevados de HA, sendo este utilizado para a avaliação das interações celulares que estão associadas à progressão do câncer. O câncer de próstata (CaP) é um tumor de crescimento lento, tendo no diagnóstico precoce a maior chance de controle e cura da doença. Neste projeto, estudou-se a seletividade de PEMs de HA/CHI quanto à sua capacidade de capturar células prostáticas tumorais (LNCaP, DU-145 e PC3) e não-tumoral (RWPE-1). Força iônica, pH, grau de acetilação da quitosana e número de bicamadas depositadas foram os fatores estudados na alteração das características da superfície, composição e caráter seletivo de captura celular das PEMs. Em uma hora de incubação, apenas a linhagem tumoral PC3 alcançou valores significativos de adesão celular, apontando os filmes (HA3/CHI3)3,5 100mM e (HA5/CHI5)3,5 100mM como a otimização das variáveis de preparação. A reduzida adesão da linhagem PC3 nos controles utilizados (filmes de ALG/CHI, tratamento das células com hialuronidase e anticorpo específico para CD44) destacou a atuação do HA como mediador direto no processo de adesão célula-filme. Assim, é possível verificar a potencial aplicação destes filmes como plataformas para a captura seletiva de linhagens tumorais, sendo a exploração da interação CD44-hialuronato passível de aplicações biotecnológicas diversas Ver menos

Abstract: The immobilization of cells on surfaces is a great interest to many fields such as bioengineering, immunology, tissue engineering and biomedicine. The Layer- by-Layer technique (LbL) has been gaining attention because it enables the formation of polyelectrolyte multilayers (PEMs), a versatile group with a wide range of application. It is an alternating deposition of oppositely charged polyelectrolytes on a surface. The use of natural polymers confers a number of advantages such as biocompatibility, biodegradability and low toxicity. Chitosan (CHI) and hyaluronic acid (HA) are natural polyelectrolytes and commonly associated to the build up of PEMs. Previous works have demonstrated the high affinity of HA with CD44 receptors which are present on the extracellular surface of certain cells. Studies show that various cancers exhibit high levels of HA, which is used for the assessment of cellular interactions that are associated with cancer progression. Prostate cancer is a slow-growing tumor and the early diagnosis increases the chance of control and cure of the disease. In this work, we studied the selectivity of HA/CHI PEMs for their ability to capture prostatic tumor cells (LNCaP, PC3 and DU-145) and non- tumor cells (RWPE-1). Changes on the surface, composition and selective character of cell capture of the PEMs were promoted by altering the ionic strenght, pH, degree of acetylation of chitosan and number of deposited layers. Only tumor line PC3 achieved significant values of cell adhesion, indicating the films (HA3/CHI3)3,5 100mM and (HA5/CHI5)3,5 100 mM as the optimization of preparation variables. Reduced adhesion of the PC3 line used in controls (ALG/CHI films, treatment of cells with hyaluronidase and antibody specific for CD44) highlighted the HA's role as a direct mediator in cell-film adhesion process. The CD44-hyaluronate interaction can be explored for several biotechnological applications and it is possible to verify the potential application of these films as platforms for the selective capture of tumor cell lines Ver menos