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Resumo: Os objetivos deste estudo foram: comparar a atividade de produção de mutacinas, a diversidade fenotípica/genotípica de Streptacoccus mutans de voluntários cárie-ativos e livres de cárie, e determinar/comparar o grau de associação e a capacidade discriminatória da Mutacinotipageme a AP-PCR. Um total de 319 cepas de Smutans isoladas a partir da saliva, placa dental e dorso de língua de 8 voluntários cárie-ativos e 8 livres de cárie foram submetidas à Mutacinotipageme à técnica de AP-PCR. O perfil mutacinogênico foi traçado pela Bacteriocinotipagem, utilizando-se 13 cepas indicadoras, entre elas: S. mutans, S. sabrinus, S mitis, S salivarius, S. sanguinis, S. aralis e S cricetus, e o polimorfismo genético foi detectado através da técnica de AP-PCR com os primers OPA-02 e OPA-13. Cerca de 79,62% das cepas de S mutans (254/319) analisadas produziram mutacinas contra pelo menos uma das 13 indicadoras. Através dos métodos de tipagem empregados, detectou-se que não houve relação entre a diversidade fenotípica e/ou genética de Smutans e atividade de cárie. A utacinotipagem permitiu detectar 55 perfis fenotípicos contra 101 perfis genéticos polimórficos detectados pela AP-PCR, e foi limitada para a análise da heterogeneidade da espécie intra-indivíduo. O grau de associação entre as duas técnicas de agrupamento foi em média de 77,38%, sendo o poder discriminatório da AP-PCR (0,975) superior ao da Mutacinotipagem(0,925). Embora a Mutacinotipagemdemonstre limitações para o estudo da diversidade fenotípica, através dela foi possível demonstrar que o potencial mutacinogênico, de S mutans isolados de indivíduos com cárie, possuíram amplos espectros inibitórios contra as diferentes cepas indicadoras, já os isolados de voluntários livres de cárie apresentaram um perfil mais específico contra S. sanguinis, S. aralis e S mitis, que são colonizadores predominantes nesta população. Teoricamente, inibindo seus competidores potenciais, os S mutans teriam uma colonização bem sucedida, seja pela aquisição da hegemonia nutricional ou de receptores de superficie para sua adesão

Resumo: Streptococcus mutans são os principais patógenos da cárie dentária, pois são capazes de se acumular no biofilme dentário na presença de sacarose, e sob condições altamente acidogênicas, promovem a desmineralização dentária. As glucosiltransferases B (GtfB) e C (GtfC) produzidas por S. mutans são fundamentais neste processo, porque catalisam a síntese de glucanos extracelulares insolúveis, a partir da sacarose. A proteína ligante de glucano B (GbpB) parece também participar do acúmulo de S. mutans nos biofilmes, embora por processos ainda não compreendidos. Pouco se sabe sobre os mecanismos que regulam a expressão dos genes que codificam essas proteínas de virulência (gtfB, gtfC e gbpB). Neste sentido, objetivamos caracterizar o padrão de expressão dos genes gtfB, gtfC e gbpB e de seus possíveis genes regulatórios (vicR, comE, ciaR e rr11) em genótipos distintos de S. mutans. Para isso, foram realizadas análises de transcrição reversa-PCR semi-quantitativa (RT-PCR) dos genes alvo em diferentes fases de curvas de crescimento planctônico, em meio Brain Heart Infusion, a 37°C, em condições de anaerobiose. RNAs das células nas diferentes fases de crescimento foram extraídos e submetidos a reações de transcriptase reversa com primers arbitrários, para obtenção dos cDNAs totais. Análises de PCR semi-quantitativas dos cDNAs foram então realizadas com primers específicos e normalizados pela expressão do gene housekeeping 16SRNA, cuja expressão foi constante nas condições experimentais estudas. Os padrões de transcrição de gtfB e gtfC foram específicos ao background genético da cepa estudada. Os níveis de transcritos de gtfB e de gtfC foram coordenados durante fases específicas de crescimento, mas divergências nas curvas expressão dos mesmos ocorreram em grande parte dos genótipos. Os níveis de transcritos de gbpB foram também variáveis entre cepas, mas assumiram padrão independente de genes gtf e foi caracterizado por menores variações entre as diferentes fases de crescimento. Os genes regulatórios demonstraram picos de expressão nas fases log e/ou estacionária de crescimento, de acordo com o genótipo testado. Os resultados indicam que o padrões de expressão dos genes estruturais (gtfB, gtfC e gbpB) e regulatórios são cepa-específicos e que gtfB e gtfC são regulados por sistemas independentes, os quais parecem ser ativados em fases distintas de crescimento

Resumo: Um total de 158 amostras de Candida albicans isoladas da cavidade oral de crianças, com idades entre 24 e 36 meses, divididas em dois grupos: Cárie ativas (104 amostras) e Livres de Cárie ( 54 amostras) foram estudadas. Com base nos dados da literatura, a proposição da presente pesquisa foi: 1) analisar e comparar a produção de proteinases e fosfolipases de Candida albicans, entre os dois grupos; 2) relacionar a diversidade fenotípica quanto à produção dessa enzima com o polimorfismo genético, através da técnica de AP-PCR. As amostras isoladas e identificadas como Cândida albicans, foram processadas para cultivo em meio de cultura Ágar proteinase e Agar fosfolipase e incubadas a 37°C por 7 e 4 dias, respectivamente. Após esse período, foi medida a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positivas, classificando-as com os índices, O (negativa),1 (positiva) e 2 (positiva elevada). Todas as amostras foram submetidas á técnica de AP-PCR, usando o "primer" arbitrário AP-3. As análises enzimáticas revelaram não haver diferenças estatisticamente significativas entre os dois grupos estudados. A técnica de AP-PCR foi eficaz em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos, revelando maior diversidade clonal em indivíduos cárie ativos em relação aos livres de cárie e a construção de dendogramas de similaridade demonstrou que linhagens clonais semelhantes ocorrem apenas intra indivíduos e não entre indivíduos. Os resultados obtidos permitiram observar que o perfil enzimático independe das características genotipicas das cepas

Resumo: A cárie precoce na infância, especificamente aquela associada ao consumo de carboidratos fermentáveis em mamadeira, popularmente conhecida como síndrome da cárie de mamadeira, representa um dos mais prevalentes problemas relacionados à saúde bucal de crianças durante a primeira infância e tem demonstrado ser um fator local que favorece a proliferação de Candida spp. na saliva e biofilme dental. O presente estudo teve por objetivo determinar a prevalência de Cândidas spp. a espécie predominante e o padrão da colonização na cavidade bucal de um grupo de crianças com cárie precoce na infância e um grupo de crianças livres de cárie, relacionando aos aspectos clínicos (índice ceos e presença de lesões de cárie nos incisivos e/ou molares), além de investigar o efeito do tratamento dental sobre a prevalência desses microrganismos. Foram avaliadas inicialmente 64 crianças na faixa etária de 2 a 3 anos, incluindo 32 crianças livres de cárie (grupo GH ou Grupo controle) e 32 crianças com precoce na infância (grupo GC), que não haviam recebido tratamento dental ou orientações sobre higiene bucal anterior ao inicio do estudo. Participaram da avaliação pós-tratamento dental, 31 crianças da amostra inicial, das quais 16 do grupo GC, que terminaram efetivamente o tratamento dental e 15 do grupo GH. Nos dias determinados para cada tempo experimental, pré e pós-tratamento dental, foram coletadas amostras intrabucais (mucosa jugal, dorso da língua, palato duro, biofilme dental e saliva) de todas as crianças para determinação da contagem de UFC/ml e identificação das espécies de Cândida, através dos testes de produção do tubo germinativo, produção de clamidósporos, termotolerância, crescimento em meio presuntivo CHROMagar® Candida, fermentação e assimilação de carboidratos. Houve prevalência de Candida spp. em 71,87% das crianças com cárie precoce na infância, comparada a 6,25% das crianças livres de cárie, sendo que a contagem de UFC/rnl foi significativamente maior (p < 0,05) em crianças cb grupo GC que apresentaram índice ceos elevado e presença de lesões de cárie nos incisivos e molares. A espécie predominante em ambos os grupos foi C. albicans, seguida por C. tropicalis, com maior prevalência no biofilme dental de crianças do grupo GC e no dorso da língua de crianças do grupo GH. O tratamento dental restaurador diminui a contagem de UFC/rnl de Candida spp. na cavidade bucal de crianças com cárie precoce na infância, porém não elimina completamente esses microrganismos

Resumo: A suscetibilidade a antifúngicos foi avaliada para espécies de Candida spp isoladas de três diferentes sítios da cavidade oral de 19 pacientes com doença periodontal, a saber: bolsa periodontal, mucosa bucal e sulco gengival. Um total de 140 amostras de leveduras foram isoladas e identificadas por métodos comumente utilizados em Micologia. Destas, 105 foram identificadas como C. albicans, 16 como C. tropicalis, 5 como C. parapsilosis, 4 como C. krusei, 3 como C. famata, 3 como C. norvegensis, 3 como C. dubliniensis e 1 como C. lusitaniae. As leveduras foram testadas frente aos antifúngicos fluconazol, itraconazol, cetoconazol e anfotericina B de acordo com a padronização do NCCLS. Dentre as amostras de C. albicans, 88% apresentaram susceptibilidade dependente da concentração (SDC) e 3,6% resistência à pelo menos um antifúngico azólico. Entre as outras espécies, 57% apresentaram SDC e 42,8% resistência a pelo menos um dos azólicos testados. Quanto a anfotericina B, 90% das C. albicans e 74,3% das não-albicans foram resistentes a este antifúngico. Não houve ocorrência de resistência para o fluconazol e apenas 3,6% das C. albicans e 40% das ¿não-albicans¿ foram SDC para este antifúngico. Os valores da Concentração Inibitória Mínima CIM50 e CIM90 dos antifúngicos azólicos para as amostras de C. albicans foram inferiores aos encontrados para as demais espécies. Para a anfotericina B, os valores de CIM50 e CIM90 não foram diferentes entre C. albicans e demais espécies. Apesar do baixo índice de resistência, foi observada elevada ocorrência de SDC para itraconazol e cetoconazol. Foi possível concluir que pacientes com doença periodontal apresentaram níveis de colonização por Candida spp relevantes, principalmente na mucosa bucal e bolsa periodontal, com uma importante ocorrência de SDC e resistência aos antifúngicos testados, o que está de acordo com dados recentes sobre a diminuição da sensibilidade a antifúngicos entre espécies de Candida

Resumo: Os objetivos deste estudo foram avaliar, a partir do momento da colonização inicial da cavidade bucal de crianças por S. mutans e S. sobrinus, a diversidade e a estabilidade de genótipos destas espécies, assim como investigar a ocorrência de transmissão vertical de
mãe para filho e/ou horizontal entre crianças que compartilham o mesmo ambiente. Os voluntários foram 16 pares mãe-filho, onde as crianças foram acompanhadas por 19,2 meses em média (menor e maior período de acompanhamento, foram, respectivamente 14,8 e 24,7 meses). Amostras foram coletadas bimestralmente de quatro sítios distintos: saliva, dorso da língua, rodete gengival e placa bacteriana (quando da presença de dentes).
Amostras de saliva das mães foram coletada em uma única ocasião. As amostras foram cultivadas sob condições adequadas em meio de cultura MSB (mitis salivarius bacitracina). Em cada colheita foram isoladas colônias com morfologia típica, as quais foram identificadas pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). O perfil genético dos isolados identificados como S. mutans e S. sobrinus foi analisado pela técnica
de reação em cadeia da polimerase usando primers arbitrários (AP-PCR), utilizando-se os primers arbitrários OPA-02 e OPA-13. Os resultados mostraram que no momento da aquisição, as crianças avaliadas estavam colonizadas por 1 a 4 genótipos distintos de S. mutans (n=16 crianças) e apenas 1 genótipo de S. sobrinus (n=12 crianças). Ocorreu transmissão vertical de S. mutans e de S. sobrinus em 13 e 5 dos 16 pares avaliados,
respectivamente. Entretanto, não se detectou ocorrência de transmissão horizontal entre as crianças que compartilhavam o mesmo ambiente. Na avaliação longitudinal observou-se um aumento do número de genótipos que colonizavam a cavidade bucal das crianças, sendo que alguns genótipos de S. mutans e S. sobrinus permaneceram estáveis e outros, idênticos ou não aos da mãe, foram adquiridos. Concluí-se que ocorreu estabilidade e também rotatividade de genótipos de S. mutans e S. sobrinus na cavidade bucal de crianças durante o período avaliado; e que a principal fonte das espécies avaliadas foi a maternal, porém, rotas de transmissão alternativas parecem existir