Resumo: A linhagem de camundongos NOD (non-obese diabetic) é o modelo experimental mais utilizado para estudar o Diabetes mellitus tipo 1 (DM-1) por desenvolver espontaneamente a doença semelhante à observada em humanos, tendo como característica marcante desse modelo a insulite, definida como infiltração de células inflamatórias nas ilhotas pancreáticas. Células dendríticas (DCs) e macrófagos são células apresentadoras de antígenos (APCs), presentes em grandes quantidades no pâncreas de camundongos NOD e desempenham papel importante na iniciação e progressão da resposta autoimune até o processo final onde ocorre a destruição das células beta pancreáticas. A expressão da enzima indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO), é um fator importante para a atividade tolerogênica das DCs, atuando no catabolismo do triptofano e produzindo metabólitos que suprimem os linfócitos T efetores e estimulam a diferenciação das células T reguladoras. No presente estudo investigamos os mecanismos in vitro pelos quais o tratamento com o extrato aquoso liofilizado das folhas de Passiflora alata (EALFPA) podem modular as células apresentadoras de antígenos derivadas da medula óssea (BM-APCs) e influenciar sua capacidade de polarizar linfócitos T. O modelo in vitro foi estabelecido utilizando culturas mistas de células apresentadoras de antígenos provenientes da medula óssea (BM-APCs) e linfócitos T de camundongos NOD, juntamente com células MIN6 (linhagem de células beta produtoras de insulina) sob estresse como fonte de antígenos de células ? pancreáticas. Mostramos que a concentração de 300 µg/mL com EALFPA reduziu a proliferação de linfócitos T efetores CD4 e CD8 em camundongos diabéticos, mas não em camundongos não diabéticos, e diminuiu a liberação de citocinas IL-6 e IFN-? nos sobrenadantes das culturas celulares. Além disso, observamos o aumento de linfócitos T reguladores (Tregs) CD4+CD25+FoxP3+ de camundongos diabéticos. Esses resultados podem ser parcialmente explicados pelos efeitos do EALFPA em BM-APCs, onde regulam negativamente a expressão da molécula coestimuladora CD86 e aumentam a expressão de IDO-1 em F4/80+ BM-APCs. Os resultados apresentados nos permite um melhor entendimento das propriedades imunomoduladoras dos polifenóis presentes nas folhas de P. alata, ou seja, sugerem indução das células apresentadoras de antígenos tolerogênicas com polarização para um perfil de Treg diminuindo a atividade dos linfócitos T efetores CD4+ e CD8+, contribuindo assim para a melhor compreensão de seus efeitos antiinflamatórios e com a possível translacionalidade para protocolos clínicos e interferência na evolução do diabetes autoimune Ver menos

Abstract: The strain of NOD (non-obese diabetic) mice is the most used experimental model to study Type 1 Diabetes Mellitus (DM-1) because it spontaneously develops a disease similar to that observed in humans, with insulitis as a striking feature of this model, defined as infiltration of inflammatory cells into the pancreatic islets. Dendritic cells (DCs) and macrophages are antigen-presenting cells (APCs), present in large amounts in the pancreas of NOD mice and play an important role in the initiation and progression of the autoimmune response to the final process where the destruction of pancreatic beta cells occurs. The expression of the enzyme indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO), is an important factor for the tolerogenic activity of DCs, acting in the catabolism of tryptophan and producing metabolites that suppress effector T lymphocytes and stimulate the differentiation of regulatory T cells. In the present study, we investigated the in vitro mechanisms by which treatment with lyophilized aqueous extract of Passiflora alata leaves (LAEPAL) can modulate bone marrow-derived antigen-presenting cells (BM-APCs) and influence their ability to polarize T lymphocytes. The in vitro model was established using mixed cultures of bone marrow antigen-presenting cells (BM-APCs) and T lymphocytes from NOD mice, together with MIN6 cells (insulin-producing beta cell line) under stress as a source of pancreatic ? cells antigens. We showed that the concentration of 300 µg/mL with EALFPA reduced the proliferation of CD4 and CD8 effector T lymphocytes in diabetic mice but not in non-diabetic mice and decreased the release of IL-6 and IFN-? cytokines in cell culture supernatants. Furthermore, we observed increased regulatory T lymphocytes (Tregs) CD4+CD25+FoxP3+ in diabetic mice. These results can be partially explained by the effects of EALFPA on BM-APCs, where it downregulates the expression of the costimulatory molecule CD86 and increases the expression of IDO-1 in F4/80+ BM-APCs. The results presented allow us a better understanding of the immunomodulatory properties of polyphenols present in P. alata leaves; that is, they suggest induction of tolerogenic antigen-presenting cells with polarization towards a Treg profile, decreasing the activity of effector T lymphocytes CD4+ and CD8+, thus contributing to a better understanding of its anti-inflammatory effects and with the possible translation into clinical protocols and interference in the evolution of autoimmune diabetes Ver menos