Orientadores: Andrei Carvalho Sposito, Eliana Cotta de Faria

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas

Resumo: Atualmente aproximadamente 17 milhões de pessoas morrem por doenças cardiovasculares (DCV). No Brasil durante 2011 ocorreram cerca de 200 mil óbitos por DCV principalmente em decorrência da aterosclerose, classificada como uma doença imuno-inflamatória crônica que causa estreitamento luminal...

Resumo: Atualmente aproximadamente 17 milhões de pessoas morrem por doenças cardiovasculares (DCV). No Brasil durante 2011 ocorreram cerca de 200 mil óbitos por DCV principalmente em decorrência da aterosclerose, classificada como uma doença imuno-inflamatória crônica que causa estreitamento luminal e gera diversas fatalidades como infarto agudo do miocárdio (IAM), acidente vascular encefálico (AVE), doença arterial periférica (DAP), entre outras. A DAP prediz outras DCV e é a principal causa de amputação devido a obstrução das artérias de membros inferiores. Análises histológicas indicam que a ruptura da placa, capa fibrosa do ateroma, erosão da placa e nódulo calcificado geram as principais fatalidades nas DCV. Até o momento não há biomarcadores plasmáticos para uso clínico afim de avaliar a estabilidade e a gravidade das placas ateroscleróticas, esse fato motiva a exploração de componentes envolvidos em doenças imuno-inflamatórias e no metabolismo lipídico tais como oxisteróis e marcadores da síntese e absorção do colesterol (MSAC). Os oxisteróis, principalmente 27-hidroxicolesterol (27-HDC) e 7-ketocolesterol estão envolvidos em mecanismos fisiopatológicos da aterosclerose e desempenham um papel na inflamação, citotoxicidade e necrose, além de funções no metabolismo lipídico. É relatado que os oxisteróis 24S- e 25-hidroxicolesterol (24S- e 25-HDC) estão envolvidos em doenças neurodegenerativas como Alzheimer. Estudos apontam uma causa em comum entre Alzheimer e aterosclerose, ambas são doenças inflamatórias crônicas, assim são necessárias mais investigações desses oxisteróis na doença aterosclerótica. A proteína de transferência de éster de colesterol (CETP) e proteína de transferência de fosfolípides (PLTP), assim como as lipoproteínas, podem mediar a transferência desses lípides. O objetivo desse trabalho foi quantificar concentrações de oxisteróis (24S-, 25-, 27-HDC e 7-ketocolesterol) e marcadores de síntese (desmosterol e latosterol) e absorção (?-sitosterol e campesterol) do colesterol em ateromas e plasma de 10 indivíduos com DAP (grupo DAP) e comparar com artérias sem ateroma de 13 voluntários (grupo CTL). Também relacionar esses esteróis com outros parâmetros como histórico clínico e proteínas de transferência de lípides. Foram realizadas análises clínicas e bioquímicas, classificações histológicas dos ateromas e quantificações de esteróis em artérias e plasma. Para interpretação dos dados obtidos foram usados testes estatísticos de comparação e correlação. Os dois grupos apresentaram uma similaridade nos dados clínicos e bioquímicos, diferenciando apenas em pressão arterial sistólica, atividade da PLTP, glicose e proteína C reativa (PCR), maiores no grupo DAP. A PCR se correlacionou positivamente com 24S-HDC, 25-HDC e 27-HDC plasmáticos. Comparação entre os grupos em relação a concentração de oxisteróis em artérias mostraram o 24S-HDC e o 27-HDC maiores no ateroma do grupo DAP, curiosamente o 25-HDC esteve maior em CTL. Quantificações de oxisteróis em plasma do grupo DAP mostrou um aumento do 25-HDC em relação ao grupo CTL. Não houve diferença significante para os MSAC. Os ateromas classificaram-se em 50% ruptura da placa, 20 % capa fibrosa do ateroma, 10% nódulo calcificado e 10% lesão fibrocálcica. Em conclusão mostramos o acumulo do 24S-HDC em placas de aterosclerose. O 27-HDC assim como outros estudos esteve em maior concentração nos ateromas indicando fortemente sua ação na patogênese dessa doença. Todos os oxisteróis sintetizados enzimaticamente dosados em plasma se correlacionaram positivamente com atividade inflamatória sistêmica, assim como 24S-HDC e 27-HDC em ateromas. Finalmente a atividade da PLTP esteve maior no grupo DAP

Abstract: Currently around 17 million people die from cardiovascular diseases (CVD). In Brazil, durant 2011 nearly 200.000 deaths occur mainly due atherosclerosis, classified as a chronic, immune-inflammatory disease that causes luminal narrowing and generates several outcomes as myocardial...

Abstract: Currently around 17 million people die from cardiovascular diseases (CVD). In Brazil, durant 2011 nearly 200.000 deaths occur mainly due atherosclerosis, classified as a chronic, immune-inflammatory disease that causes luminal narrowing and generates several outcomes as myocardial infarction, cerebrovascular accidents (stroke), peripheral arterial disease (PAD) and others. DAP predict other CVDs and is the leading cause of amputation due the clogged arteries in inferior members. Histological analysis indicates that plaque rupture, fibrous cap atheroma, plaque erosion and calcified nodules generate major CVD fatalities. So far, no plasma biomarkers for clinical use are available in order to evaluate the stability and extend of atherosclerotic plaques, therefore is necessary the investigation of the components involved in immune-inflammatory diseases and lipids metabolism such as oxysterols and cholesterol synthesis and absorption markers (CSAM). Oxidized sterols or oxysterols, manly 27-hidroxycholesterol and 7-ketocholesterol are involved in pathophysiological mechanisms of atherosclerosis and play a role in inflammation, apoptosis, necrosis and cytotoxicity, in addiction to lipid metabolism. Oxysterols 24S- and 25-hidroxycholesterol are involved with neurodegenerative diseases such Alzheimer¿s and resemble with atherosclerosis development since are chronical inflammatory diseases, for this reason is necessary an investigation of these oxysterols in atherosclerosis is needed. Cholesteryl ester transfer protein (CETP) and phospholipid transfer protein (PLTP) as well as lipoproteins, could mediate the transfer of the oxysterols. The aim of this work was quantified the levels of oxysterols (24S- 25-, 27- hidroxycholesterol and 7-ketocholesterol) and cholesterol synthesis (desmosterol and lathosterol) and absorption markers (?-sitosterol and campesterol) in atheroma and plaques from 10 individuals with PAD (PAD group) and compare with arteries without atheroma of 13 volunteers (CTL group). Also, relate these sterols with other parameters as clinical history, lipid transfer proteins and histological scores. Clinical and biochemical data were collected and sterols were quantified in arteries and plasma by gas chromatography coupled to a mass spectrophotometer (GCMS) and histological atheroma classification were determined. Comparison anlysis were performed using Mann-Whitney and correlations by Spearman¿s test. Both groups were not different regarding clinical and biochemical data, differencing only for systolic blood pressure, alcohol intake, PLTP activity, glucose and CRP, increased in PAD group. CRP was positively correlated with 24S-HDC, 25-HDC e 27-HDC from plasma. The comparisons of oxysterols levels in atheroma showed that 24-HDC and 27-HDC were increased in PAD group; interestingly, the 25-HDC was higher in CTL group. No significant differences were observed for CSAM between groups. The atheroma were classified as 50% plaque rupture, 20% fibrous cap, 10% calcified nodules and 10% of fibrocalcific injury. From the oxysterols from plasma of PAD group, only 25-HDC was increased compared to the CTL group. In conclusion, we demonstrated the accumulation of 24S-HDC in atherosclerotic plaques. The 27-HDC, as well as other studies, present higher levels in atheroma¿s, strongly indicating is role in the disease pathogenesis. All oxysterols measured in plasma were positively correlated with the systemic inflammatory activity. Finally, all atherosclerotic plaques were classified as lesions of advanced extension, according to the histological analysis