Caracterização biológica e molecular de cepas de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) isoladas da Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo
Aline Rimoldi Ribeiro
TESE
T/UNICAMP R354c
[Biological and molecular characterization of strains of Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) isolated from Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina and São Paulo]
Campinas, SP : [s.n.], 2014.
109 p. : il.
Orientadores: João Aristeu da Rosa, Mário Steindel
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: Trypanosoma cruzi, protozoário que faz parte da família Trypanosomatidae é o agente causador da doença de Chagas que afeta 6-8 milhões de pessoas na América Latina. A origem dessa família pode ser estudada por meio de técnicas moleculares, como a investigação da região V7V8 - SSUrRNA....
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Resumo: Trypanosoma cruzi, protozoário que faz parte da família Trypanosomatidae é o agente causador da doença de Chagas que afeta 6-8 milhões de pessoas na América Latina. A origem dessa família pode ser estudada por meio de técnicas moleculares, como a investigação da região V7V8 - SSUrRNA. Trypanosoma cruzi é subdividido em seis grupos independentes TcI-TcVI denominados Unidades Discretas de Tipagem (DTUs). A caracterização biológica e molecular de onze cepas de T. cruzi pertencentes aos grupos TcI (Bolívia; Tlenti; Tmelanocephala; SC90), TcII (Famema; SC96; SI8; Y) e TcIII (QMM3; QMM5; SI5) isoladas de cinco espécies de triatomíneos esclarece fatores biológicos por parâmetros como a cinética de crescimento, curva parasitêmica, taxa de infeção celular, caracterização molecular, ação de metaloproteinases, perfil protéico e sorologia. O objetivo do trabalho foi a caracterização biológica e molecular de cepas de T. cruzi isoladas de triatomíneos da Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. O grupo TcII de T. cruzi mostrou maior capacidade multiplicativa em formas epimastigotas durante a cinética de crescimento, seguido por TcI e TcIII. A curva parasitêmica evidenciou variabilidade entre os camundongos Balb/c, contudo ao comparar os grupos TcI, TcII e TcIII de T. cruzi o perfil parasitêmico mostrou-se equivalente. Acrescentando os dados biológicos estudou-se a taxa de infecção de T. cruzi em linhagens celulares J774 e macrófagos peritoneais. O grupo TcI de T. cruzi apresentou maior taxa de infecção e menor tempo exigido para a multiplicação de formas amastigotas, assim como macrófagos peritoneias mostraram-se mais atrativos para T. cruzi. A caracterização molecular, por meio da região V7V8, mostrou que essas cepas pertencem às DTUs TcI, TcII e TcIII. A separação dos grupos torna-se evidente ao comparar o perfil protéico em formas epi e tripomastigotas de T. cruzi. O grupo TcI apresentou mais proteínas nos géis de acrilamida, particularidade que pode ser associada a intra-específicidade de TcI. A ação de metaloproteinases foi observada em formas epi e tripomastigotas sugerindo presença ativa e estável durante parte do ciclo do parasito. A reatividade sorológica foi comprovada nos grupos TcI, TcII e TcIII, por meio de ELISA em diluições de 1/100 até 1/12.800. A adição da técnica de Western Blotting aos ensaios por SDS-PAGE em soros de animais infectados após 50 dias mostrou o perfil protéico da cepa Y em membrana de nitrocelulose. Em conjunto, os resultados mostraram que as onze cepas de T. cruzi apresentaram diferenças entre os grupos do parasito. O grupo TcI mostrou maior taxa de infecção em células; TcII, os maiores valores para a cinética de crescimento e TcIII filogenéticamente próximo a TcV, grupo híbrido. A associação parasito-hospedeiro pode explicar diferenças biológicas e moleculares em cepas de T. cruzi, neste sentido o estudo de onze cepas isoladas de diferentes hospedeiros pode agregar informações a literatura e esclarecer alguns aspectos biológicos desse patógeno
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Abstract: Trypanosoma cruzi, a protozoan from the family Trypanosomatidae, is responsible for Chagas disease which affects about 6 to 8 million people in Latin America. The origin of this family can be studied through molecular techniques, for instance the investigation of the region V7V8 ¿ SSurRNA....
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Abstract: Trypanosoma cruzi, a protozoan from the family Trypanosomatidae, is responsible for Chagas disease which affects about 6 to 8 million people in Latin America. The origin of this family can be studied through molecular techniques, for instance the investigation of the region V7V8 ¿ SSurRNA. The protozoan is subdivided in six independents groups TcI-TcVI known as Discrete Typing of Units (DTUs). The biological and molecular characterization of eleven strains of T. cruzi from the group TcI (Bolivia; Tlenti; Tmelanocephala; SC90), TcII (Famema; SC96; SI8; Y) and TcIII (QMM3; QMM5; SI5) isolated from five different species of triatomine are able to elucidate biological factors through the kinetic growth, parasitemic curve, cell infection rate, molecular characterization, metalloproteinase action, proteic and serological profile. This investigation was conducted to provide a biological and molecular characterization of T. cruzi isolated from specimens of triatomines. The group TcII of T. cruzi demonstrated higher replicative capacity in epimastigotes forms during the kinetic growth curve, followed by TcI and TcIII. The parasitemic curve demonstrated variability between Balb/c mice; however, the groups TcI, TcII and TcIII showed equivalent parasitemic profile. Furthermore, the cell infection rate in J774 cellular lineages and peritoneal macrophages was used to corroborate the biological data. The group TcI of T. cruzi demonstrated higher infection rate and less time to amastigotes forms multiplication and the peritoneal macrophages showed more attractive to T. cruzi. The molecular characterization through the V7V8 region indicated that these strains belong to DTUs TcI, TcII and TcIII. The groups segregation is important to compare the proteic profile of epimastigotes and tripomastigotes forms of T. cruzi. The groups TcI presented more proteins in acrylamide gels, which can be associated with intra-specif of TcI. The metalloproteinase action was observed in epimastigotes and tripomastigotes forms, demonstrating active and stable presence at the parasite life cycle. The serological reactivity was proven in the groups TcI, TcII and TcIII through ELISA dilutions of 1/100 to 1/12.800. Moreover, the Western Blotting technique was added to SDS-PAGE experiments in infected animals¿ serum after 50 dias and the proteic profile of Y strain was observed in nitrocellulose membrane. The results demonstrated that these eleven strains of T. cruzi have differences between the groups of the parasite. The group TcI showed higher infection rate in cells; TcII, higher value for kinetic growth and TcIII is phylogenetically closer to TcV, which is a hybrid group. The association between parasite and host is able to explain the biological and molecular differences in T. cruzi strains; for this reason, the study of eleven strains isolated from different hosts can add information to the literature and clarify some of the biological aspects of the parasite
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Rosa, João Aristeu
Orientador
Steindel, Mário
Coorientador
Albuquerque, Sergio de
Avaliador
Martins, Luciamare Perinetti Alves
Avaliador
Pinto, Mara Cristina
Avaliador
Caracterização biológica e molecular de cepas de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) isoladas da Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo
Aline Rimoldi Ribeiro
Caracterização biológica e molecular de cepas de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) isoladas da Bahia, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo
Aline Rimoldi Ribeiro
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