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Resumo: O vírus da hepatite B (VHB) pode ser classificado em oito principais genótipos (A-H), e essa classificação tem uma distribuição geográfica determinada. Os genótipos do VHB podem influenciar na progressão de doença. O objetivo foi determinar os genótipos e os subtipos do VHB e correlacioná-los com as variáveis clínicas epidemiológicas, laboratoriais e histológicas. Foram determinados os genótipos de 139 amostras de soro de pacientes infectados pelo VHB, coletadas em Campinas, no estado de São Paulo, Brasil. O método para genotipagem utilizado foi o seqüenciamento parcial do gene S do VHB. Os primers utilizados foram desenhados a partir de seqüências do gene S, com genótipo determinado, depositadas no GenBank. Todas as seqüências obtidas foram comparadas com as seqüências depositadas no GenBank para determinação dos genótipos. O genótipo A (55%) do VHB foi o mais predominante na população, seguido pelos genótipos C (3%), D (38%) e F (4%). Entre os pacientes infectados pelos genótipos A e D, observou-se uma provável descendência africana de 18% (14/76) e 11% (6/53), respectivamente. Entre os quatro pacientes infectados pelo genótipo C, dois possuíam descendência asiática e dois eram caucasianos. Todos os pacientes infectados pelo genótipo F eram caucasianos sem ascendência indígena relatada. Aproximadamente 30% dos pacientes eram HBeAg positivo e 70% eram HBeAg negativo. A carga viral do DNA-VHB foi aproximadamente cinco vezes mais alta entre os HBeAg positivo quando comparada aos HBeAg negativo. Os genótipos A e D são os mais prevalentes entre os pacientes, aparentemente em virtude da imigração européia em nossa região

Resumo: Cordia curassavica DC. (Boraginaceae) conhecida popularmente como "erva baleeira" é utilizada popularmente no tratamento de diversos processos inflamatórios. Alguns autores sugerem que a tração artemetina é a tração responsável pela atividade antiinflamatória. No entanto, resultados contraditórios sugeriram uma reavaliação dos efeitos antiinflamatórios dos extratos e da fração rica em artemetina de Cordia curassavica, e ainda identificar a tração ativa responsável pela ação farmacológica. Para a avaliação da atividade antiinflamatória, foram utilizados modelos de edema de pata induzido por vários agentes flogísticos como a carragenina, histamina, bradicinina e fosfolipase da Naja-Naja; edema de orelha induzido por óleo de cróton e peritonite induzida por carragenina. Para a avaliação da atividade antinociceptiva foram utilizados o teste de algesia induzida por calor (placa quente) e o teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético. A metodologia da atividade antiproliferativa em células tumorais humanas foi utilizada para monitoramento do processo de purificação do extrato bruto diclometânico. Inicialmente foram obtidos os extrato brutos éter de petróleo (EBP), etanólico (EBE) e diclorometânico (EBD), que foram avaliados no modelo de pata induzido por carragenina. O EBP não inibiu o edema e o EBE reduziu em 44% após 4 horas do agente flogístico. Como o EBD inibiu o edema induzido por carragenina em 59% após 4 horas da administração do agente flogístico e também por extrair quantidades menores de substâncias, facilitando fracionamentos posteriores, foi escolhido para dar continuidade a este trabalho. No modelo de edema de pata induzido por histamina o EBD de C. curassavica não inibiu o edema, ao passo que nos modelos de edema de pata induzido por bradicinina o EBD de C. r:Jlasumo curassavica reduziu o edema induzido por bradicinina em 60 % e 66% nas doses de 300 e 1000 mglkg após 60 minutos da aplicação do agente, respectivamente. O EBD de C. curassavica reduziu o edema induzido pela fosfalipase Az do veneno da Naja Naja em 37 % e 45% nas doses de 300 e 1000 mglkg respectivamente, após 60 minutos da aplicação do agente. No modelo de dermatite provocada pela aplicação de óleo de cróton, o EBD de C. curassavica também inibiu a formação de edema em 54% na dose de 1000 mglkg e na peritonite induzida por carragenina diminuiu a migração leucocitária em 70%. Em ratos adrenalectomizados o EBD manteve a atividade antiedematogênica, inibindo o edema em 45% após 4 horas da administração da carragenina, confirmando que sua atividade independe da liberação de corticóides endógenos. No modelo de nocicepção químico, o EBD de C. curassavica inibiu o número de contorções abdominais induzidas pelo ácido acético em 54% (dose de 300 mglkg) e 65% (dose de 1000 mglkg). Já no teste da placa quente o EBD de C. curassavica não aumentou o tempo de reação dos animais ao estímulo térmico, sugerindo que a ação analgésica do EBD é por bloqueio da reação inflamatória. Na avaliação da atividade antiproliferativa em cultura de células tumorais humanas, a F3, F4 e a fração F6 apresentou efeito citostático e citocida de modo semelhante à indometacina. Os resultados obtidos permitem concluir que a C. curassavica possui princípios ativos com atividade antiinflamatória provavelmente relacionada com a inibição da síntese e/ou atividade dos prostanóides. A artemetina, encontrada nessa espécie, não é o princípio ativo responsável pelos efeitos observados

Resumo: Os eosinófilos estão envolvidos na patogênese de várias doenças inflamatórias crônicas? incluindo doenças inflamatórias intestinais (Dll)? como doença de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa inespecífica (RCVI). No entanto? ainda é desconhecido como os eosinófilos contribuem para a patogênese das Dll. Portanto? o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade dos eosinófilos isolados de sangue periférico de pacientes com Dll comparada aos voluntários sadios. Eosinófilos dos voluntários sadios (n=5)? com DC (n=5) e RCVI (n=5) foram purificados usando-se um gradiente de Percoll? seguido de separação imunomagnética. A atividade dos eosinófilos foi avaliada usando-se os ensaios de quimiotaxi~ adesão? liberação de peroxidase do eosinófilo (EPO)? citometria de fluxo? contagem histológica e análise morfométrica. A quimiotaxia dos eosinófilos induzida pelo N-formyl-metionyl-Ieucyl-fenilanina(fMLP) foi significativamente maior para as células isoladas de pacientes com DC e RCVI? quando comparada aos voluntários sadios.A adesão basal dos eosinófilos de pacientes com DC aumentou significativamente para fibronectina ou soro? quando comparada aos voluntários sadios e RCVI. A liberação basal e estimulada de EPO foi reduzida em células de pacientes com DC? quando comparada aos voluntários sadios. Entretanto? em células isoladas de pacientes com RCVI? a liberação de EPO basal foi significativamente maior quando comparada aos voluntários sadios. A expressão das moléculas de adesão macrophage-l antigen (Mac-l) e very late antigen 4 (VLA-4) não apresentou diferença em relação aos voluntários sadios. A contagem histológica dos eosinófilos em tecido intestinal e morfométrica dos grânulos destas células mostrar~ respectivamente? aumento significativo do número de eosinófilos e de seus grânulos em pacientes com DC e RCVI quando comparadas aos voluntários sadios. Nossos resultados sugerem que os eosinófilos periféricos estão pré-ativados em pacientes com Dll. A ativação dos eosinófilos periféricos? seguida da migração para o tecido intestinal deve contribuir para a patogênese das Dll

Resumo: A febre aftosa é uma patologia viral, infecto-contagiosa, caracterizada por um cenário repleto de incertezas que lhe são inerentes, resultantes da influência de fatores socioeconômicos e ambientais relacionados ao processo de transmissão, que pode ocorrer por via direta e indireta. Em epidemiologia, grande parte das incertezas são tratadas ou pela Teoria das Probabilidades ou pela Teoria de Conjuntos Fuzzy, a depender da natureza, seja ela oriunda da aleatoriedade ou de verdade parcial. O uso integrado de modelos clássicos, particularmente as Equações Diferenciais Parciais (EDP), modelos fuzzy e probabilísticos no tratamento das duas classes de incertezas ainda é muito incipiente. Com a intenção de contribuir para o aumento dos estudos nessa área, propõe-se um modelo integrado, envolvendo EDP, lógica fuzzy e métodos probabilísticos, a fim de estudar a dinâmica espacial e temporal de fenômenos epidemiológicos, cujas incertezas são importantes para sua evolução. Para tanto, tomou-se como objeto de estudo a febre aftosa em bovinos e elaborou-se um modelo SIR envolvendo EDP para estudar sua evolução espaço-temporal com parâmetros de difusão e transmissão incertos. Esses foram estimados fazendo-se uso de Sistemas Baseados em Regras Fuzzy (SBRF). As variáveis lingüísticas utilizadas nos SBRF apresentaram incertezas de natureza aleatória, as quais foram tratadas por modelos estocásticos. Na implementação computacional, fez-se o acoplamento dos métodos de elementos finitos para a discretização espacial, e Cranck-Nicolson para a temporal, toolbox fuzzy para os modelos fuzzy e Monte Carlo para os modelos estocásticos, todos em um mesmo algoritmo, construído nos ambientes Matlab e Fortran.

Resumo: Esta pesquisa foi realizada como o objetivo de verificar se a fisioterapia respiratória favorece o surgimento de refluxo gástrico de dieta enteral para a cavidade orofaríngea em pacientes adultos, sedados, portadores de via aérea artificial e necessitando ventilação mecânica. Efetuou-se um estudo experimental prospectivo, utilizando-se o modelo estatístico caso-controle, empregou-se grupo experimenta~ o qual os pacientes recebiam tratamento fisioterápico e o grupo controle, o qual os pacientes não recebiam tratamento fisioterápico. A amostra foi composta por 20 pacientes em cada grupo, os quais recebiam dieta enteral por sonda de alimentação alocada no estômago. Utilizou-se como marcador do refluxo gástrico de dieta enteral o corante azul-de-metileno, injetado no intervalo entre a metade e a outra metade do volume total de dieta enteral infundida. Se os pacientes apresentassem colorações azuladas em suas secreções orofaríngeas, verificado por três profissionais da saúde no final do experimento, estaria evidenciado o refluxo de dieta enteral. Ao final de cada experimento, tanto no grupo controle como no grupo experimenta não foram encontradas, secreções azuladas, em nenhum paciente durante as inspeções da sua cavidade orofaríngea. Este fato nos permitiu concluir que a fisioterapia respiratória, neste grupo de pacientes, não propicia o refluxo de dieta enteral para a cavidade orofaríngea

Resumo: O estado homozigoto para hemoglobina S é denominado anemia falciforme. A inflamação tem papel importante no processo de vaso-oclusivo nesta doença; leucócitos, citocinas pró-inflamatórias e moléculas de adesão estão aumentados no sangue periférico dos pacientes com anemia falciforme. A leucocitose está associada com a morbidade e mortalidade nestes pacientes. Além disso, os neutrófilos de pacientes com anemia falciforme apresentam aumento nas propriedades adesivas e quimiotáticas. No entanto, há poucas evidências sobre as possíveis alterações funcionais dos eosinófilos e na produção de mediadores derivados destas células. Os eosinófilos participam intensamente de processos inflamatórios das vias aéreas, são numericamente maiores e apresentam propriedades adesivas aumentadas na anemia falciforme. Os pulmões são particularmente vulneráveis aos eventos vaso-oclusivos na anemia falciforme e as complicações pulmonares são as principais causas de morte e a segunda causa mais comum de hospitalização em pacientes com esta doença. Atualmente a hidroxiureia é o único medicamento utilizado no tratamento das manifestações clínicas da anemia falciforme, por aumentar os níveis de Hb fetal, reduzindo a polimerização da hemoglobina S, a neutrofilia e algumas complicações associadas ao fenômeno vaso-oclusivo. Considerando a escassez de estudos que avaliaram a participação dos eosinófilos na fisiopatologia da anemia falciforme, este projeto visou comparar as propriedades adesivas, a capacidade quimiotática, a desgranulação e a produção de mediadores em eosinófilos de pacientes com anemia falciforme. Além disso, foi investigado se o tratamento com hidroxiureia interfere nas funções dos eosinófilos. Amostras de sangue periférico de pacientes com anemia falciforme foram analisadas e demonstraram maior número absoluto de eosinófilos comparados aos pacientes sem o tratamento com hidroxiureia e aos indivíduos controle. A adesão basal dos eosinófilos de pacientes tratados com hidroxiureia confirmamos que estas células são mais aderentes a fibronectina que os eosinófilos de pacientes com anemia falciforme sem o mesmo tratamento e de indivíduos controle. Além disso, não foi observada nenhuma alteração na adesão destas células quando estimulada com quimiocinas (RANTES, Eotaxina, IL-5). A citometria de fluxo foi utilizada para comparar a expressão e ativação das principais moléculas de adesão nestes eosinófilos, e identificou-se um aumento de expressão da subunidade ? da integrina MAC-1 de pacientes com anemia falciforme sem tratamento com hidroxiureia. Os eosinófilos de pacientes com anemia falciforme em tratamento ou não com hidroxiureia apresentaram maior capacidade de migração espontânea e em resposta aos agentes quimiotáticos (RANTES, Eotaxina, IL-5). Além disso, estes pacientes apresentaram níveis séricos e plasmáticos de RANTES e de Eotaxina-1 elevados. Os eosinófilos de pacientes com anemia falciforme apresentaram maior desgranulação, consequentemente liberou maior quantidade de peroxidase eosinofílica e de neurotoxina derivada dos eosinófilos que os pacientes que foram tratados com hidroxiureia e aos indivíduos controle, mas a co-incubação com RANTES, Eotaxina e IL-5 não alterou esta resposta. Por fim foi observado aumento na produção de espécies reativas de oxigênio nestes pacientes. No conjunto, nossos resultados sugerem que os eosinófilos contribuem significativamente para o processo de vaso-oclusão observado na anemia falciforme

Resumo: A anemia falcifonne é uma doença hereditária com alta incidência na população, causada por um defeito estrutural na cadeia da f3-globinaque origina a HbS. Essa hemoglobina anômala, sob baixas tensões de oxigênio, fonna polímeros intracelulares, provocando a defonnação dos eritrócitos que por sua vez bloqueiam a microcirculação, ocasionando infarto de vários órgãos. Estudos clínicos demonstraram que a HbF possui a capacidade de inibir a polimerização da HbS e reduzir a falcização, melhorando assim o quadro clínico. A indução farmacológica por vários compostos químicos, dentre os quais a hidroxiuréia (HU), 5-azacitidina, butirato e os hormônios esteróides, aumentam a síntese de HbF em pacientes com anemia falciforme. A regulação da expressão da HbF está relacionada à presença de elementos ativos ligados em "eis" ao complexo da f3-globina, bem como de proteínas regulatórias do processo de transcrição gênica denominadas fatores de transcrição, como as proteínas GATA-I, GATA-2 e NF-E2, expressas principalmente na linhagem eritróide. Esse projeto teve por objetivo estudar o efeito da HU e do honnônio progesterona na modulação da expressão gênica pelos fatores de transcrição GATA-I, GATA-2 e NF-E2 e do gene y globina, em células da linhagem eritróide obtidas através da cultura de duas fases a partir de sangue periférico de doadores de sangue atendidos no Hemocentro da Unicamp. A expressão dos genes destes fatores de transcrição foi determinada por RT-PCR semiquantitativo e quantificação por densitometria. Os nossos resultados mostraram que nas células tratadas com HU ou progesterona houve aumento significativo da expressão do fator de transcrição GATA-I e do gene y globina a partir de 96hs da Fase TI do sistema de cultura líquida em duas fases até o seu término com 2I6hs, quando comparada com as células sem tratamento (P < 0,05, teste de Wilcoxon). A expressão do fator de transcrição NF-E2 não demonstrou softer influência pela administração de HU e progesterona durante todo o processo de diferenciação eritróide e ambos os fármacos não exerceram qualquer influência de caráter significativo sobre a expressão do fator de transcrição GATA-2 (p> 0,05, teste de Wilcoxon)

Resumo: Uma das abordagens terapêuticas não específica utilizada no tratamento da Esclerose Múltipla é o Interferon beta (IFNf3).A Esclerose Múltipla (E.M) é uma doença auto-imune que se caracteriza por inflamação e desmielinizaçãode múltiplas áreas da substância branca do SNC, com posterior lesão do oligodendrócito, resultando clinicamente em disfunção neurológica. O modelo experimental que apresenta muitos aspectos clínicos e histológicos para esta doença é a Encefalomielite Experimental Auto-imune (E.A.E), causada por linfócitos T CD4 tipo Thl, podendo ser induzida em murinos pela inoculação de clones auto-reativos aos componentes da mielina como a proteÚla básica de mielina e a proteolipoproteÚla. A obtenção de tolerância aos antígenos próprios, resulta em mecanismos que levam à supressão de clones de linfócitos específicos para os componentes da mielina como a regulação através de citocinas, e deleção e a anergia dos clones auto-reativos. Diante disso, resolvemos acompanhar o efeito da terapia com IFNf3 sobre a participação de algumas moléculas envolvidas com a doença. Com relação a deleção, observamos o aumento da molécula Fas, tanto na superficie como na sua forma solúvel, detectada em linfócitos e no soro dos pacientes com E.M, incubando-os com os devidos anticorpos e analisando em citômetro de fluxo e ELISA, respectivamente. Com relação a anergia, observamos diminuição de CD80 (que ativam linfócitos Thl) e um aumento significativo na expressão CTLA4, quando quantificamos em linfócitos de murinos com E.A.E, incubando as células com os devidos anticorpos. Foi detectado também, um aumento nos níveis de CTLA4 intracelular (marcador responsável pela regulação negativa dos linfócitos) em pacientes com E.M, incubando as células com os devidos anticorpos e analisando em citometria de fluxo. Paralelamente, estudamos o efeito in vitro dos linfócitos de murinos e humanos afetados, incubando-oscom neuroantígenos e analisandoem Cintilador Beta. Concluímos com os dados obtidos nesse estudo que o IFNf3,modifica vários aspectos da resposta imunológica, fazendo com que clones de linfócitos T respondessem bem menos aos neuroantígenos, sugerindo que estes linfócitos podem estar sendo imunorregulados por anergia ou por apoptose, quando comparados ao grupo não tratado e grupo controle

Resumo: o infarto do miocárdio é conseqüência de grave isquemia do coração, geraJmente, causada por placas ateroscleróticas que se alojam nas coronárias e podem gerar trombos. Muito já se conhece sobre este evento, não havendo segredos da sua evolução natural, desde a apresentação clínica até a terapêutica. Entretanto, a repercussão do infarto do miocárdio sobre a reatividade do aparellio circulatório, no que se refere à sua fase recente, ainda se apresenta obscura. A disfunção endotelial ocorre precocemente na aterosclerose e encontra-se presente em uma outra série de patologias, tais como: hipertensão arterial, diabetes, hipercolesterolemia, insuficiência cardíaca, etc; porém, há controvérsias se o infarto do miocárdio estaria entre elas. Com o intuito de contribuir para o entendimento deste assunto, realizamos este traballio com os seguintes objetivos: 1) Estudar a função endotelial na vigência do infarto experimental do miocárdio em ratos, em sua fase recente; 2) verificar o efeito do inibidor da enzima de conversão da angiotensina (IECA) e do receptor específico de angiotensina (ATI) sobre a função endotelial;. 3) observar a influênciado IECA e do inibidor específico do ATl na mortalidade dos animais. Usou-se 80 ratos wistar machos pesando, entre 350-400 g, os quais foram divididos em oito grupos: grupo controle (RNN), grupo sham (RSS), grupo infarto médio (RIM), grupo infarto grande (RIG), grupo infarto médio e tratado com lisinopril(IECAM), grupo infarto grande e tratado com lisinopril (IECAG), grupo infarto médio tratado com losartan (ATIM) e o grupo infarto grande tratado com losartan (ATIG). O IECA e ATl escolhidos foram lisinopril e losartan, nas doses de 20 mg/kg/dia e 30 mg/kg/dia, respectivamente, sendo estas doses suficiente para a redução de aproximadamente 25% da pressão arterial confirmada pela medida na cauda dos animais. Os medicamentos foram administrados através de intubação orogástrica, dois dias antes de se submeterem à cirurgia e continuando por sete dias após o infarto do miocárdio. O infarto foi realizado por ligadura proximal da coronária descendente anterior esquerda, após toracotomia. Os animais operados foram mantidos em gaiolas com água e alimentação "ad libitum" e sacrificados através de inalação com éter etílico. Verificou-se a presença do infarto do miocárdio através da técnica de coloração com TTC (c1oreto de trifenil tetrazólio) a 1% e o estudo histopatológico foi realizado com coloração pela hematoxilina-eosina. Os infartosforam classificadosem ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Resumo: o diabetes mellitus do tipo I resulta da destruição autoimune das células ~ da ilhota pancreática. O camundongo NOD desenvolve o diabetes tipo I espontaneamente sendo utilizado como modelo para a expressão auto-imune dessa doença em humanos. O processo inflamatório das ilhotas pancreáticas (insulite), que precede a destruição das células ~, tem início por volta da 4a semana de vida tanto em machos quanto em fêmeas. Nestes animais a incidência do diabetes é predominante em fêmeas (com início ao redor da lSa semana) variando entre 60-90% e 10-20% em machos até 30 semanas de vida. A infiltração das ilhotas pancreáticas por células do sistema imune, seguida pela perda das célul~s ~produtoras de insulina é o aspecto histológico característico do diabetes tipo 1. Este pode envolver o contato entre células efetoras (linfócitos T CD4+ e CD8+) e célulasalvo (ilhota) resultando na liberação de mediadores solúveis. Citocinas produzidas pelas células ativadas no infiltrado inflamatório são os prováveis agentes da perda de função e destruição das células da ilhota e do diabetes. Linfócitos Thl produzem citocinas próinflamatórias como IL-2, IFN-y TNF-a contribuindo para patogênese do diabetes tipo I. Além disso, a apoptose das células ~tem sido associada com a manifestação do diabetes tanto em modelos experimentais como em humanos. Vários estudos implicam Fas, Fas-L, perforinas e TNF-a como efetores da morte por apoptose das ilhotas. No presente trabalho analisamos a expressão gênica de citocinas e componentes apoptóticos em ilhotasisoladas,pâncreas, sangueperiféricoe baço de camundongosNODnão diabéticos com idades entre 2-28 semanas de vida e diabéticos. Camundongos da linhagem CBA/j foram usados como controle. A detecção de apoptose in situ foi realizada pelas técnicas de Feu1gene TUNEL, morfometria para análise dos graus de insulite e imunoistoquímica para identificação do infiltrado inflamatório. Os resultados confirmam a presença de citocinas pró-inflamatórias em ilhotas isoladas por todo período de vida do animal. Estes dados foram correlacionados com a presença de apoptose (detectada pelas técnicas de Feulgen e TUNEL), análise da extensão da insulite e fenotipagem do infiltrado com o avanço do processo inflamatório e envelhecimento do animal. Além disso, o aumento da expressão de Fas, Fas-L e Bc1-wnos animais com intenso processo inflamatório sugere a apoptose como ocorrência de mecanismos efetores que, associada à expressão de citocinas pró-inflamatórias, correlacionam-se com o avanço dos estágios do processo inflamatório na ilhota pancreática no camundongoNOD

Resumo: As enzimas do sistema da glutationa S-transferase (GST) mediam a exposição a agentes citotóxicos e genotóxicos e parecem compromissadas com a susceptibilidade ao câncer. Os genes GSTM1 e GSTT1 apresentam um genótipo variante, a deleção homozigótica, no qual o gene inteiro está ausente. A associação dos genótipos do GST com o risco de ocorrência do câncer colorretal (CC) não está completamente esclarecida. Por outro lado, uma maior freqüência do polimorfismo 0104N do gene CaL 18A1, um inibidor da angiogênese, foi observada em pacientes com adenocarcinoma prostático, quando comparados a indivíduos normais, sugerindo que sua presença possa influenciar o desenvolvimento de tumores sólidos dependentes da angiogênese, como o CC. Neste estudo, nós testamos se a deleção homozigótica do genes GSTM1 e GSTT1 e o polimorfismo 0104N alteram o risco de adenocarcinoma colorretal esporádico (ACE). Para cumprir tais objetivos, o ONA genômico de 102 pacientes com ACE e 300 controles foi analisado por meio da reação em cadeia da polimerase e digestão enzimática. As freqüências da deleção dos genes GSTM1 (49,9%) e GSTT1 (16,6%) em pacientes foram similares àquelas observadas em controles (44,6 e 17,3%, respectivamente). Não foram também observadas diferenças significativas entre as freqüências da deleção combinada dos genes em pacientes e controles (8,8% vs 8,0%). A observação de riscos de 1,03 (IC 95%: 0,96-1,10) e 1,08 (IC 95%: 0,99-1,18) associados com as deleções isoladas dos genes GSTM'/ e GSTT1, respectivamente (P=0,45 e P=0,08), e de 1,18 (IC 95%: 0,47-2,90) associado com a deleção combinada dos genes (P=0,74), sugere que a ausência hereditária desta via de detoxificação de carcinógenos não teve importância na determinação do ACE em nossos casos. Ainda, as freqüências do polimorfismo 0104N foram similares em pacientes e controles (15,7% e 14,0%, respectivamente; P=0,80). O risco de 0,98 (IC 95%: 0,89-1,08), associado com este polimorfismo do gene CaL 18A1, sugere que ele também não influenciou a susceptibilidade ao ACE em nossos casos. Entretanto, a deleção do gene GSTT1 foi mais comum em pacientes com idade menor do que 60 anos, quando comparados àqueles com idade maior do que 60 anos (28,8% vs 4,0%, respectivamente; P=0,001), sugerindo que este genótipo possa ter influenciado a idade de manifestação da doença em nossa amostra

Resumo: o estresse mecânico é o principal fator responsável pelos ajustes funcionais e estruturais do miocárdio em resposta a sobrecarga de trabalho. Tal estímulo determina a ativação de uma intricada rede de vias de sinalização celulares que, por fim, culminam com o crescimento hipertrófico de cada cardiomiócito. A quinase de adesão focal (FAK) tem sido implicada como a principal molécula sinalizadora envolvida na resposta dos cardiomiócitos ao estresse mecânico. No entanto, os mecanismos da ativação da FAK pelo estímulo mecânico ainda não são conhecidos. No presente estudo investigamos a ativação e distribuição subcelular da FAK em cardiomiócitos submetidos à sobrecarga pressora aguda, visando assim contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos de ativação da FAK pelo estímulo mecânico. A sobrecarga pressora por períodos de 3 a 60 minutos levou a fosforilação da FAK nos seus resíduos de tiro sina Tyr-397, -576/7, -861 e 925, conforme detectado pelos anticorpos fosfoespecíficos. Tal ativação foi paralela ao aumento da associação FAK/Src e simultâneo aumento da atividade da Src, constatada pela fosforilação da Tyr-418. A ativação do complexo FAK/Src foi ainda acompanhada pela ativação de efetores downstream, ERK e JNK (MAPKs), possivelmente reguladores de processos celulares vinculados a resposta hipertrófica. A análise por imunomicroscopia eletrônica com anticorpos contra a FAK demonstrou que em cardiomiócitos de ratos controle a FAK se encontrava preferencialmente localizada junto aos costâmeros, linhas Z, discos intercalares e filamentos do sarcômero. Além disso, a sobrecarga pressora por períodos de 3 a 60 minutos induziu a formação de agregados da FAK juntos a estes mesmo sítios subcelulares e, posteriormente, levou a translocação da FAK para o compartimento nuclear, dado este confirmado por :fTacionamentocelular. Paralelamente, estudo desenvolvido em nosso laboratório, com o emprego da metodologia de duplo híbrido em uma biblioteca de cDNA de rato adulto na busca de novas proteínas que interagissem com a FAK, revelou que esta quinase interage com a cauda da miosina de cadeia pesada (MHC). Este dado foi confirmado no presente estudo em ensaios de ligação com GST-miosina, que detectou a interação FAKlMHC em extratos ventriculares de ratos controle e sobrecarregados. A interação entre a FAK e a :MHCse encontrava aumentada em ventrículos esquerdos obtidos de ratos submetidos à sobrecarga hemodinâmica por 10 minutos se comparada aquela dos ventrículos controle, mas sofreu redução significativa em ventrículos esquerdos obtidos de ratos submetidos à sobrecarga pressora por 60 minutos. Dados similares foram obtidos para a FAK fosforilada em sua tirosina 397, conforme detectado com anticorpos fosfoespecíficos. ./ N'óssos resultados sugerem que a ativação da FAK pelo estímulo mecânico pode ocorrer junto a múltiplos sítios subcelulares (costâmeros, linhas Z, discos intercalares e filamentos de miosina), os quais atuariam como verdadeiros mecanosensores em cardiomiócitos, desempenhando importante papel na mecanotransdução de sinais decorrente do estresse mecânico. No mais, nossos dados sugerem ainda que a FAK pode desempenhar funções no compartimento nuclear relacionadas à resposta hipertrófica em cardiomiócitos submetidos ao estresse mecânico

Resumo: Fundamentação: O estímulo mecânico é o principal fator responsável pela indução de crescimento celular hipertrófico em miócitos cardíacos em condições de sobrecarga hemodinâmica. Dados experimentais disponíveis indicam que este efeito do estiramento mecânico se faz através da ativação de mecanismos que envolvem múltiplas vias de transdução e sinalização celular, que, por sua vez, regulam a expressão de um conjunto complexo de genes responsáveis pelas alterações fenotípicas dos miócitos cardíacos. Evidências mais recentes indicam que o estímulo mecânico é percebido e traduzido em sinais bioquímicos através de sítios especializados constituídos por proteínas transmembrana conhecidas como integrinas que conectam a matriz extracelular à rede do citoesqueleto. Em miócitos cardíacos, existem estruturas semelhantes, que conectam a linha Z do sarcômero à matriz extracelular através de integrinas. Esta estrutura estabelece ligação através da qual o estímulo mecânico pode ser transferido da matriz extracelular para as organelas, sarcômero e núcleo do miócito cardíaco. Além disso, várias moléculas de sinalização são imobilizadas e têm suas funções dependentes da ancoragem ao citoesqueleto, estabelecendo a base fisica para a transdução mecano-bioquímica. Dentre as várias moléculas de sinalização envolvidas na sinalização celular mediada pelas integrinas, a quinase de adesão focal tem sido das mais estudadas, porque evidências experimentais indicaram que esta enzima tem função central nos efeitos celulares resultantes da ativação de integrinas. A ativação da Fak por estímulos mecânicos foi demonstrada em miócitos cardíacos em cultura e em miocárdio de corações intactos de gatos e ratos. Em estudos anteriores demonstramos que o estímulo mecânico ativa precocemente a Fak, bem como um complexo de sinalização associado a esta enzima. A relação estreita entre a carga mecânica e a associação Fak/Src, Fak/PI-3 Kinase/ Grb2 e a ativação simultânea da Erk1l2 indicaram que este complexo pode contribuir para a resposta miocárdica à sobrecarga mecânica. Obietivo: Opresente estudo foi planejado para avaliar a influência do estímulo mecânico na ativação da Fak em corações isolados. Além disso, a ativação da Erk1l2, um efetor da Fak foi estudada com anticorpos fosfo-específicos para Erkl/2. A importância relativa da tensão passiva! estiramento e atividade contrátil na ativação da Fak e Erkl/2 pelo estímulo mecânico foi avaliada em corações paralizados com solução cardioplégica em corações perfundidos com diferentes concentrações de cálcio, respectivamente. Além disso, as localizações da Fak e Erk1l2 nos miócitos cardíacos foram confirmadas pela análise por imunohistoquúnica de cortes histológicos do miocárdio. Resultados: Aumentos na pressão diastólica de ~ Oaté 15 mrnHg aumentou rapidamente a fosforilação em tirosina da Fak (2,3 vezes), associação Fak/c-Src (2,8 vezes) e Fak/Grb2 (3,6 vezes). Estes resultados foram acompanhados por ativação da Erk1l2 (2,8 vezes) e aumentam a associação Fak/Erk1l2. Tanto a Fak como a Erk1l2 foram detectadas no sarcoplasma dos miócitos cardíacos, mas a Erk1l2 foi também encontrada nos núcleos de miócitos cardíacos. Estiramento do ventrículo esquerdo provocado por aumento da pressão da cavidade em corações perfundidos com solução cardioplégica provocaram ativação da Fak e Erk1l2 de maneira similar àquelas observadas em corações com batimento espontâneo. Contudo, aumentos na atividade contrátil induzida por cálcio não foram acompanhados de ativação da Fak ou Erkl/2 no miocárdio. De maneira geral, estes achados demonstraram que o estiramento mecânico e não a atividade contrátil é responsável pela ativação da Fak e da Erk1l2 durante sobrecargas mecânicas. Conclusões: Nossos resultados acrescentaram informação sobre a ativação da Fak pelo estímulo mecânico. A demonstração de que o estiramento ou tensão passiva e não aumentos na atividade contrátil ativaram a Fak e seu efetor Erk1l2 é compatível com a hipótese de que a ativação da Fak pelo estímulo mecânico pode estar ligada à ativação do complexo integrina/citoesqueleto