Resumo: Introdução: A síndrome antifosfolípide (SAF) é uma doença autoimune sistêmica caracterizada pela presença persistente de anticorpos antifosfolípides no plasma e apresenta como principais manifestações clínicas a trombose vascular, de origem arterial ou venosa, e as complicações obstétricas. Objetivo: Avaliar a agregação plaquetária em pacientes com SAF primária trombótica e caracterizar as vias de sinalização purinérgica e dos nucleotídeos cíclicos. Metodologia: Quarenta voluntários com SAF primária trombótica (62,5% mulheres) e 62 voluntários sem histórico de trombose (64,5% mulheres) foram incluídos. Primeiramente, o plasma rico em plaquetas (PRP) foi obtido e estimulado com difosfato de adenosina (ADP, 3 ou 10 µM), colágeno (1 µg/ml) ou ácido araquidônico (AA, 300 µM), na presença e ausência dos respectivos inibidores e fármacos antiplaquetários: nitroprussiato de sódio (SNP, 3 ou 10 µM), iloprost (ILO, 3 ou 10 nM) e ticagrelor (2 µM). Em seguida, a plaqueta lavada (PL) de pacientes com SAF foi obtida para a quantificação do receptor P2Y12 e dos nucleotídeos cíclicos. Em outro ensaio, a PL de voluntários saudáveis foi incubada com anticorpos IgG (500 µg/mL) isolados do soro de voluntários saudáveis ou pacientes com SAF e então estimulada com ADP 30 µM na presença e ausência dos mesmos inibidores e fármacos antiplaquetários. Resultados: A agregação induzida pelo ADP foi significativamente maior no PRP obtido de pacientes com SAF do que no controle. A expressão proteica do receptor P2Y12 e da Gs alfa foi significativamente maior e menor, respectivamente, na PL de pacientes com SAF. No PRP incubado com ILO ou SNP, a reatividade plaquetária residual induzida pelo ADP foi ainda maior no PRP de pacientes com SAF do que no controle. Níveis intracelulares mais baixos de AMPc e GMPc foram observados no PRP não estimulado de pacientes com SAF. A expressão proteica das subunidades da guanilato ciclase solúvel e das fosfodiesterases tipos 3 e 5 não diferiu. A atividade antiplaquetária do ticagrelor foi semelhante entre os grupos e o cilostazol potencializou significativamente essa resposta. Anticorpos antifosfolípides isolados obtidos de pacientes com SAF potencializaram a agregação induzida por ADP em plaquetas saudáveis, mas não afetaram as respostas inibitórias induzidas por SNP ou ILO Conclusão: As plaquetas isoladas de pacientes com SAF primária trombótica apresentaram alteração na via P2Y12 – AMPc e nos níveis intracelulares de GMPc. Além disso, o estudo abre a possibilidade para avaliar a eficácia e segurança da terapia com ticagrelor, isolado ou em associação com o cilostazol, em pacientes com SAF e trombose arterial que sejam resistentes ou intolerantes à aspirina Ver menos

Abstract: Introduction: Antiphospholipid syndrome (APS) is a systemic autoimmune disease characterized by the persistent presence of antiphospholipid antibodies in the plasma, with its main clinical manifestations being vascular thrombosis of arterial or venous origin and obstetric complications. Objective: To evaluate platelet aggregation in patients with primary thrombotic APS and characterize the purinergic signaling pathways and cyclic nucleotides. Methodology: Forty volunteers with primary thrombotic APS (62.5% women) and 62 volunteers without a history of thrombosis (64.5% women) were included. Firstly, platelet-rich plasma (PRP) was obtained and stimulated with adenosine diphosphate (ADP, 3 or 10 µM), collagen (1 µg/ml), or arachidonic acid (AA, 300 µM), in the presence and absence of respective inhibitors and antiplatelet drugs: sodium nitroprusside (SNP, 3 or 10 µM), iloprost (ILO, 3 or 10 nM), and ticagrelor (2 µM). Then, washed platelets (WP) from APS patients were obtained for quantification of the P2Y12 receptor and cyclic nucleotides. In another assay, WP from healthy volunteers were incubated with IgG antibodies (500 µg/mL) isolated from the serum of healthy volunteers or APS patients and then stimulated with ADP 30 µM in the presence and absence of the same inhibitors and antiplatelet drugs. Results: ADP-induced aggregation was significantly higher in PRP obtained from APS patients compared to controls. Protein expression of the P2Y12 receptor and Gs alpha was significantly higher and lower, respectively, in WP from APS patients. In PRP incubated with ILO or SNP, residual platelet reactivity induced by ADP was even higher in PRP from APS patients compared to controls. Lower intracellular levels of cAMP and cGMP were observed in unstimulated PRP from APS patients. Protein expression of soluble guanylate cyclase subunits and phosphodiesterase types 3 and 5 did not differ. Ticagrelor's antiplatelet activity was similar between groups, and cilostazol significantly potentiated this response. Antiphospholipid antibodies isolated from APS patients potentiated ADP-induced aggregation in healthy platelets but did not affect inhibitory responses induced by SNP or ILO. Conclusion: Platelets isolated from patients with primary thrombotic APS showed alterations in the P2Y12 – cAMP pathway and intracellular levels of cGMP. Furthermore, the study opens the possibility to evaluate the efficacy and safety of ticagrelor therapy, alone or in combination with cilostazol, in APS patients with arterial thrombosis who are resistant or intolerant to aspirin Ver menos