Avaliação da expressão gênica e proteica da via PPAR-gamma/STAT5 no estudo piloto de descontinuação de imatinibe em pacientes com leucemia mieloide crônica com resposta molecular profunda (EDI-PIO) [recurso eletrônico]
Ana Beatriz Pascoal Lopes
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP L881a
[Evaluation of gene and protein expression of the PPAR-gamma/STAT5 pathway in the pilot study of discontinuation of imatinib in patients with chronic myeloid leukemia with deep molecular response (EDI-PIO)]
Campinas, SP : [s.n.], 2020.
1 recurso online (74 p.) : il., digital, arquivo PDF.
Orientador: Kátia Borgia Barbosa Pagnano
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Resumo: A leucemia mieloide crônica (LMC) é uma neoplasia mieloproliferativa, caracterizada pela presença de um rearranjo entre os cromossomos 9 e 22, originando o cromossomo Filadélfia e o gene de fusão BCR-ABL1, que codifica uma proteina com atividade tirosina quinase, alvo terapêutico dos...
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Resumo: A leucemia mieloide crônica (LMC) é uma neoplasia mieloproliferativa, caracterizada pela presença de um rearranjo entre os cromossomos 9 e 22, originando o cromossomo Filadélfia e o gene de fusão BCR-ABL1, que codifica uma proteina com atividade tirosina quinase, alvo terapêutico dos inibidores de tirosina quinase (ITQ). Alguns estudos mostraram que a descontinuação do tratamento com ITQs é possível em pacientes que atingem uma resposta molecular profunda (RMP) sustentada. Sabe-se que as células-tronco leucêmicas quiescentes são resistentes aos ITQs e podem ser um reservatório para a recaída molecular após a interrupção do tratamento. Um estudo mostrou que a pioglitazona, um agonista de PPAR-"gamma", é capaz de diminuir a expressão de STAT5 e de seus genes a jusante HIF2"alpha" e CITED2, guardiões da quiescência, tornando as células quiescentes sensíveis ao imatinibe (IM) e, assim, induzindo RMP em pacientes com LMC. O presente estudo é um subprojeto do estudo de fase 2 EDI-PIO, que teve como objetivo avaliar a eficácia e segurança do uso da pioglitazona em associação com IM antes da descontinuação do tratamento em pacientes com LMC. Objetivamos no presente estudo avaliar a expressão gênica e proteica de PPAR-"gamma" e expressão gênica de STAT5, HIF2"alpha" e CITED2, pré e pós pioglitazona, 3 e 6 meses após a descontinuação do tratamento com IM. Foram incluídos pacientes com LMC em FC, sem resistência previa, com no mínimo 3 anos de tratamento com IM e com resposta molecular profunda sustentada (MR4.5) por pelo menos 2 anos. Os pacientes foram tratados com pioglitazona 30 mg ao dia por 3 meses, em combinação com IM, seguido da fase de descontinuação de ambos os medicamentos. Os transcritos BCR-ABL foram avaliados através de RQ-PCR em tempo real mensalmente nos primeiros 12 meses após a interrupção do tratamento e a cada 2 meses a partir do segundo ano. O imatinibe foi reintroduzido na perda de RMM (PCR>0.1%) ou perda confirmada de MR4.0 em dois testes (PCR>0.01%). RNA total foi extraído de leucócitos totais de amostras de sangue periférico para avaliação da expressão dos genes PPAR-"gamma", STAT5, HIF2"alpha" e CITED2 através de RT-PCR em tempo real. Para análises dos resultados foi utilizado o método 2-"delta""delta"CT. A expressão proteica de PPAR-"gamma" foi analisada por Western Blot. Para análise de expressão genica, foram aplicados os testes de análise de variância (ANOVA), e posteriormente, o teste Bonferroni (Pos-Hoc) quando encontrada diferenças em algum momento. Para a estimativa da sobrevida livre de tratamento (SLT) foi usado o método de Kaplan-Meier, considerando o tempo a partir da data da descontinuação do TKI até a data do evento (perda de resposta molecular, citogenética, hematológica, progressão para as fases avançadas ou morte por qualquer causa) ou última consulta. Foram avaliados 32 pacientes, entre junho de 2016 a novembro de 2020, com mediana de idade de 51 anos (29-76), desses 53,1% eram homens. O tempo mediano de tratamento com IM foi de 108.31 meses (41-191) e o tempo mediano de seguimento foi de 25 meses (2-50). A sobrevida livre de terapia (SLT) foi 61% (CI 95%:45-77). Não houve nenhum caso de perda de resposta hematológica ou progressão para fase acelerada ou crise blástica. Doze pacientes apresentaram recaída molecular e retomaram o tratamento com IM. Todos obtiveram RMM numa mediana de 3 meses. Para a análise de expressão gênica e proteica foram estudados 31 pacientes. Não houve diferença significativa na expressão dos genes PPAR-"gamma" (P=0,31), STAT5 (P=0,95), HIF2"alpha" (P=0,18) e CITED2 (P=0,42) nos tempos pré e pós pioglitazona, 3 e 6 meses após a descontinuação. Não houve diferença significativa na expressão proteica de PPAR-"gamma" nos mesmos tempos. A SLT foi semelhante à observada a outros estudos de descontinuação com os mesmos critérios de inclusão. Essa coorte de pacientes tratada com pioglitazona permanece em seguimento e terá sua análise final quando todos os pacientes completarem 5 anos de seguimento
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Abstract: Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative neoplasm, characterized by the rearrangement of the chromosomes 9 and 22, originating the Philadelphia chromosome and the BCR-ABL fusion gene, whose product is a target for tyrosine kinase inhibitors (TKI). Studies have shown that...
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Abstract: Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative neoplasm, characterized by the rearrangement of the chromosomes 9 and 22, originating the Philadelphia chromosome and the BCR-ABL fusion gene, whose product is a target for tyrosine kinase inhibitors (TKI). Studies have shown that treatment discontinuation is possible in patients who achieve a sustained deep molecular response. Quiescent leukemic stem cells are known to be resistant to TKIs. A study showed that pioglitazone, a PPAR-'gamma" agonist, was able to decrease the expression of STAT5 and its downstream targets, HIF2"alpha" and CITED2, guardians of quiescence, making the quiescent leukemic cells sensitive to imatinib, increasing patient response. The present study is a sub-project of the phase 2 EDI-PIO trial, which aimed to evaluate the efficacy and safety of pioglitazone in association with MI before treatment discontinuation in patients with CML. In the present study, we aimed to evaluate PPAR-"gamma" gene and protein expression and STAT5, HIF2"alpha" and CITED2 gene expression, pre and post pioglitazone, 3 and 6 months after discontinuation of IM treatment. Patients with CML in chronic phase, without previous IM resistance were included, with at least 3 years of treatment with IM and with a sustained deep molecular response (MR4.5) for at least 2 years. Patients were treated with pioglitazone 30 mg daily for 3 months, in combination with IM, followed by the discontinuation phase of both drugs. BCR-ABL transcripts were evaluated using real-time RQ-PCR monthly in the first 12 months after treatment interruption and every 2 months in the second year. Imatinib was reintroduced in the loss of RMM (PCR> 0.1%) or confirmed loss of MR4.0 in two tests (PCR> 0.01%). Total RNA was extracted from total leukocytes from peripheral blood samples to evaluate the expression of PPAR-"gamma", STAT5, HIF2"alpha" and CITED2 through real-time RTPCR. For analysis of the results, the 2-"delta""delta"CT method was used. PPAR-"gamma" protein expression was analyzed by Western Blot. For analysis of gene expression, the tests of analysis of variance (ANOVA) were applied, and later, the Bonferroni test (Pos-Hoc) when found differences at some point. To estimate treatment-free survival (TFS) the Kaplan-Meier method was used, considering the time from the date of discontinuation of IM until the date of the event (loss of molecular, cytogenetic, or hematologic response, progression to advanced phases or death from any cause) or last follow-up. 32 patients were evaluated between June 2016 and November 2020, with a median age of 51 years (29-76), 53.1% were men. The median time of treatment with MI was 108.31 months (41-191) and the median follow-up time was 25 months (2-50). Treatment-free survival (SLT) was 61% (95% CI: 45-77). There was no case of loss of hematological response or progression to an accelerated phase or blast crisis. Twelve patients presented molecular relapse and resumed treatment with MI. All obtained MMR in a median time of 3 months. Gene and protein expression were analyzed in 31 patients. There was no significant difference in the expression of PPAR-"gamma" (P = 0.31), STAT5 (P = 0.95), HIF2"alpha" (P = 0.18) and CITED2 (P = 0.42) before or after pioglitazone, 3 and 6 months after IM discontinuation. There was no significant difference PPAR-"gamma" protein expression at the same time points. TFR was similar to that observed in other discontinuation studies with the same inclusion criteria. This cohort of patients treated with pioglitazone remains in follow-up and will have its final analysis when all patients complete 5 years of follow-up
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Avaliação da expressão gênica e proteica da via PPAR-gamma/STAT5 no estudo piloto de descontinuação de imatinibe em pacientes com leucemia mieloide crônica com resposta molecular profunda (EDI-PIO) [recurso eletrônico]
Ana Beatriz Pascoal Lopes
Avaliação da expressão gênica e proteica da via PPAR-gamma/STAT5 no estudo piloto de descontinuação de imatinibe em pacientes com leucemia mieloide crônica com resposta molecular profunda (EDI-PIO) [recurso eletrônico]
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