5-aza-2cdr promoted MGMT demethylation and modified expression of different genes in SCC-9 cells [recurso eletrônico] = 5-aza-2cdr promove desmetilação do MGMT e modifica expressão de diferentes genes nas células SCC-9
Guilherme Castro Lima Silva do Amaral
DISSERTAÇÃO
Inglês
T/UNICAMP Am13c
[5-aza-2cdr promove desmetilação do MGMT e modifica expressão de diferentes genes nas células SCC-9]
Piracicaba, SP : [s.n.], 2018.
1 recurso online (48 p.) : il., digital, arquivo PDF.
Orientador: Ana Paula de Souza
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Resumo: O câncer de cabeça e pescoço é a sexta neoplasia mais frequente no mundo sendo que mais de 90% são do tipo carcinoma escamoso. O carcinoma escamoso oral surge de uma desdiferenciação maligna das células do estrato espinhoso do epitélio da mucosa oral e é geralmente associada ao consumo de...
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Resumo: O câncer de cabeça e pescoço é a sexta neoplasia mais frequente no mundo sendo que mais de 90% são do tipo carcinoma escamoso. O carcinoma escamoso oral surge de uma desdiferenciação maligna das células do estrato espinhoso do epitélio da mucosa oral e é geralmente associada ao consumo de cigarro e/ou bebidas alcoólicas. O surgimento dessa neoplasia pode estar associado com a presença de mutações genéticas, bem como, com a presença de eventos epigenéticos, como a metilação do DNA. Na tentativa de reverter a metilação do DNA, a droga desmetilante 5-aza-2¿-deoxycitidina (5-aza-2CdR), formulada em 1968, foi inicialmente utilizada no tratamento de leucemias e de síndromes mielodisplásicas. No entanto, o uso dessa substância em tumores sólidos passou a ser liberado em meados de 2015 e, assim, pouco ainda se sabe sobre sua ação no carcinoma oral. A fim de abordar essa questão, investigamos o efeito do agente desmetilante 5-aza-2CdR em células da linhagem SCC-9 como também seu efeito sobre a expressão dos genes supressores tumorais MGMT, APC e BRCA1 e dos oncogenes cMYC e hTERT. Para isso, células SCC-9 foram tratadas com 5-aza-2CdR na concentração de 0,3µM ou 2µM, durante 24 horas ou 48 horas. Foi realizado o teste MTT para análise da citotoxicidade das doses empregadas e observamos que, em ambos tempos, a concentração de 2?M foi citotóxica. Usando a técnica de análise de melting (MS-HRM), nossos resultados mostraram que 5-aza-2CdR provocou uma desmetilação parcial no promotor do gene MGMT após 48 horas de tratamento o que não foi observado para o gene hTERT que se manteve hipermetilado. Os demais genes analisados BRCA1, APC e cMYC foram observados originalmente desmetilados na região analisada em células SCC-9. Quanto à transcrição que foi analisada por PCR tempo real, os genes supressores de tumores MGMT, APC e BRCA1 foi positivamente regulada enquanto a expressão do gene cMYC foi negativamente regulada nas células expostas à droga por 48h. Em contrapartida, o gene hTERT mostrou uma diminuição da expressão que foi seguida por uma recuperação na expressão no tempo de 48horas. Os resultados também mostraram que a expressão gênica dos genes supressores tumorais sofreu aumento ainda mais significante quando as células foram expostas à dose menor da droga (0,3µM). Dessa forma, concluímos que a aplicação do agente desmetilante 5-aza-2cdr em baixa concentração aumentou a expressão dos genes supressores tumorais (MGMT, APC e BRCA1 ) e diminuiu a expressão do proto-oncogene cMYC em células de carcinoma espinocelular de oral
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Abstract: Head and neck cancer is the sixth most frequent neoplasm in the world, with more than 90% representing squamous cell carcinoma. Oral squamous cell carcinoma arises from a malignant dedifferentiation of epithelium cells generally associated with the consumption of cigarettes and alcoholic...
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Abstract: Head and neck cancer is the sixth most frequent neoplasm in the world, with more than 90% representing squamous cell carcinoma. Oral squamous cell carcinoma arises from a malignant dedifferentiation of epithelium cells generally associated with the consumption of cigarettes and alcoholic beverages. This tumor is characterized by an accumulation of mutations and epigenetic alterations, including DNA methylation. To reverse DNA methylation, 5-aza-2'-deoxycytidine was formulated in 1968, and initially it was used in leukemias and myelodysplastic syndrome treatment. The use in solid tumors was released in 2015 and, therefore, little is known about its action in oral cancer. In order to address this issue, we investigated the effect of demethylating agent 5-aza-2'-deoxycytidine in SCC9 cells as well as the effects on transcription the tumor suppressor genes MGMT, APC and BRCA1 and oncogenes cMYC and hTERT. SCC-9 cells were exposed to 5-aza-2'-deoxycytidine at concentrations of 0.3 µM or 2 µM during 24 hours or 48 hours. After, high resolution melting analysis (MS-HRM) was performed in order to determinate genes methylation pattern. Results showed partial demethylation of the MGMT gene after 48 hours of 5-aza-CdR treatment. No difference was observed in hTERT gene that remained hypermethylated. The other genes BRCA1, APC and cMYC were found orinally demethylated in the analyzed region. Tumor suppressor genes MGMT, APC and BRCA1 were up regulated and oncogene cMYC was down regulated after 48h of 5-aza-2CdR treatment. Our results also showed that transcription of tumor suppressors genes was significantly increased in cells exposed to lower dose of drug (0.3µM). Thus, we concluded that the low concentration of 5-aza-2cdr demethylating agent increased the expression of tumor suppressor genes (MGMT, APC and BRCA1) and decreased cMYC proto-oncogene expression in oral squamous cell carcinoma cells
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Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDF
de Souza, Ana Paula, 1975-
Orientador
Brito Junior, Rui Barbosa de
Avaliador
Della Coletta, Ricardo, 1972-
Avaliador
5-aza-2cdr promoted MGMT demethylation and modified expression of different genes in SCC-9 cells [recurso eletrônico] = 5-aza-2cdr promove desmetilação do MGMT e modifica expressão de diferentes genes nas células SCC-9
Guilherme Castro Lima Silva do Amaral
5-aza-2cdr promoted MGMT demethylation and modified expression of different genes in SCC-9 cells [recurso eletrônico] = 5-aza-2cdr promove desmetilação do MGMT e modifica expressão de diferentes genes nas células SCC-9
Guilherme Castro Lima Silva do Amaral