Avaliação da citotoxicidade do peroxidode carbamida e do efeito protetor do ascorbato de sodio sobre celulas odontoblasticas MDPC-23
Adriano Fonseca Lima
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP L628a
[Evaluation of cytotoxity of carbamide peroxide and protector effect of sodium ascorbate on odontoblast-like cells MDPC-23]
Piracicaba, SP : [s.n.], 2009.
82 f. : il.
Orientadores: Giselle Maria Marchi, Carlos Alberto de Souza Costa
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram: a) avaliar os efeitos citotóxicos diretos e transdentinário de diferentes concentrações de peróxido de carbamida (PC) sobre as células de linhagem odontoblástica MDPC-23; b) avaliar o efeito protetor (antioxidante) do ascorbato de sódio (AS) sobre...
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Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram: a) avaliar os efeitos citotóxicos diretos e transdentinário de diferentes concentrações de peróxido de carbamida (PC) sobre as células de linhagem odontoblástica MDPC-23; b) avaliar o efeito protetor (antioxidante) do ascorbato de sódio (AS) sobre estas células expostas a agentes clareadores, na forma direta e transdentinária; c) avaliar o montante de peróxido de hidrogênio (H2O2) liberado por agentes clareadores a base de PC 10% e 16% que se difunde através de discos de dentina com 0,5mm de espessura. No Experimento 1, células odontoblásticas foram cultivadas em wells e incubadas por 48 horas. O gel clareador foi solubilizado em meio de cultura (DMEM) originando diferentes extratos, e a quantidade (µg/mL) de H2O2 liberado em cada extrato foi mensurada através da técnica de leucocristais violeta/enzima horseradish peroxidase (LCV/HRP). Os seguintes grupos foram estabelecidos (n=10): G1-DMEM sem gel clareador (controle); G2-0,0001% PC (0,025µg/ml de H2O2); G3-0,001% PC (0,43µg/ml de H2O2); G4-0,01% PC (2,21µg/ml de H2O2); e G5-0,1% PC (29.74µg/ml de H2O2). As células foram expostas por 60 minutos aos diferentes extratos, e então realizada a análise da viabilidade celular (Teste de MTT). Somente os grupos 2 e 3 não apresentaram diferença estatística quando comparados ao controle (G1) (p>0,05). Os maiores efeitos citotóxicos foram observados para G4 e G5, sendo que G5 foi estatisticamente diferente que G4, apresentando-se mais tóxico às células. No experimento 2, células MDPC-23 foram cultivadas e incubadas por 48h. O PC e o AS foram solubilizados em meio de cultura (DMEM), para obtenção dos extratos experimentais. Os seguintes grupos foram estabelecidos: G1-DMEM sem gel clareador (controle); G2- 0,25mM de AS; G3-0,5mM de AS; G4-0,25mM de AS + 0,01% de PC; e G5-0,5mM de AS + 0,01% PC e G6-0,01% de PC. As células foram expostas por 60 minutos aos diferentes extratos, e depois foi realizado o teste de MTT. O grupo 6 apresentou a maior citotoxicidade quando comparado com os demais grupos, enquanto que o AS produziu uma diminuição dos efeitos citotóxicos do agente clareador, demonstrando uma proteção frente aos componentes deste produto. No Experimento 3, discos de dentina (0,5mm de espessura) obtidos de terceiros molares humanos foram fixados em uma câmara pulpar artificial (CPA). As células odontoblásticas foram semeadas na superfície pulpar dos discos, e os seguintes grupos foram estabelecidos: Grupo 1 - Sem tratamento (Controle); Grupo 2 - Antioxidante 10% (AS)/6h; Grupo 3- Peróxido de Carbamida (PC) 10% /6h; Grupo 4- AS10%/6h+PC10%/6h; Grupo 5- PC16% /6h; Grupo 6- AS10%/6h+PC16%/6hs. Após os tratamentos, foi realizado o teste de MTT. A difusão de H2O2 somente para os grupos 3 e 5 foi mensurada através da técnica de LCV/HRP. Todos os grupos foram estatisticamente semelhantes, exceto o G6. O PC 16% apresentou a maior difusão transdentinária. Pode-se concluir que o PC apresenta efeitos citopáticos para as células odontoblásticas MDPC-23, na forma direta ou transdentinária e que esta citotoxicidade é dose-dependente. O ascorbato de sódio possui a capacidade de reduzir os efeitos citotóxicos do peróxido de carbamida, sobre estas mesmas células em cultura.
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Abstract: The aims of this present study were: a) to evaluate the direct and transdentinal cytotoxic effects of carbamide peroxide (CP) bleaching gel at different concentrations on odontoblast-like cells MDPC-23; b) to evaluate the protective effect (antioxidizing) of sodium ascorbate (SA) on these...
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Abstract: The aims of this present study were: a) to evaluate the direct and transdentinal cytotoxic effects of carbamide peroxide (CP) bleaching gel at different concentrations on odontoblast-like cells MDPC-23; b) to evaluate the protective effect (antioxidizing) of sodium ascorbate (SA) on these cells expose to bleaching agents, on direct and transdentinal mode; c) to evaluate the amount of hydrogen peroxide (H2O2) released by bleaching agents based to CP 10% and 16%, that diffuses through dentin discs with 0.5mm thickness. In Experiment 1, odontoblastic cells were seeded in wells and incubated for 48 hours. The bleaching gel was diluted in DMEM culture medium originating different extracts, and the amount (µg/mL) of H2O2 released from each extract was measured by the leukocrystal violet/horseradish peroxidase enzyme (LCV/HRP) assay. The following groups were established (n=10): G1-DMEM without bleaching gel (control); G2-0.0001% CP (0.025 µg/mL H2O2); G3-0.001% CP (0.43 µg/mL H2O2); G4-0.01% CP (2.21 µg/mL H2O2); and G5-0.1% CP (29.74 µg/mL H2O2). MDPC-23 cells were exposed to the bleaching gel extracts for 60 minutes and then performed the cell viability analysis (MTT assay). Only G2 and G3 were not significantly different from control group (G1) (p>0.05). The most severe cytotoxic effects were observed in G4 and G5, and G5 was statistically different to G4, presenting more toxic to the cells. In Experiment 2, MDPC-23 cells were seeded in wells and incubated for 48 hours. CP and SA were dissolved in culture medium (DMEM) in order to obtain the experimental extracts. The following groups were established: G1-no treatment (control); G2-0,25mM SA; G3-0,5mM SA; G4-0,25mM SA + 0,01% CP; e G5-0,5mM SA + 0,01% CP e G6-0,01% CP. The cells were expose to different extracts for 60 min, and then was performed the MTT assay and. Group 6 presented higher cytotoxicity than the other groups, while the SA decreased the cytotoxic effects caused by CP, demonstrating its protective effect against the toxic components of this dental product. In Experiment 3, dentin discs (0.5mm thick) obtained from human third molars were fixed in an artificial pulp chamber (APC). The odontoblastic cells were seeded on pulp surface of the discs, and the following groups were established: Group 1 - No treatment (Control); Group 2 - Antioxidizing 10% (SA)/6h; Group 3- Carbamide Peroxide (CP) 10%/6h; Group 4- SA10%/6h+CP10%/6h; Group 5- CP16%/6h; Group 6- SA10%/6h+CP16%/6hs. After the treatments, MTT assay was performed. The H2O2 diffusion only to the groups 3 and 5 was measured by the LCV/HRP assay. All groups were statistically similar, except G6. The CP 16% presented the higher transdentinal diffusion. It can be conclude that CP presents citotoxic effects to the odontoblastic-like cells MDPC-23, in direct and transdentinal mode and this citotoxicity is dose-dependent. The sodium ascorbate was able to reduce the cytotoxic effects the concentration of 0.1% of PC caused the most intense cytopathic effects of carbamide peroxide on the same cells in culture.
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Marchi, Giselle Maria, 1970-
Orientador
Costa, Carlos Alberto de Souza
Coorientador
Cavalli, Vanessa, 1977-
Avaliador
Aguiar, Flavio Henrique Baggio, 1977-
Avaliador
Avaliação da citotoxicidade do peroxidode carbamida e do efeito protetor do ascorbato de sodio sobre celulas odontoblasticas MDPC-23
Adriano Fonseca Lima
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