Influência de variantes genéticas na via JAK/STAT na suscetibilidade e prognóstico de pacientes com melanoma cutâneo [recurso eletrônico]
Gabriela Vilas Bôas Gomez
TESE
Português
T/UNICAMP G586i
[Influence of genetic variants in the JAK/STAT pathway on suscetibility and prognosis of cutaneous melanoma patients]
Campinas, SP : [s.n.], 2020.
1 recurso online (237 p.) : il., digital, arquivo PDF.
Orientador: Carmen Silvia Passos Lima
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Resumo: A via de sinalização Janus kinase/Signal tranducer (JAK/STAT), com as proteínas JAK1, JAK2 e STAT3, regula o desenvolvimento e a progressão do melanoma cutâneo (MC). Essas proteínas são codificadas por genes polimórficos em humanos. Os objetivos do estudo foram verificar se as variantes...
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Resumo: A via de sinalização Janus kinase/Signal tranducer (JAK/STAT), com as proteínas JAK1, JAK2 e STAT3, regula o desenvolvimento e a progressão do melanoma cutâneo (MC). Essas proteínas são codificadas por genes polimórficos em humanos. Os objetivos do estudo foram verificar se as variantes genéticas de base única (SNVs) no gene JAK1 (c.1648+1272G>A, c.991-27C>T), JAK2 (c.-1132G>T, c.-139G>A) e STAT3 (c.*1671T>C, c.-1937C>G) influenciam o risco, as manifestações clínicas dos pacientes e biológicas do tumor e a sobrevida dos pacientes com MC, bem como suas consequências funcionais. Foram avaliados 248 pacientes com MC e 274 controles (doadores de sangue). As genotipagens foram realizadas por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). As expressões gênicas foram avaliadas por PCR quantitativo (qPCR). A expressão do gene com a SNV de maior interesse (SNV com resultados mais significativos em risco e sobrevida) foi avaliada pelo ensaio da luciferase, qPCR, western blot, e a análise da apoptose e ciclo celular pela citometria de fluxo em linhagem celular de melanoma SKMEL-28, modificada geneticamente para apresentar os genótipos homozigoto ancestral ou variante e por western blot em 14 outras linhagens celulares de melanoma. O significado estatístico das diferenças entre grupos foi calculado pelo teste de Fisher ou qui-quadrado e pela regressão logística. A análise de haplótipo foi realizada pelo Haploview. As comparações de expressões gênica e análises dos ensaios celulares foram realizadas por meio dos testes t e ANOVA ou teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. As análises de sobrevida foram calculadas pelos testes de Kaplan Meier e log-rank e por análises de Cox. Os indivíduos com o genótipo TT da SNV STAT3 c.*1671T>C, com o genótipo CC da SNV STAT3 c.-1937C>G e com o haplótipo TC de ambas SNVs estiveram sob risco cerca de 2,0 vezes maior de desenvolver MC do que os indivíduos com os demais genótipos e haplótipos, respectivamente. Combinações específicas de genótipos estiveram associadas a chances de cerca de 2,0 vezes maiores de progressão do tumor, e o haplótipo CG das SNVs STAT3 c.*1671T>C e -1937C>G esteve associado a menor chance de evoluir ao óbito devido a doença. Maior atividade da luciferase, maior expressão do gene STAT3 por qPCR e western blot, e maior percentual de células na fase S do ciclo celular foram observadas em SKMEL-28 com o genótipo CC do que aquelas com o genótipo GG. Os resultados deste estudo poderão contribuir para o melhor entendimento da fisiopatologia do MC, para identificar indivíduos com alto risco de ocorrência do tumor e pacientes com prognostico desfavorável
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Abstract: The Janus kinase/Signal transducer (JAK/STAT) signaling pathway, with JAK1, JAK2 and STAT3 proteins regulates the development and progression of cutaneous melanoma (CM). These proteins are encoded by polymorphic genes in humans. The study aimed to verify whether single-base genetic...
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Abstract: The Janus kinase/Signal transducer (JAK/STAT) signaling pathway, with JAK1, JAK2 and STAT3 proteins regulates the development and progression of cutaneous melanoma (CM). These proteins are encoded by polymorphic genes in humans. The study aimed to verify whether single-base genetic variants (SNVs) in JAK1 (c.1648+1272G>A, c.991-27C>T), JAK2 (c.-1132G>T, c.-139G>A) and STAT3 (c.*1671T>C, c.-1937C>G) genes influence the risk, clinical and biological manifestations and survival of CM patients, as well as their functional consequences. CM patients (N= 248) and controls (N= 274) were evaluated. The genotyping was performed by real-time polymerase chain reaction (PCR). Gene expressions were assessed by quantitative PCR (qPCR). Gene expression with the SNV of interest (SNV with most significant results in risk and survival) was evaluated by luciferase assay, qPCR, western blot, and apoptosis and cell cycle assay by flow cytometry in SKMEL-28 melanoma cell line genetically modified to present the ancestral or variant genotypes, and by western blot in 14 other melanoma cell lines. The statistical significance between groups was calculated by Fisher test or chi-square and logistic regression. Haplotype analysis was performed by Haploview software. Comparisons of gene expressions values and analysis of cellular assays were performed using t and ANOVA tests or Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests. Survival analyzes were calculated using Kaplan Meier, log-rank test and Cox analyzes. We found that individuals with STAT3 c.*1671TT and STAT3 c.-1937CC genotypes and TC haplotype were about 2.0-fold increased risk of developing CM than individuals with other genotypes and haplotypes, respectively. Specific combinations of genotypes were associated with an approximately 2.0-fold increased chance of tumor progression, and CG haplotype of the STAT3 c.*1671T>C and -1937C>G SNVs was associated with less chance of death progressing due to disease. We observed higher luciferase activity, higher STAT3 expression by qPCR and by western blot, and higher percentage of cells in the S phase of the cell cycle in SKMEL-28 cell line with CC genotype than GG genotype. The results of this study may contribute to a better understanding of the pathophysiology of CM and to identify individuals at high risk of tumor occurrence and patients with an unfavorable prognosis
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Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDF
Lima, Carmen Silvia Passos, 1957-
Orientador
Serrano, Sérgio Vicente
Avaliador
Magalhães, Renata Ferreira, 1972-
Avaliador
Bertuzzo, Carmen Sílvia, 1963-
Avaliador
Possik, Patricia Abrão
Avaliador
Influência de variantes genéticas na via JAK/STAT na suscetibilidade e prognóstico de pacientes com melanoma cutâneo [recurso eletrônico]
Gabriela Vilas Bôas Gomez
Influência de variantes genéticas na via JAK/STAT na suscetibilidade e prognóstico de pacientes com melanoma cutâneo [recurso eletrônico]
Gabriela Vilas Bôas Gomez