Orientador: Adriana Franco Paes Leme

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A metaloprotease ADAM17 é uma das mais importantes reguladoras dos mecanismos de sinalização celular, pois é responsável pela liberação de ectodomínios de proteínas de superfície participando da regulação de processos fisiológicos, mas também tem sido associada à progressão de tumores e...

Resumo: A metaloprotease ADAM17 é uma das mais importantes reguladoras dos mecanismos de sinalização celular, pois é responsável pela liberação de ectodomínios de proteínas de superfície participando da regulação de processos fisiológicos, mas também tem sido associada à progressão de tumores e processos inflamatórios. Este estudo buscou entender a regulação da atividade proteolítica da ADAM17 por meio do seu domínio citoplasmático. Para isso, foi utilizada uma abordagem de co-imunoprecipitação seguida por análise dos parceiros de interação por espectrometria de massas. Dentre os parceiros identificados, a tioredoxina-1 (Trx-1) foi o alvo escolhido e a interação com o domínio citoplasmático da ADAM17 foi validada em experimentos complementares de microscopia confocal, ensaio de ligação em fase sólida, ressonância magnética nuclear e determinação da interface de interação por ligação química seguida de análise por espectrometria de massas. Experimentos funcionais para entender o papel funcional dessa interação foram realizados e é interessante notar que a superexpressão de Trx-1 diminui a atividade proteolítica da ADAM17 sobre o substrato HB-EGF, resultado obtido utilizando metodologia baseada em cultura de células. A descoberta de um novo parceiro de interação da ADAM17, capaz de modular a sua ativação permitirá que novos trabalhos sejam realizados para entender o mecanismo pelo qual essa metaloprotease atua

Abstract: ADAM17 is a metalloprotease which plays an important role in regulatory mechanisms of cell signaling. It is responsible for shedding of the surface proteins, participating in regulation of important physiological processes, but it has also been associated with cancer progression and...

Abstract: ADAM17 is a metalloprotease which plays an important role in regulatory mechanisms of cell signaling. It is responsible for shedding of the surface proteins, participating in regulation of important physiological processes, but it has also been associated with cancer progression and inflammatory processes. The aim of this study was to explore the regulation of ADAM17 by its cytoplasmic domain. In this regard, we used an approach based on co-immunoprecipitation followed by mass spectrometry (MS). Among the identified partners, the thioredoxin-1 (Trx-1) was selected, and its interaction has been validated using confocal microscopy, solid-phase binding assay, nuclear magnetic resonance and chemical cross-linking followed by MS. To understand the functional role of this interaction, experiments using cell-based assay were performed. Trx-1 overexpression decreases HB-EGF shedding upon ADAM17 activation. The discovery of a new interaction partner of ADAM17, which can modulate its activation, gives insights for novel studies to understand the mechanism of action of this metalloprotease