Resumo: O fluido oral é a matriz biológica que surge como alternativa ao emprego de sangue e derivados. Dentre as vantagens do emprego desta matriz, estão a facilidade de coleta (não invasiva e pode ser realizada sob observação), difícil adulteração, fácil análise (quando comparada ao plasma, por exemplo) e a considerável correlação que pode ser traçada entre as concentrações salivares e plasmáticas de um fármaco. A validação é o ato de realizar ensaios experimentais visando evidenciar que o método funciona dentro de suas condições esperadas de emprego. No presente trabalho, um método foi desenvolvido, validado e aplicado na análise de amostras de fluido oral coletadas de voluntários presentes em festas de curta ou longa duração (festas de música eletrônica). O método permitiu a análise de 50 substâncias das classes dos antidepressivos, benzodiazepínicos e opioides. As amostras foram coletadas com o dispositivo de coleta Quantisal, e extraídas empregando extração líquido-líquido com éter metil-terc-butílico, sendo posteriormente analisadas por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial. Durante a validação o método atendeu os critérios recomendados internacionalmente, apresentando limites inferiores de quantificação na ordem de 0,5 e 1,0 ng/mL e linearidade de 0,5 à 50,0 ng/mL para antidepressivos, de 0,5 à 25,0 ng/mL para benzodiazepínicos e 1,0 à 50,0 ng/mL para opioides. Os valores de inexatidão e imprecisão foram melhores que 16% e 20%, respectivamente, e os valores de efeitos matriz melhores que 25%. Nenhuma evidência de contaminação cruzada (carryover), interferência endógena ou exógena (considerando fármacos e drogas de abuso comuns no país) foi observada. Estudos de estabilidade demonstraram que quase todos os analitos foram estáveis à -20 ºC por 60 dias (exceto por 7-aminoclonazepam, 7-aminoflunitrazepam, lorazepam, nordiazepam, naloxona, naltrexona e norsertralina), à 4 ºC por 7 dias (exceto por nordiazepam, metadona e naltrexona) e à temperatura ambiente (25 ºC) por 3 dias (exceto por sertralina e flunitrazepam). Em ciclos de congelamento e descongelamento, a grande maioria dos antidepressivos e opioides foram considerados estáveis, diferentemente foi observado para os benzodiazepínicos. A estabilidade pós processamento (em amostrador automático à 10 ºC) garantiu estabilidade por 24 horas para todos os analitos empregados no método, exceto nitrazepam, 7-aminoclonazepam e 7-aminoflunitrazepam (estáveis por até 18 horas). Foram analisadas 38 amostras de fluido oral dentre elas, 13 foram positivas para 2 dos analitos investigados, 10 apresentaram apenas 1 analito e 1 amostra mostrou positividade para 5 analitos. O citalopram foi a substância mais comumente encontrada (n = 10 amostras, 26,3%), com concentrações entre 1,4 e 150 ng/mL, seguido da venlafaxina (n = 9 amostras, 23,7%) com concentrações entre 0,6 e > 500 ng/mL. Das 38 amostras, 4 possuíam bupropiona (10,5%) e 7 possuíam seu produto de biotransformação, hidroxibupropiona (18,4%) com concentrações entre 1,2-334 e 0,6-189 ng/mL, respectivamente. Clomipramina, duloxetina, mirtazapina, paroxetina e zolpidem foram encontradas em apenas 1 amostra positiva cada, com concentrações entre 0,5-14,1 ng/mL. Em conclusão, o método foi desenvolvido e validado seguindo parâmetros recomendados internacionalmente para 50 substâncias, além de ter sido aplicado para análise de amostras de fluido oral coletadas de voluntários em festas de curta ou longa duração Ver menos

Abstract: Oral fluid is the biological matrix applied as alternative to the use of blood and its derivatives. Among the advantages of using this matrix are the ease of collection (non-invasive and can be performed under observation), difficult adulteration, easier analysis (when compared to plasma, for example) and the correlation between drug salivary and plasma concentrations. Method validation is the act of carrying out experimental tests in order to show that the method works within its expected conditions of employment. In the present work, a method was developed, validated and applied to the analysis of authentic oral fluid samples collected from volunteers attending university parties or electronic music festivals. The method allowed the analysis of 50 substances among antidepressants, benzodiazepines and opioids. The samples were collected using Quantisal¿ collector device, extracted using liquid-liquid extraction with MTBE, and then analyzed using liquid chromatography tandem mass spectrometry. During validation, the developed method fulfilled internationally recommended criteria, with lower limits of quantification of 0.5 and 1.0 ng/mL and linearity within 0.5-50.0 and 1.0-50.0 ng/mL for antidepressants, 0.5-25.0 ng/mL for benzodiazepines and 1.0-50.0 ng/mL for opioids. Bias and imprecision values were better than 16% and 20%, respectively and matrix effects, better than 25%. Neither evidence of carryover nor endogenous and exogenous (considering most common pharmaceuticals and drugs of abuse) interference were found. Stability studies showed that almost all analytes were stable at -20 ºC for 60 days (except for 7-aminoclonazepam, 7-aminoflunitrazepam, lorazepam, nordiazepam, naloxone, naltrexone and norsertraline); at 4 ºC for 7 days (except for nordiazepam, methadone and naltrexone) and at room temperature (25 ºC) for 3 days (except for sertraline and flunitrazepam). In freeze and thaw cycles, almost all antidepressants and opioids were considered stable, but differently was seen for benzodiazepines. Processed sample stability (in auto sampler at 10 ºC) guaranteed 24 hours stability for all analytes used in the method, except nitrazepam, 7-aminoclonazepam and 7-aminoflunitrazepam (stable for 18 hours). Thirty-eight authentic oral fluid samples were analyzed, among them, 13 were positive for 2 of the investigated analytes, 10 for only 1 analyte and 1 sample showed positivity for 5 analytes. Citalopram was the most found substance (n = 10 samples, 26.3%), with concentrations within 1.4 to 150 ng/mL, followed by venlafaxine (n = 9 samples, 23.7%) with concentrations between 0.6 to > 500 ng/ml. Among 38 samples, 4 had bupropion (10.5%) and 7 had their metabolite, hydroxybupropion (18.4%) with concentrations between 1.2-334 and 0.6-189 ng/mL, respectively. Clomipramine, duloxetine, mirtazapine, paroxetine and zolpidem were found in only 1 positive sample each, with concentrations between 0.5-14.1 ng/mL. In conclusion, the method was validated following internationally recommended guidelines for 50 substances and applied analyzing authentic oral fluid samples collected from volunteers at parties and electronic music festival Ver menos