Caracterização do complexo proteolitico proteassoma em Strongyloides venezuelensis
Fabiana Martins de Paula
TESE
Português
(Broch.)
T/UNICAMP P281c
Campinas, SP : [s.n.], 2004.
90p. : il.
Orientadores: Vanderlei Rodrigues, Marlene Tiduko Ueta
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios...
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Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios bioquímicos e da caracterização de alguns componentes deste complexo multienzimático. Este nematódeo é utilizado como modelo experimental para o estudo da estrongiloidíase humana, uma helmintíase com alta prevalência em regiões tropicais e subtropicais. Para tanto, foram obtidos dois estágios de desenvolvimento de S. venezuelensis a partir de infecções experimentais em Rattus norvegicus, o estágio infectante de vida-livre (larva filarioíde, L3) e o parasitário (fêmea partenogenética, F). Para os ensaios bioquímicos foram obtidos os extratos brutos de ambos estágios, os quais foram submetidos aos ensaios de atividades (quimiotripsina e tripsina-símile), utilizando substratos sintéticos fluorogênicos, na presença e na ausência de inibidores específicos do proteassoma 26S (MG132 e PSI). Além disso, o extrato foi submetido ao SDS-PAGE, seguido pela técnica de ¿Western-blot¿ utilizando anticorpos específicos para o proteassoma 20S e para ubiquitina. Para os experimentos moleculares foram obtidos RNA de ambos os estágios, os quais foram submetidos a amplificações utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos para as subunidades alfa 6 e beta 6 do proteassoma 20S (¿core¿ proteolítico) e as subunidades ATPase 3 e S5a do complexo regulatório 19S do proteassoma 26S. O DNA genômico foi amplificado para todas as subunidades com exceção da S5a. Os produtos de amplificação obtidos foram submetidos à busca de homologia no banco de dados, após sequenciamento dos mesmos. Os resultados confirmaram a presença do proteassoma 26S no nematódeo S. venezuelensis, através da atividade específica de quimiotripsina e tripsina-símile e a presença de bandas protéicas características reveladas pelos anticorpos específicos, bem como pela análise molecular das subunidades. No entanto, novos
estudos serão necessários para inferir a importância deste complexo multienzimático neste parasita Ver menos
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Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and...
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Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and identifying some components of this multienzymatic complex. This nematode has been used as a model and tool for the studies on strongyloidiasis, a helminthiasis of high prevalence in tropical and subtropical regions. In this study, two development stages of S. venezuelensis, namely infective larvae (third-stage larvae) and parasitic stages, were used for experimental infections in Rattus norvegicus. In biochemical experiments the crude extracts of the both stages were submitted at proteolytic activities (chymotrypsin-like and trypsin-like) using fluorogenic peptides in presence and absence of proteasome inhibitors (MG132 and PSI). Moreover, the crude extracts were submitted at SDS-PAGE and western-blot methods using specifics antibodies. In molecular experiments, RNA of both stages were amplifed with specific oligonucleotides to alfa 6 and beta 6 subunits of the 20S proteasome (proteolytic core) and ATPase 3 and S5a of the regulatory particle (19S). The genomic DNA was amplifed to all subunits, excepting of S5a subunit. Results show the presence of the 26S proteasome in proteolytic activities from S. venezulensis of the chymotrypsin-like and trypsin-like and the presence of the labeled bands by the antibodies, as well as molecular analysis of the subunits. However, new studies will be necessary to define the importance of these multienzymatic complex on the parasite biology
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Rodrigues, Vanderlei
Orientador
Ueta, Marlene Tiduko, 1941-
Coorientador
costa-Cruz, Julia Maria
Avaliador
Brocchi, Marcelo, 1967-
Avaliador
Allegretti, Silmara Marques, 1963-
Avaliador
Giorgio, Selma, 1962-
Avaliador
Guaraldo, Ana Maria Aparecida, 1951-2015
Avaliador
Caracterização do complexo proteolitico proteassoma em Strongyloides venezuelensis
Fabiana Martins de Paula
Caracterização do complexo proteolitico proteassoma em Strongyloides venezuelensis
Fabiana Martins de Paula
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