Resumo: A imunoterapia para câncer desenvolveu-se extraordinariamente na última década, no entanto, apesar destes esforços, ainda existem mecanismos utilizados pelas células tumorais para conseguirem se evadir do sistema imunológico. Biopsias de tumores revelam que o infiltrado de células T regulatórias (Treg) no sítio tumoral correlacionam-se com a progressão de câncer, tendo em vista a sua habilidade de antagonizar a ação de linfócitos efetores. Deste modo, a eliminação específica de Treg pode atuar em sinergia com outras terapias antitumorais. Existem estratégias para a inibição de Treg, entretanto, devido à falta de seletividade, estas abordagens acabam por eliminar também outros linfócitos efetores, podendo assim atuar de forma antagônica a imunidade antitumoral. O fator de transcrição FOXP3, presente quase exclusivamente em Treg, desempenha um papel central associado com a manutenção do fenótipo imunossupressor nestas células. Devido ao fato de FOXP3 ser inacessível a anticorpos, neste trabalho desenvolvemos uma nova estratégia de imunoterapia para inibir as células Treg com base na veiculação de moléculas de RNAi para silenciamento gênico transcricional (TGS) do Foxp3 e, em decorrência, inibir o fenótipo imunossupressor. Escolhemos como alvos alguns sítios CpG em regiões do promotor e do enhancer especificamente desmetilado em Treg (TSDR). Em contraste ao silenciamento pós-transcricional que tem como objetivo a inibição do RNA mensageiro que é constantemente expresso na célula, o sistema TGS tem como alvo o genoma celular, bastando-se uma única molécula para bloquear a expressão gênica de Foxp3. Efetuamos a veiculação das moléculas de TGS-RNAi por meio de uma plataforma de vetores virais que possibilitaram uma prova de conceito, posteriormente aprimorada para uma segunda plataforma baseada em aptâmeros quiméricos que podem apresentar um grande potencial para o desenvolvimento de futuras aplicações clínicas. Adicionalmente, também apresentamos neste trabalho, resultados de um estudo com vacinas antitumorais que atuam na coestimulação de células T e que poderão atuar em sinergia com a depleção de células T regulatórias, para potencializar a resposta imune antitumoral Ver menos

Abstract: Immunotherapy for cancer has developed remarkably in the last decade, however, despite these efforts, there are still mechanisms used by tumor cells to evade the immune system. Tumor biopsies reveal that regulatory T-cell infiltrates (Treg) at the tumor site correlate with cancer progression, because of their ability to antagonize the action of effector lymphocytes. In this way, the specific elimination of Treg may act in synergy with other antitumor therapies. There are strategies for the inhibition of Treg, however, due to the lack of selectivity, these approaches also eliminate other effector lymphocytes, thus acting antagonistically to antitumor immunity. The transcription factor FOXP3, present almost exclusively in Treg, plays a central role associated with the maintenance of the immunosuppressive phenotype in these cells. Due to the fact that FOXP3 is inaccessible to antibodies, in this work we have developed a new immunotherapy strategy to inhibit Treg cells based on the delivery of RNAi molecules for the transcriptional gene silence (TGS) of Foxp3 and, consequently, inhibiting the immunosuppressive phenotype. We chose as target some CpG sites in the promoter and also in the enhancer Treg-specific demethylated region (TSDR) region. In contrast to post-transcriptional gene silencing that aims to inhibit the messenger RNA, which is constitutively expressed in the cell, the TGS system targets the cellular genome, and a single molecule is enough to block the gene expression of Foxp3. We performed the delivery of the TGS-RNAi molecules through a platform of viral vectors that enabled a proof of concept, later improved for a second platform based on chimeric aptamers that may increase the potential for developing future clinical applications. In addition, we show in this work, results of a study with antitumor vaccines for T cells costimulation that may act in synergy with the depletion of regulatory T cells strategies, to enhance the antitumor immune response Ver menos