Resumo: Na busca por substâncias alternativas com atividade biológica, as espécies frutíferas nativas do Brasil demonstram potencial funcional, devido principalmente à presença de compostos fenólicos como flavonoides e antocianinas que apresentam em sua composição. Estudos realizados pelo nosso grupo de pesquisa relataram partes (semente, folha e polpa) das espécies de Eugenia (E. brasiliensis, E. uniflora, E. leitonii e E. myrcianthes) exibiram atividades antioxidante e anti-inflamatória. Em adição, a semente da espécie E. leitonii exibiu o melhor efeito na inibição da migração de neutrófilos na cavidade peritoneal em camundongos. Desta forma, dando continuidade à investigação de frutas nativas brasileiras pouco exploradas, os objetivos deste estudo foram avaliar a atividade anti-inflamatória, mecanismo(s) de ação e o perfil fitoquímico do extrato de sementes de Eugenia leitonii. O extrato hidroetanólico (80:20, v/v) da semente de E. leitonii (EL) foi avaliado por meio dos testes de viabilidade celular, determinação de mediadores inflamatórios (TNF- ?, IL-1? and CXCL2/MIP-2) e ativação de NF-?B em células RAW 264.7. O extrato de EL também foi avaliado in vivo, quanto aos níveis de mediadores inflamatórios (TNF- ?, IL-1? and CXCL2/MIP-2) no lavado peritoneal; ensaio de migração de neutrófilos induzido por carragenina; avaliação da expressão de moléculas de adesão (ICAM-1) e rolamento (P-selectina) no endotélio vascular e edema de pata induzido por carragenina. Por fim, foi quantificado o conteúdo total de compostos fenólicos e identificados por LC-MS/MS. Os resultados mostraram que o extrato de EL não alterou a viabilidade celular significativamente (P > 0,05) nas concentrações de 0,02 a 200 µg mL-1; em 200 µg mL-1 reduziram os níveis de TNF-? e CXCL2/MIP-2 e a ativação de NF-?B em células RAW 264.7 (P < 0,05). Os camundongos tratados via oral na dose de 300 mg kg-1 com extrato de EL apresentaram reduções significativas dos níveis de TNF-? e CXCL2/MIP-2, também apresentaram diminuições nas expressões das moléculas de adesão (ICAM-1) e rolamento (P-selectinas) comparados ao controle negativo carragenina (P < 0,05). Os animais tratados nas doses de 30, 100 e 300 mg kg-1 tiveram reduções na migração de neutrófilos induzido por carragenina comparado ao controle carragenina (P < 0,05) e finalmente, os animais tratados oralmente com o extrato de EL na dose de 300 mg kg-1 apresentaram redução máxima no ensaio de edema de pata induzido por carragenina na 3ª hora (64 %), comparado ao controle carragenina (P < 0,05). O extrato de EL apresentou um total de 158,74 ± 3,5 mg AG/g e foram identificados compostos fenólicos como flavonoides e antocianinas, por meio da análise de LC-MS/MS. Assim, essa espécie genuinamente brasileira encontrada na mata atlântica, um ecossistema ameaçado, demonstrou ser uma promissora fonte de compostos bioativos com potencial anti-inflamatório, atuando sobre vias de mediadores inflamatórios envolvendo moléculas de adesão e rolamento, e demonstrou efeito anti-edematogênico no edema de pata. O extrato de EL exibiu um teor de compostos fenólicos (flavonoides e antocianinas) maior do que aos frutos tradicionais, e que podem estar relacionados com o efeito anti-inflamatório observado possibilitanto seu uso no enriquecimento de alimentos Ver menos

Abstract: In the search for alternative bioactive molecules, Brazilian native fruit species have demonstrated functional potential due to the presence of phenolic compounds such as flavonoids, anthocyanins and others in their composition. Previous studies performed by our research group found that parts (leaves, seeds and pulps) of the Eugenia species (E. brasiliensis, E. uniflora, E. leitonii e E. myrcianthes have antioxidant and anti-inflammatory activity. In adition the seeds of E. leitonii showed better activity in decrease of neutrophil influx into the peritoneal cavity of mice. Thus, continuing the investigation of unexplored Brazillian native fruits, this study evaluated the anti-inflammatory activity, mechanism(s) of action and phytochemical profile of the extract from the seeds of E. leitonii. The hydroethanolic extract (80:20, v/v) of E. leitonii seeds (EL) was evaluated by means of tests assessing cytotoxicity, modulation of inflammatory mediators (TNF-?, IL-1? and CXCL2/MIP-2) and NF-?B activation in RAW 264.7 macrophage cells. The EL extract was assess in vivo concerns the inflammatory mediators levels (TNF- ?, IL-1? and CXCL2/MIP-2) in the peritoneal fluid of the animals; the influx of neutrophil migration into their peritoneal cavity; evaluation of ICAM-1 and P¿selectin expression in vascular endothelium; and carrageenan-induced paw edema. Finally, the total phenolic content of the extract was measured and phenolic compounds were identified by LC-MS/MS. The results showed that EL extract did not affect significantly (P > 0.05) cell viability at the concentrations ranging from 0.02 to 200 mg µl-1; at 200 mg µl-1 reduced the levels of TNF-? and CXCL2/MIP-2, and NF-kB activation in RAW 264.7 cells (P < 0.05). Mice pre-treated orally with EL extract (300 mg kg-1 ) showed significantly decreased levels of TNF-? and CXCL2/MIP-2, also there was a decrease in ICAM-1 and P¿selectin expression as compared with the control group (P < 0.05). The mice pretreated at doses 30, 100 e 300 mg kg-1 showed decrease of the influx of neutrophils into the peritoneal cavity of the mice as compared with the negative control group carrageenan (P < 0.05) and finally, the mice pretreated orally with EL extract at 300 mg kg-1 demonstrated maximum reduction of edema at 3 h (64 %) when compared with carrageenan (P < 0.05). The EL extract showed total phenolic contents yielded 158.74 ± 3.5 mg GAE/g and flavonoids and anthocianins were identified by LC-MS/MS. Thus, this genuine Brazilian species founded in Atlantic Forest, an ecosystem threatened, showed to be a promising source of bioactive compounds with anti-inflammatory potential, acting on pathways of inflammatory mediators involving rolling and adhesion molecules and showed anti-edematogenic effect in the paw edema. The EL extract exhibited content of phenolic compounds (flavonoids and anthocyanins) higher than that of traditional fruits, which may be related with the anti-inflamatory effects observed allowing it use to enriching foods Ver menos