Resumo: Esta Tese foi dividida em 3 capítulos que tiveram como objetivos: Capítulo I) Investigar o perfil microbiano, os níveis de endotoxinas, ácido lipoteicóico, citocinas (TNF-?, IL-1?, IL-1?, IL-10), metaloproteinases de matriz (MMP-2, -3, -8, -9, -13), prostaglandina E2 (PGE2), substância P e percepção de dor nas diferentes etapas do tratamento endodôntico, realizado com clorexidina (CLX) 2% gel ou hipoclorito de sódio (NaOCl), e uso de medicação intracanal (MIC) por 30 dias de dentes com pulpite irreversível sintomática (PIS); Capítulo II) Quantificar os níveis de TGF-?1 liberados da matriz dentinária utilizando diferentes protocolos de irrigação e avaliar a atividade antimicrobiana para otimizar estratégias terapêuticas. Além disso, este capítulo avaliou a quantidade de debris extruídos apicalmente após o preparo químico-mecânico (PQM) associado à irrigação ultrassônica passiva utilizando 4 soluções irrigadoras diferentes; e Capítulo III) Discutir o crescente número de pacientes com necessidade de tratamento endodôntico devido a sintomas agudos e sugerir possível associação com alterações psicológicas relacionadas a pandemia do SARS-CoV-2. Métodos: Capítulo I) Foram selecionados 20 pacientes com PIS. Amostras clínicas dos canais radiculares e tecidos periapicais foram realizadas antes do PQM, após o PQM (coletas microbiológicas), 48 horas após o PQM (coletas imunológicas) e após 30 dias de MIC à base de hidróxido de cálcio. O perfil microbiano foi avaliado através de cultura microbiana, nested PCR (reação em cadeia da polimerase) e checkerboard DNA-DNA hybridization. Os níveis de endotoxinas foram quantificados através do teste LAL Pyrogent 5000. Os níveisde LTA, substância P e PGE2 foram quantificados através de ELISA, e os níveis de citocinas e metaloproteinases de matriz através de Imunoensaio multiplex. A percepção da dor foi avaliada através de escala visual analógica; Capítulo II) A liberação de TGF-?1 da matriz dentinária foi quantificada através do teste de ELISA após a realização de protocolos simulando sessão única (ácido etidrônico + NaOCl 2% ou ácido etidrônico + água destilada) ou duas sessões (NaOCl 2% + hidróxido de cálcio/ CLX 2% gel + EDTA 17% ou CLX 2% gel + hidróxido de cálcio/ CLX 2% gel + EDTA 17%). A atividade antimicrobiana foi avaliada através de microscopia confocal de varredura a laser após 21 dias de contaminação com saliva. No outro estudo foram selecionados 60 incisivos inferiores. O PQM foi realizado com instrumento Reciproc e irrigação ultrassônica passiva. Os protocolos utilizados envolveram o NaOCl 6%, CLX 2% gel em associação a solução salina, solução de CLX 2% e solução salina. Os debris extruídos apicalmente foram coletados em tubos Eppendorf e a quantidade de debris foi calculada através da diferença entre o peso final e o peso inicial (em gramas); Capítulo III) Foi escrito um comentário geral sobre uma possível relação entre PIS e transtornos psiquiátricos durante a pandemia. Foi realizada análise estatística com nível de significância de 5%. Resultados: Capítulo I) O tratamento endodôntico foi eficaz na redução dos níveis de bactérias e seus fatores de virulência, bem como modificou os níveis de citocinas, metaloproteinases de matriz, substância P e PGE2. Bactérias resistentes, tais como, E. faecalis e F. nucleatum foram encontradas após PQM e MIC; Capítulo II) maiores níveis de TGF-?1 foram liberados após utilização de MIC e CLX 2% gel como solução irrigadora. Além disso, este protocolo foi o mais efetivo na redução bacteriana no interior dos túbulos dentinários; A realização do tratamento endodôntico com CLX 2% gel associada a solução salina promoveu menor extrusão de debris; Capítulo III) Estudos têm mostrado que durante a pandemia houve aumento dos casos de PIS, apesar da redução dos atendimentos odontológicos. Também foi demonstrado aumento nos casos de alterações psicológicas tendo como consequência o aumento de mediadores inflamatórios. Concluiu-se: Capítulo I) Dentes com PIS apresentam um perfil microbiano complexo, com presença de bactérias Gram-positivas, Gramnegativas, anaeróbios facultativos e estritos. O tratamento endodôntico se mostrou efetivo na redução dos níveis de bactérias, endotoxinas e ácido lipoteicóico em dentes com PIS. O tratamento endodôntico foi eficaz na redução dos marcadores inflamatórios. CLX e NaOCl apresentaram efeitos similares nos parâmetros analisados. Capítulo II) O NaOCl dificulta a liberação de TGF-?1 da matriz dentinária, podendo reduzir as chances da criação de um microambiente propício para a regeneração pulpar. A utilização de substâncias quelantes (EDTA ou HDEP) e CLX permitiu a liberação de TGF-?1 da matriz dentinária, além de apresentar atividade antimicrobiana; houve extrusão apical de debris durante a técnica de irrigação ultrassônica passiva. O PQM realizado com CLX 2% gel associado a solução salina foi o método que permitiu a menor extrusão de debris; Capítulo III) O crescente aumento no número de pacientes que procuram atendimento por sintomatologia aguda pode estar relacionado à mudança de hábitos do indivíduo e aos transtornos psiquiátricos desencadeados pelo medo da SARS-CoV-2 e pelas medidas restritivas de isolamento impostas Ver menos

Abstract: This Thesis was divided into 3 chapter with the following objectives: Chapter I) To investigate the microbial profile, levels of endotoxins, lipoteichoic acid, cytokines (TNF-?, IL-1?, IL-1?, IL-10), matrix metaloproteinases (MMP-2, -3, -8, -9, -13), prostaglandin E2 (PGE2), substance P and perception of pain in the different stages of endodontic treatment, performed with 2% chlorhexidine (CHX) or 6% sodium hypochlorite (NaOCl), and calcium hydroxide-based intracanal medication (ICM) in teeth with symptomatic irreversible pulpitis (SIP); Chapter II) To quantify the levels of TGF-?1 from root dentine matrix using different irrigation protocols and to evaluate the antimicrobial activity in order to optimise treatment strategies. Furthermore, this chapter evaluated the amount of apically extruded debris after chemo-mechanical preparation (CMP) associated with passive ultrasonic irrigation (PUI) using four different root canal irrigants, namely, 6% sodium hypochlorite (NaOCl), 2% chlorhexidine (CHX) gel + saline solution (2% CHXg + SS), 2% CHX solution (2% CHXs) and SS alone; and Chapter III) To point out the increasing number of patient with a need of endodontic treatment do to acute symptoms and to hypothesise its association with psychological disorders related to the SARS-CoV-2 pandemic. Methods: Chapter I) Twenty teeth with SIP were selected. Clinical samples were collected from root canals and periapical tissues before CMP, after CMP (microbiological samples), 48 hours after CMP (immunological samples), and after 30 days of calcium hydroxide-based ICM. Microbial profile was assessed by culture method, nested PCR (polymerase chain reaction), and checkerboard DNA-DNA hybridization. The levels of endotoxins were quantified by sing LAL Pyrogent 5000. The levels of LTA, substance P and prostaglandin E2 (PGE2) were quantified by using ELISA, and the levels of cytokines and matrix metalloproteinases using multiplex immunoassay. Perception of pain was assessed by using a visual analogue scale; Chapter II) Liberation of TGF-?1 from dentine matrix was quantified by using ELISA after protocols simulating single (etidronic acid + 2% NaOCl or etidronic + distilled water) or two sessions (2% NaOCl + calcium hydroxide/2% CHX gel + 17% EDTA or 2% CHX gel + calcium hydroxide/2% CHX gel + 17% EDTA). Antimicrobial activity was assessed by using confocal laser scanning microscope after 21 days of contamination with saliva. The second study, a total of 60 lower incisors were selected. CMP was performed by using Reciproc instrument and passive ultrasonic irrigation. Protocols used were 6% NaOCl, 2% CHX gel associated with saline solution, 2% CHX solution and saline solution alone. Extruded debris were collected in Eppendorf tubes and the amount of debris was calculated by the difference between the final and initial weight of the tubes (in grams); Chapter III) It was written a general comment with regard to possible relationship between SIP and psychiatric disturbs during the pandemic. Significance level was set at 5% in all tests. Results: Chapter I) Endodontic treatment was effective in reducing the levels of bacteria e their virulence factors, as well as the levels of cytokines, matrix metalloproteinases, substance P and PGE2. Resistant microbial species including E. faecalis and F. nucleatum were detected after CMP and ICM; Chapter II) Higher levels of TGF-?1 were released after ICM and 2% CHX gel as root canal irrigant; Endodontic treatment performed with 2% CHX gel + saline solution provided lower levels of extruded debris; Chapter III) Although the number of dental appointments is reduced, increase number of patients presenting with pulpitis has been observed. Furthermore, it has been reported increased number of patients with psychological disorders, and consequently, higher levels of inflammatory mediators. In conclusion: Chapter I) Teeth with SIP present a complex polymicrobial profile with the presence of Gram-positive, Gram-negative, facultative, and strict anaerobes. Endodontic treatment was effective in reducing the levels of bacteria, endotoxins and lipoteichoic acid in teeth with SIP. Endodontic treatment was effective in reducing the levels of inflammatory biomarkers. CHX and NaOCl presented similar effects in the analysed parameters. Chapter II) NaOCl hampers the liberation of TGF-?1 from dentine matrix, which may reduce the chances of a conductive environment for revitalisation. Chelating substances (EDTA or HEDP) and CHX allowed the liberation of TGF-?1 from dentine matrix, beside presenting antimicrobial activity; Apically extruded debris were observed using passive ultrasonic irrigation. CMP performed with 2% CHX gel associated with saline solution minimised debris extrusion; Chapter III) The recent increase in the number of patients seeking endodontic treatment due to acute symptomatology could be related to the change of the individual's habits and to the psychiatric disorders triggered by the fear of SARS-CoV-2 and the restrictive/isolation measures imposed during the outbreak Ver menos