Resumo: DCs com função defeituosa encontradas em pacientes com câncer possuem relação direta com o pobre prognóstico da doença. Com o desenvolvimento de novas imunoterapias, percebeu-se que alguns fármacos podem reduzir a ação supressora do microambiente tumoral (TME) e serem úteis como imunoadjuvantes no tratamento do câncer. O sildenafil (Viagra®?) é um inibidor de fosfodiesterase 5 (PDE5-I) que aumenta a resposta antitumoral de linfócitos T, quando administrado sistemicamente. Porém, os efeitos desse medicamento nas DCs, células que determinam o fenótipo dos linfócitos T, ainda não são conhecidos. Portanto o objetivo geral dessa pesquisa foi avaliar o efeito do sildenafil como um modulador de DCs in vitro, visando o uso desse fármaco como um adjuvante em vacina de DCs contra adenocarcinoma mamário (EO771); foi objetivo paralelo padronizar um modelo experimental mais adequado, caracterizando o efeito do GM-CSF e do sobrenadante de L929 na diferenciação das DCs. DCs geradas da medula óssea de camundongos foram expostas ao lisado tumoral de EO771 e/ou ao sidenafil (0,1, 1 e 10 µM) por 24 h in vitro, e posteriormente foi avaliada a expressão de marcadores de superfície (MHCII, CD11c e CD80) e a liberação de citocinas (IL1-?, IL-10 e TNF-?). Também foram analisadas as populações de linfócitos (CD4+ e CD8+) mantidas em cocultura com as DCs moduladas e, por fim, a capacidade desses linfócitos em matar a linhagem tumoral (EO771), quando colocados em cocultura, para avaliar a eficácia in vitro da modulação das DCs. O sildenafil aumentou a expressão de MHCII e de CD80, a secreção de IL-1? e de TNF-?, enquanto diminuiu a expressão de de IL-10, indicando a indução de um perfil ativado dessas células. O tratamento aumentou o percentual das populações de linfócitos duplo-positivos CD4+CD8+. Entretanto, não houve aumento da morte celular de EO771 em 24 h de cocultura com linfócitos diferenciados pelas DCs tratadas com o sildenafil. Como resultado paralelo, a concentração de 10 ng/mL de GM-CSF foi considerada a mais eficaz para diferenciar populações CD11c+ MHCII+ F4/80-. Nosso trabalho sugere que o sildenafil modulou as DCs para um perfil fenotípico e funcional ativado, porém não melhorou a capacidade dessas células em induzir uma reposta antitumoral in vitro, nas condições de tempo, linhagem tumoral e concentração estudadas. Outros testes são necessários para indicar se esse fármaco pode ser reposicionado como um imunoadjuvante em vacinas de DCs para o tratamento do câncer, o que pode representar uma estratégia de menor custo e tempo em comparação com o desenvolvimento de novos fármacos Ver menos

Abstract: Defective function of DCs found in cancer patients are directly related to the poor prognosis of the disease. With the development of new immunotherapies, it was realized that some drugs can reduce the suppressive action of the tumor microenvironment (TME) and be useful as immunoadjuvants in the treatment of cancer. Sildenafil (Viagra®) is a phosphodiesterase 5 (PDE5-I) inhibitor that increases the T lymphocyte antitumor response when administered systemically. However, the effects of this drug on DCs, cells that determine the phenotype of T lymphocytes, are not yet known. Therefore, the general objective of this research was to evaluate the effect of sildenafil as a DC modulator in vitro, aiming at the use of this drug as an adjuvant in a DC vaccine against breast adenocarcinoma (EO771); it was a parallel objective to standardize a more adequate experimental model, characterizing the effect of GM-CSF and L929 supernatant on the differentiation of DCs. DCs generated from the bone marrow of mice were exposed to the tumor lysate of EO771 and/or to sidenafil (0.1, 1 and 10 µM) for 24 h in vitro, and subsequently the expression of surface markers (MHCII, CD11c and CD80) and the release of cytokines (IL1-?, IL-10 and TNF-?). Lymphocyte populations (CD4 and CD8) maintained in co-culture with modulated DCs were also analyzed, and finally, the capacity of these lymphocytes to kill the tumor line (EO771), when placed in co-culture, to evaluate the in vitro efficacy of the modulation of the DCs. Sildenafil was able to increase the expression of MHCII in 24 h of treatment and CD80 in 1 h, the secretion of IL-1? in 1 h, that of TNF-? in 24 h and the percentage of CD4 + CD8 + populations. It also decreased the expression of CD11c in 1h, the secretion of IL-10 and was not related to cell death of EO771 in coculture with DCs and lymphocytes in 24 h of treatment. Our work suggests that sildenafil acts positively on the phenotype and function of DCs and has no chemotherapeutic action. Therefore, further studies may result in the repositioning of this drug as an immunoadjuvant in the treatment of cancer and this would represent a viable means in terms of cost and time to provide an improved immunotherapy for cancer patients Ver menos