Resumo: O Adenoma Pleomórfico (AP) representa a neoplasia mais comum das glândulas salivares. Apesar de ser uma lesão benigna, o AP pode apresentar recorrências, metástases e transformação maligna. Cerca de 6% dos casos transformam-se em um Carcinoma Ex-Adenoma Pleomórfico (CXAP). Por ser uma neoplasia incomum, a etiopatogênese do CXAP continua pobremente elucidada contudo, acredita-se que sua etiologia seja decorrente ao acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas em um AP. No contexto de patologias, a análise proteômica auxilia para o maior entendimento dos eventos associado à carcinogênese. Baseado nestes aspectos, o objetivo deste estudo foi verificar e analisar a abundância de proteínas, por meio de espectrometria de massas, em casos de AP e CXAP e correlacionar com a transformação maligna do AP. Foram selecionados 30 casos de AP e CXAP fixados em formol e embebidos em parafina. Colorações imunoistoquímica e em hematoxilina e eosina foram performadas bem como cortes em lâminas de membranas específicas para posterior Microdissecção por captura à Laser (LCM). A microdissecção foi realizada em todas todos os casos selecionados e apenas células neoplásicas foram microdisseccionadas, coletadas e armazenadas a -80 °C. Posteriormente, apenas 10 amostras do AP, 16 amostras do CXAP e 4 amostras de AP residual (APR) seguiram para extração proteica e análise de Espectrometrias de Massas acoplada à cromatografia líquida (LC-MS/MS). A análise proteômica identificou e quantificou 240 proteínas ao todo. Foi realizado mapa de calor, agrupamento e análise dos componentes principais. Foram identificadas 39 proteínas exclusivas no AP, 4 no APR e 17 no CXAP e as proteínas CA2, AFDN e ATP3A2 foram propostas como assinatura proteica das lesões respectivamente. Em relação às proteínas compartilhadas, foram criados 6 subgrupos para avaliar a abundância das proteínas entre as lesões. Por meio das análises com e sem imputation, foram selecionadas proteínas que apresentaram diferenças estatisticamente significativas. Após analisar as redes de associações que as proteínas em cada subgrupo apresentaram, as três maiores valores de Log2-ratio > 2,5 (para regulação positiva) ou > -2,5 (para regulação negativa) na média de intensidade de quantificação livre de marcadores (LFQ) foram selecionados como possíveis marcadores. Em conclusão, demonstramos e analisamos o perfil proteômico do AP ao longo da sua transformação maligna baseado em MS. Adicionalmente, 15 proteínas (AFDN, AP1M1, APOA1, ATP2A3, CA2, DCD, FABP5, FLG, HBB, HP, IgJ, KRT16, MYH9, SLC4A1 e SYCP1) foram propostas como potencial para atuarem como marcadores, podendo algumas destas estarem associadas com a progressão ou supressão da transformação maligna do AP Ver menos

Abstract: Pleomorphic adenoma (PA) represents the most common neoplasm of salivary glands. Although being a benign lesion, PA can present recurrences, metastases and malignant transformation. About 6% of cases transform into a carcinoma ex-pleomorphic adenoma (CXPA). For being an unusual neoplasm, CXPA etiopathogenesis is still poorly elucidated, however, it is etiology is believed to be due to the accumulation of genetic and epigenetic alterations in PA. In the context of pathologies, proteomic analysis helps to better understand the events associated with carcinogenesis. Based on these aspects, the aim of this study was to verify and analyze the abundance of proteins, by means mass spectrometry, in cases of PA and CXPA and correlate with the malignant transformation of the PA. Thirty cases of AP and CXAP fixed in formaldehyde and embedded in paraffin were selected. Immunohistochemical stains and hematoxylin and eosin were performed as well as cuts in specific membrane slides for later laser capture microdissection (LCM). Microdissection was performed in all selected cases and only neoplastic cells were microdissected, collected and stored at -80 °C. Subsequently, only 10 PA samples, 16 CXPA samples and 4 residual PA (RPA) samples followed for protein extraction and liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The proteomic analysis identified and quantified 240 proteins in total. A heat map, grouping and analysis of the main components was performed. Thirty-nine exclusive proteins were identified in the PA, 4 in the APR and 17 in the CXAP, and the proteins CA2, AFDN and ATP3A2 were proposed as protein signature of the lesions respectively. Regarding the shared proteins, 6 subgroups were created to evaluate the protein abundance among the lesions. Through the analyses with and without imputation, proteins that showed statistically significant differences were selected. After analyzing the networks of associations that the proteins in each subgroup presented, the three highest values of Log2-ratio > 2.5 (for positive regulation) or > -2.5 (for negative regulation) in the mean intensity of label-free protein quantification (LFQ). In conclusion, we demonstrate the proteomic profile of PA along its malignant transformation based on MS. Additionally, 15 proteins (AFDN, AP1M1, APOA1, ATP2A3, CA2, DCD, FABP5, FLG, HBB, HP, IgJ, KRT16, MYH9, SLC4A1 and SYCP1) were proposed as potential markers, some of which may be associated with the progression or suppression of malignant transformation of PA Ver menos