Resumo: Introdução: A doença de Crohn (DC) é uma inflamação crônica do trato gastrointestinal, cuja patofisiologia envolve interações complexas entre o sistema imunológico e o tecido intestinal, com destaque para o papel das citocinas pró-inflamatórias, como o Fator de Necrose Tumoral (TNF-a), na manutenção do processo inflamatório. O adalimumabe, um anticorpo monoclonal humano que neutraliza o TNF-a, contribui para a regulação da inflamação associada à DC, embora possa induzir processos imunogênicos, comprometendo a eficácia terapêutica. Assim, o monitoramento dos níveis séricos e de anticorpos anti-droga (ADA) é sugerido para otimizar a terapia. Além disso, o estudo de fatores genéticos que influenciam a resposta ao adalimumabe pode esclarecer as relações entre genética, imunologia e clínica na DC. Objetivo: Quantificar o nível sérico de adalimumabe, e avaliar a intercambialidade entre os testes de níveis séricos. Além, detectar a presença de ADA, avaliar a formação de complexos imunes e investigar os fenótipos genéticos associados à imunogenicidade em pacientes com DC acompanhados no Ambulatório de Doenças Inflamatórias Intestinais do Gastrocentro e no Ambulatório de Diarreias do Hospital das Clínicas - Unicamp. Métodos: O estudo incluiu 70 pacientes em fase de manutenção que utilizavam o adalimumabe, tendo sidos subdivididos em atividade (DCA) e em remissão (DCR). Amostras de sangue periférico foram processadas para obtenção de soro e DNA genômico. A concentração de adalimumabe foi determinada por ensaios de imunoabsorção enzimática (Promonitor) e ensaio de fluxo lateral (Quantum Blue). A intercambiabilidade entre os ensaios foi comparada pela análise de regressão Passing-Bablok e Bland-Altman. A presença de ADA e a formação de complexos imunes foram quantificadas por ensaios de ELISA. O DNA genômico foi genotipado para ATG16L1, CD96 e CD155. Resultados: As concentrações séricas de adalimumabe não apresentaram diferenças significativas entre os grupos, independentemente do ensaio. Uma diferença estatística foi observada entre os ensaios, indicando disparidade nas medidas (p=0,003), com concordância moderada. ADA foram detectados em 4 dos 27 pacientes com níveis infraterapêuticos, sendo 3 no grupo com DCA e 1 no grupo DCR. A análise dos complexos imunes revelou concentrações significativamente mais elevadas no grupo DCA (p=0,0125). A avaliação genotípica indicou associações significativas entre o genótipo CD96 CC (selvagem) e níveis elevados de proteína C-reativa, envolvimento colônico e níveis infraterapêuticos de adalimumabe. O genótipo ATG16L1 CC foi associado a valores mais elevados de Índice de Atividade Endoscópica da Doença de Crohn e calprotectina fecal, enquanto o genótipo variante (TT) apresentou contagens de plaquetas mais baixas. Conclusão: Este estudo evidenciou que a eficácia do tratamento com adalimumabe não se correlaciona diretamente com concentrações mais elevadas do fármaco nesta coorte. A variabilidade entre os ensaios analisados aponta para a importância de um método único de teste no acompanhamento do paciente, visando maior precisão no monitoramento terapêutico. Observou-se uma associação entre o genótipo selvagem para CD96 e ATG16L1 e respostas laboratoriais e endoscópicas desfavoráveis ao adalimumabe. Além disso, os níveis elevados de complexos imunes no grupo DCA sugerem uma correlação com a resposta inadequada ao tratamento com adalimumabe Ver menos

Abstract: Introduction: Crohn's disease (CD) is a chronic inflammation of the gastrointestinal tract, whose pathophysiology involves complex interactions between the immune system and intestinal tissue, with emphasis on the role of pro-inflammatory cytokines, such as Tumor Necrosis Factor (TNF-a), in maintaining the inflammatory process. Adalimumab, a human monoclonal antibody that neutralizes TNF-a, contributes to regulating inflammation associated with CD, although it can induce immunogenic processes, compromising therapeutic efficacy. Therefore, monitoring serum levels and anti-drug antibodies (ADA) is suggested to optimize therapy. In addition, studying genetic factors that influence the response to adalimumab may clarify the relationships between genetics, immunology, and clinical features in CD. Objective: To quantify the serum level of adalimumab and evaluate the interchangeability between serum-level tests. In addition, this study aimed to detect the presence of ADA, evaluate the formation of immune complexes, and investigate the genetic phenotypes associated with immunogenicity in patients with CD followed at the Inflammatory Bowel Disease Outpatient Clinic of the Gastrocentro and the Diarrhea Outpatient Clinic of the Hospital das Clínicas - Unicamp. Methods: The study included 70 patients in the maintenance phase who used adalimumab, having been subdivided into active (DCA) and remission (DCR). Peripheral blood samples were processed to obtain serum and genomic DNA. The adalimumab concentration was determined by enzyme-linked immunosorbent (Promonitor) and lateral flow (Quantum Blue) assays. The interchangeability between the assays was compared using the Passing-Bablok and Bland-Altman regression analysis. The presence of ADA and the formation of immune complexes were quantified by ELISA assays. Genomic DNA was genotyped for ATG16L1, CD96, and CD155. Results: Serum adalimumab concentrations did not differ significantly between groups, regardless of the assay. A statistical difference was observed between assays, indicating disparity in measurements (p=0.003), with moderate agreement. ADA was detected in 4 of 27 patients with subtherapeutic levels, 3 in the DCA group and 1 in the DCR group. Immune complex analysis revealed significantly higher concentrations in the DCA group (p=0.0125). The genotypic evaluation indicated significant associations between the CD96 CC (wild-type) genotype and elevated C-reactive protein levels, colonic involvement, and subtherapeutic adalimumab levels. The ATG16L1 CC genotype was associated with higher Crohn's Disease Endoscopic Activity Index and fecal calprotectin values, while the variant genotype (TT) showed lower platelet counts. Conclusion: This study showed that the efficacy of adalimumab treatment does not directly correlate with higher drug concentrations in this cohort. The variability between the assays analyzed points to the importance of a single test method in patient follow-up, aiming at greater precision in therapeutic monitoring. An association was observed between the wild-type genotype for CD96 and ATG16L1 and unfavorable laboratory and endoscopic responses to adalimumab. Furthermore, the high levels of immune complexes in the DCA group suggest a correlation with inadequate response to adalimumab treatment Ver menos