Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos dimórficos do gênero Paracoccidioides (P. brasiliensis e P. lutzii), restrita à América Latina e uma das principais micoses sistêmicas do Brasil. A resposta imunológica na PCM é heterogênea e está relacionada ao desenvolvimento de manifestações clínicas distintas. A doença mais grave e disseminada é caracterizada pelo comprometimento de linfonodos, fígado, baço e medula óssea; enquanto formas brandas apresentam lesões da pele, mucosa e pulmões. Ambas as formas clínicas apresentam uma resposta imune celular comprometida (mediada por células T) e a ativação policlonal das células B. Em geral, a resistência à infecção está associada ao desenvolvimento da resposta imune Th1 e Th17 e baixa ativação das células B. Por outro lado, a susceptibilidade é relacionada a uma resposta do tipo Th2, com a ativação policlonal dos linfócitos B. Além de serem responsáveis pela produção de anticorpos, estudos recentes têm demonstrado que uma subpopulação de células B (chamada Bregs) pode exercer um papel regulador da resposta celular, principalmente através da produção de citocinas supressoras (IL-10 e TGF-beta). Neste estudo, tivemos por objetivos comparar a frequência de leucócitos circulantes de pacientes com PCM ativa e controles; e caracterizar, fenotípica e funcionalmente, os linfócitos B na PCM humana, avaliando seu papel como células reguladoras (Breg). Foram analisados amostras de sangue periférico de pacientes com PCM com doença ativa e doadores saudáveis (controle). A quantificação relativa e fenotipagem de leucócitos circulantes foi feita por citometria de fluxo. A análise da capacidade de células B purificadas para produzirem citocinas anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-beta) foi realizada por culturas após vários estímulos (CpG-ODN, CD40L solúvel e DNA de P. brasiliensis e gp43). Nossos resultados mostraram que pacientes com PCM apresentam maior número de células B circulantes (células CD19+ e/ou CD20+) do que controles. Além disso, houve uma maior frequência de células B apresentando fenótipo Breg (células CD20+CD24+CD38high) no sangue periférico de pacientes com PCM em comparação com os controles. Os experimentos in vitro mostraram que as células B de pacientes com PCM apresentam capacidade aumentada para produzir citocinas anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-beta), tanto em células não estimuladas quanto após todos os estímulos utilizados. Em conclusão, nossos resultados, embora preliminares, indicam que as células B poderiam participar como células reguladoras no PCM humana, contribuindo para a supressão da resposta imunológica celular observada em pacientes com PCM ativa, por meio da produção de citocinas supressoras Ver menos

Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by dimorphic fungi of the genus Paracoccidioides (P. brasiliensis and P. lutzii), restricted to Latin America and one of the main systemic mycoses in Brazil. The immune response in PCM is heterogeneous and is related to the development of distinct clinical manifestations. The most serious and widespread disease is characterized by commitiment of lymph nodes, liver, spleen and bone marrow; while mild forms present lesions of the skin, mucosa and lungs. Both clinical forms have a compromised cellular immune response (T cell mediated) and polyclonal activation of B cells. In general, resistance to infection is associated with the development of Th1 and Th17 immune response and low activation of B cells. On the other hand, susceptibility is related to a Th2-type response with polyclonal activation of B lymphocytes. In addition to being responsible for antibody production, recent studies have shown that a B-cell subpopulation (called Bregs) may play a mainly through the production of suppressor cytokines (IL-10 and TGF-beta). In this study, we aimed to compare the frequency of circulating leukocytes in patients with active PCM and controls; and characterize, phenotypically and functionally, B lymphocytes in human PCM, evaluating their role as regulatory cells (Breg). Peripheral blood samples from patients with active PCM and healthy donors (control) were analyzed. Relative quantification and phenotyping of circulating leukocytes was done by flow cytometry. Analysis of the ability of purified B cells to produce anti-inflammatory cytokines (IL-10 and TGF-beta) was performed by cultures after various stimuli (CpG-ODN, soluble CD40L, gp43 and DNA form P. brasiliensis). Our results showed that patients with PCM present a greater number of circulating B cells (CD19 + and / or CD20 + cells) than controls. In addition, there was a higher frequency of Breg phenotype presenting Breg phenotype (CD20 + CD24 + CD38high cells) in the peripheral blood of PCM patients compared to controls. In vitro experiments have shown that B cells from patients with PCM have increased capacity to produce anti-inflammatory cytokines (IL-10 and TGF-beta), both in unstimulated cells and after all stimuli used. In conclusion, our results, although preliminary, indicate that B cells could participates as regulatory cells in human PCM, contributing to the suppression of the cellular immune response observed in patients with active PCM, through the production of suppressor cytokines Ver menos