Caracterização molecular de tumores malignos de cães e identificação de neoplasias responsivas a novos biofármacos [recurso eletrônico] : uma abordagem translacional
Ingrid Mayara Cavalcante Trevisan
DISSERTAÇÃO
Multilíngua
T/UNICAMP T729c
[Molecular characterization of malignant tumors of dogs and identification of neoplasms responsive to new biopharmaceuticals]
Campinas, SP : [s.n.], 2021.
1 recurso online (108 p.) : il., digital, arquivo PDF.
Orientador: Catarina Raposo Dias Carneiro
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas
Resumo: A incidência de neoplasias malignas em cães aumentou consideravelmente nas últimas décadas; devido ao mal prognóstico e à heterogeneidade da doença, a procura por novos tratamentos individualmente é uma proposta promissora. A utilização de sistemas in vitro com células tumorais do próprio...
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Resumo: A incidência de neoplasias malignas em cães aumentou consideravelmente nas últimas décadas; devido ao mal prognóstico e à heterogeneidade da doença, a procura por novos tratamentos individualmente é uma proposta promissora. A utilização de sistemas in vitro com células tumorais do próprio paciente é uma ferramenta que auxilia nas análises genéticas e direcionamento do tratamento, sendo uma estratégia translacional para o desenvolvimento de novos fármacos. Nosso grupo demonstrou que componentes do veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PnV) apresentam efeitos citotóxicos em células de glioblastoma humano in vitro e em modelo experimental murino. A partir desses achados e considerando a relevância do modelo veterinário para a pesquisa translacional, e a incidência de tumores caninos, foram propostos os principais objetivos no estudo: 1. Isolar e estabelecer linhagens tumorais obtidas de pacientes veterinários (cães) atendidos na Oncovida – Centro de Oncologia Veterinária; 2. Testar compostos isolados do PnV nas linhagens obtidas; 3. Realizar o estadiamento clínico e caracterizar os tumores ressecados quanto aos aspectos histopatológicos e moleculares, correlacionando com a resposta aos fármacos-teste, e comportamento das células em cultura. Foram coletados 9 tumores de pacientes caninos com diferentes diagnósticos de neoplasias, dos quais 5 linhagens foram estabelecidas. As correlações estatísticas demonstraram que o sucesso no estabelecimento das linhagens está correlacionado ao grau de malignidade e ao estadiamento, mas não ao marcador de proliferação Ki67. O ensaio de citotoxicidade pelo MTT, com as subfrações do veneno, SF3 e SF5 (1, 5 e 24 h), demonstraram resposta variada. O linfoma cutâneo e o mastocitoma foram os mais responsivos aos compostos, o carcinoma urotelial respondeu apenas no tempo mais agudo e as duas linhagens de melanoma não responderam ao tratamento. As correlações entre a redução da viabilidade e a expressão de Ki67, o estadiamento clínico e a origem da célula neoplásica (epitelial ou imunológica) foi estatisticamente significativa com a resposta ao tratamento; enquanto que o grau histopatológico de malignidade do tumor não foi correlacionado ao efeito dos fármacos-teste. O ensaio de morte celular confirmou que o mastocitoma foi mais responsivo aos componentes testados do que as duas linhagens de melanoma. Por outro lado, o ensaio de migração celular, feito com a SF1 e SF11, mostrou que uma das linhagens de melanoma teve a migração atrasada, enquanto o mastocitoma e a segunda linhagem de melanoma não responderam ao tratamento. Essa seletividade tumor-específica apresentada pelos componentes testados evidenciam a necessidade e a relevância da abordagem translacional para individualização do tratamento. O presente estudo apresenta fatores determinantes no sucesso ou insucesso no estabelecimento de linhagens à longo prazo, dados que são escassos na literatura sendo uma limitação para a incorporação do protocolo na rotina dos laboratórios. O protocolo padronizado foi simplificado, rápido e de baixo custo e se mostrou eficaz. Por fim, os componentes testados, SF3 e SF5 com efeitos citotóxicos e SF1 e SF11 com efeitos antimigratórios, são promissores no tratamento de tumores veterinários; trabalhos em andamento estão caracterizando bioquimicamente as moléculas presentes nas SFs, as quais serão futuramente sintetizadas e testadas em modelos pré-clínicos e clínicos
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Abstract: The incidence of malignant neoplasms in dogs has increased considerably in the last decades; due to the poor prognosis and the heterogeneity of the disease, the search for new treatments individually is a promising proposal. The use of in vitro systems with tumor cells from the patient...
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Abstract: The incidence of malignant neoplasms in dogs has increased considerably in the last decades; due to the poor prognosis and the heterogeneity of the disease, the search for new treatments individually is a promising proposal. The use of in vitro systems with tumor cells from the patient himself is a tool that aids in genetic analysis and treatment targeting, being a translational strategy for the development of new drugs. Our group has demonstrated that components of Phoneutria nigriventer spider venom (PnV) have cytotoxic effects on human glioblastoma cells in vitro and in an experimental murine model. Based on these findings and considering the relevance of the veterinary model for translational research, and the incidence of canine tumors, the main objectives in the study were proposed: 1. To isolate and establish tumor cell lines obtained from veterinary patients (dogs) seen at Oncovida - Veterinary Oncology Center; 2. To test compounds isolated from PnV in the obtained lines; 3. To perform the clinical staging and to characterize the resected tumors regarding histopathological and molecular aspects, correlating with the response to test-drugs, and cell behavior in culture. Nine tumors were collected from canine patients with different neoplasm diagnoses, from which 5 lineages were established. Statistical correlations showed that the success in establishing lineages correlated with the degree of malignancy and staging, but not with the proliferation marker Ki67. The MTT cytotoxicity assay with the venom subfractions, SF3 and SF5 (1, 5 and 24 h), demonstrated varied response. Cutaneous lymphoma and mastocytoma were the most responsive to the compounds, urothelial carcinoma responded only at the most acute time, and the two melanoma strains did not respond to treatment. Correlations between reduced viability and Ki67 expression, clinical staging, and neoplastic cell origin (epithelial or immune) were statistically significant with treatment response; whereas the histopathological grade of tumor malignancy was not correlated with the effect of the test drugs. The cell death assay confirmed that mastocytoma was more responsive to the tested compounds than the two melanoma strains. On the other hand, the cell migration assay, done with SF1 and SF11, showed that one of the melanoma strains had delayed migration, while the mastocytoma and the second melanoma strain did not respond to treatment. This tumor-specific selectivity presented by the tested components highlights the need and relevance of the translational approach for treatment individualization. The present study presents determinant factors in the success or failure in the establishment of long term lineages, data that are scarce in the literature being a limitation for the incorporation of the protocol in the routine of laboratories. The standardized protocol was simplified, fast and low cost, and proved to be effective. Finally, the tested components, SF3 and SF5 with cytotoxic effects and SF1 and SF11 with antimigratory effects, are promising in the treatment of veterinary tumors; ongoing work is characterizing biochemically the molecules present in the SFs, which will be synthesized and tested in preclinical and clinical models in the future
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Carneiro, Catarina Raposo Dias, 1978-
Orientador
Kobarg, Jörg, 1965-
Avaliador
Caracterização molecular de tumores malignos de cães e identificação de neoplasias responsivas a novos biofármacos [recurso eletrônico] : uma abordagem translacional
Ingrid Mayara Cavalcante Trevisan
Caracterização molecular de tumores malignos de cães e identificação de neoplasias responsivas a novos biofármacos [recurso eletrônico] : uma abordagem translacional
Ingrid Mayara Cavalcante Trevisan