Resumo: A orto-fosfo-L-tirosina (P-Tyr) é um derivado do aminoácido tirosina, obtido pela substituição do grupamento hidroxil por um grupamento fostato, processo conhecido como fosforilação. P-Tyr foi imobilizado em gel de agarose ativado com 1,4 butanodiol diglicidil éter (bisoxirano) e, em seguida, o efeito do tipo de sistema tamponante, do pH e da condutividade, foram estudados para avaliar a natureza da interação entre IgG-P-Tyr. A análise da contribuição dos diferentes grupamentos funcionais presentes na estrutura do P-Tyr na adsorção de IgG humana indicou a predominância de interação eletrostática através do grupamento fosfato, embora a contribuição dos grupamentos aromáticos e carboxílico não possa ser descartada. Foi possível obter IgG com pureza maior que 90% quando o plasma foi diluído em três deles: HEPES, a 25 mmol L-1 pH 7,0, Tris-HCl e fosfato de sódio (NaP), a 10 mmol L-1 em pH 7,0 e 6,0, respectivamente. Para o sistema tamponante EPES, a capacidade máxima de adsorção de IgG foi de 273,51 ? 12,63 mg g-1, obtida a 20°C e para o NaP foi de 179,00 + 10,31 mg g-1, a 25ºC. A constante de dissociação foi da ordem de 10-5 mol L-1, indicando afinidade média de IgG por P-Tyr. Foi possível obter o fragmento Fab sem contaminação de fragmentos Fc na etapa de eluição (baseado na análise de Western blot), com 98% de pureza e 86% de recuperação somente para o sistema tamponante HEPES 25 mmol L-1 pH 7,0 Ver menos

Abstract: The ortho-fosfo-L-tyrosine (P-Tyr) is an amino acid derivative, that is obtained, replacing the hydroxyl group by a phosphate group, process known as phosphorylation. P-Tyr was firstly immobilized in agarose gel activated with 1,4 (bisoxiran), then the effect of buffer systems, pH and conductivity were studied in order to evaluate the nature of the interaction between IgG and P-Tyr. The analysis of how the various functional groups present in the P-Tyr chemical structure contribute to the adsorption of human IgG indicated the predominance of electrostatic interaction through the phosphate group, although the contribution of the carboxylic and aromatic groupings cannot be discarded. Purity greater than 90% was obtained for three of them: 25 mmol L-1HEPES at pH 7.0; 10 mmol L-1Tris-HCl at pH 7.0 and 10 mmol L-1sodium phosphate (NaP) at pH 6.0. For the buffer system 25 mmol L-1 HEPES at pH 7.0, the maximum adsorption capacity was achieved at 20 °C and was of 273.51 ? 12.63 mg g-1, while for 10 mmol L-1NaP at pH 6.0 it was of 179.00 + 10.31 mg g-1, reached at 25 °C. Furthermore, the dissociation constant for these both buffers system were of the order of 10-5 mol L-1, which indicates a medium affinity. Fab fragment was successfully adsorbed without Fc contamination when the buffering system 25 mmol L-1HEPES at pH 7.0 was applied (Western blot based), resulting in a 86% of recuperation and 98% of purity Ver menos