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Resumo: Com a finalidade de se avaliar a eficácia das vacinas anti-rábicas de uso animal no Brasil de 1988 a 1996, foram examinadas 2442 partidas de vacinas, sendo 891 atenuadas e 1551 inativadas. Dentre as últimas, 1441 eram inativadas de origem nacional. Foram realizados testes de potência, inocuidade e esterilidade. Verificou-se que, no período estudado, 93,4 % (1346 partidas) das vacinas inativadas nacionais e 98,2 % (108 partidas) das inativadas importadas foram aprovadas. Ao serem avaliadas através do cálculo dos Limites de Confiança dos percentuais de aprovação, constatou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os percentuais de aprovação, apresentando homogeneidade no decorrer do tempo. Com relação às vacinas atenuadas, houve 92,1 % de aprovação, de 1988 a 1996, ou seja, foram aprovadas 821 partidas de vacinas. Comparando-se os Limites de Confiança, verificou-se que houve diferença estatisticamente significante no decorrer do tempo. Ao se comparar a vacina inativada importada com a inativada e atenuada nacionais, verificou-se que houve diferença estatisticamente significante entre os percentuais de aprovação, mostrando-se a inativada importada superior às nacionais. As vacinas também foram avaliadas quanto ao seu percentual de aprovação de acordo com a espécie animal a que eram destinadas e percentual de reprovação de acordo com o teste. Nas vacinas inativadas, a principal causa de reprovação foi em decorrência do teste de potência. Já, nas atenuadas, houve maior reprovação nos testes de potência, titulação e potência e titulação. Além disso, com relação às atenuadas, o teste de potência de Koprowski foi comparado com o teste de Titulação com a finalidade de se verificar a possibilidade de se retirar um ou outro teste do controle, mostrando-se de extrema necessidade a realização simultânea de ambos os testes

Resumo: Aeromonas hydrophila vem se tornando um dos mais freqüentes agentes de infeções gastrointestinais. A enterotoxina citotóxica por ela sintetizada é considerada como um de seus principais fatores de virulência. No presente estudo, diferentes procedimentos foram empregados visando purificar e caracterizar biologicamente a enterotoxina citotóxica de Aeromonas hydrophila: A toxina protéica foi precipitada com sulfato de amônio e submetida a processos cromatográficos usando colunas de interações hidrofóbicas (Phenyl Sepharose CL-4B), troca iônica (Q Sepharose Fast Flow e Mono Q) e de exclusão molecular (Superdex 200) no sistema HPLC. O teste de alça ligada de intestino de coelho mostrou a enteropatogenicidade da Ent-ctx. Sua análise em PAGE e SDS-PAGE evidenciou uma banda protéica de peso molecular estimado de 68.000 Da. Ensaios biológicos em diferentes linhagens celulares mostraram uma cinética rápida (2 horas) na indução de efeito citopático. A Ent-ctx induziu alterações morfológicas, tais como vacuolização citoplasmática e condensação cromatínica em células Vero. Alguns dos aspectos morfológicos observados sugerem a indução à apoptose

Resumo: Neste trabalho, foram estudadas 111 amostras de Escherichia coli isoladas de 60 fezes diarréicas de adultos e crianças encaminhados ao Hospital das Clínicas da UNICAMP, no período de Janeiro de 1992 a Março de 1994. Paralelamente, 27 cepas de E. coli isoladas de 19 amostras de fezes normais, também foram pesquisadas como grupo controle. Os 138 isolados de E. coli eram procedentes de coproculturas negativas para os enteropatógenos pertencentes aos gêneros Shigella, Salmonella e Yersinia, além dos sorogrupos mais associados aos virotipos EIEC, EPEC e EHEC. Na pesquisa da produção das enterotoxinas STa e L T-I do grupo ETEC, apenas a enterotoxina termo-Iábil foi identificada, inicialmente pela técnica sorológica da Imuno Hemólise Radial (SRIH). Porém, pela alta frequência de resultados positivos observada, esta técnica foi avaliada quanto a possíveis reações falso-positivas, a outros métodos sorológicos, métodos biológicos e a métodos moleculares normalmente também utilizados na identificação da L T -I. Dentre estas técnicas, o teste biológico utilizando-se culturas de células Vero e o GM1-ELlSA, foram os mais sensíveis na detecção da L T-I, identificando apenas 5 amostras produtoras desta enterotoxina, dentre as 111 isoladas de fezes diarréicas (3,6% ETEC L T-I). Demonstraram, desta forma, serem os mais adequados na identificação da enterotoxina L T -I em cepas isoladas de levantamentos epidemiológicos. Com relação aos testes sorológicos que utilizam hemácias de carneiro como suporte da reação hemolítica, tais como SRIH e micro-PIH (97,8% de concordância), estes podem ser utilizados como técnicas de triagem na pesquisa de L T -I. Porém, estas técnicas devem ser re padronizadas sempre que houver mudança da procedência dos eritrócitos, verificando-se a adequação da diluição do soro anti-toxina utilizado em reações sorológicas desenvolvidas com sobrenadantes de cultura de menos 10 amostras de E. coli positivas para esta enterotoxina e 10 cepas negativas. Quanto às provas de hibridização, 4 amostras hibridizaram com a sonda para L T-I, apresentando esta técnica 99,2% de concordância com a técnica de cultura celular e GM1-ELlSA. Com relação a determinação dos sorogrupos, dentre as cepas isoladas de fezes diarréicas, verificou-se maior freqüência de O11, O60 e O90, enquanto que nos isolados de fezes normais os sorogrupos mais freqüentes foram O6, O8 O14 e O87. Dentre as amostras isoladas de fezes diarréicas, dois sorogrupos descritos em EIEC (O171 e O29), além de um sorogrupo descrito para EPEC (O119) foram identificados. Maior número de produção de colicinas e maior variabilidade das mesmas foi verificado nos isolados de fezes normais (44.5% de cepas produtoras). Por outro lado, dentre as 111 amostras procedentes de fezes diarréicas, apenas 15 amostras (13,5%) produziram colicinas , dentre estas uma amostra produtora do Col V. Quanto à resistência aos antimicrobianos, as amostras isoladas de fezes diarréicas apresentaram resistência frente aos 6 antimicrobianos avaliados, superiores aos verificados junto ao grupo controle. No que diz respeito à produção de outras toxinas, uma amostra isolada de fezes diarréicas foi identificada como produtora de CNF1. Porém, produção de L T -li, VT e de CLDT não foi identificada. Por outro lado, testes em alça ligada de coelho demonstraram atividade enterotóxica em sobrenadantes de cultura de cepas não produtoras das demais toxinas. Padrões variados de hemaglutinação D-manose resistente (MRMH) foi observado, sendo que 74% dos isolados de fezes normais hemaglutinaram hemácias de galinha. Nenhum padrão MRMH foi condizente aos descritos para os diferentes Fatores de Colonização de ETEC. A estes somam-se resultados negativos frente aos soros a-CFA/I, a-CFA/II (CS2, CS3), a-CFAIV (CS4, CS5) e a-PCFO2. Com relação ao padrão de aderência às células HEp-2, em período de infecção de 3 horas e de crescimento de mais 3 horas, verificou-se 23 amostras apresentando padrão enteroagregativo, sendo 19 isoladas de fezes diarréicas e 4 de fezes normais foram estudados. Estes dados correspondem a 16.6% de amostras apresentando características do virotipo EaggEC. Dentre as cepas com este padrão, estas correspondem a 14 amostras de fezes, 13 destas de crianças abaixo de 8 anos. No grupo controle, as cepas correspondem a 4 amostras de fezes normais de adultos. Dentre as amostras com fenótipo de aderência em HEp-2, destacamos uma cepa com padrão LA/DA e uma ETEC L T-I com aderência difusa a 37°C, mas não a 16°C. Através da caracterização fenotípica das amostras em estudo, desenvolvida neste trabalho, uma triagem de cepas de interesse no estudo da enteropatogenicidade da E. coli pode ser realizada, o que certamente servirá de suporte para relevantes trabalhos posteriores

Resumo: Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condições de cultivo e estocagem da amostra de Escherichia coli 86-6136 para a produção da Toxina Citoletal Distensora (CLDT), assim como o melhor método de extração e purificação para a caracterização parcial da toxina. Após o que, foi realizada a produção de anticorpos neutralizantes policlonais em coelhos albinos e a análise dos efeitos citopáticos e citotóxicos da CLDT em cultura de células. O melhor meio para cultivo da amostra 86-6136 encontrado foi o "Evans Toxin Medium", pois com este meio foi verificada a produção de CLDT em ensaios de atividade citotóxica em cultura de células, com efeito semelhante ao descrito em literatura. Os estudos de obtenção da toxina demonstraram que o método mais vantajoso para a extração era a ultrasonicação do sedimento bacteriano, pois dispendia menos tempo e havia boa recuperação da atividade citotóxica, quando comparado com os outros métodos empregados, além de existir ganho no rendimento de mais de 4 vezes em atividade específica e 2 vezes em citotoxicidade, quando comparado ao sobrenadante inicial. Após a extração, o material foi submetido a diversos processos cromatográficos (Deae-Sepharose Fast-Flow; CM-Sepharose Fast-Flow; Phenil Sepharose; Sepharose CL6B; Sepharose CL4B; Superdex 200). A cromatografia que teve mais relevância para melhorar o grau de pureza da amostra foi em Sepharose CL6B. A amostra, quando submetida a cromatografia nesta resina, mostrou padrão de eluição com 3 picos, sendo que a atividade biológica estava concentrada no primeiro pico. Em eletroforese com SDS-P AGE, o material contendo atividade biológica apresentou 3 bandas, com os pesos moleculares estimados em 38,8; 37,3 e 22,4 kDa. Não foram obtidos resultados em ensaios eletroforéticos em P AGE convencional. Os ensaios cromatográficos em Sepharose CL6B resultaram em aumento de 100 vezes na citotoxicidade da amostra, e 237 vezes em atividade relativa. Os ensaios em cromatografia líquida de alta performance (HPLC) em coluna Mono-Q não permitiram a recuperação da atividade citotóxica da toxina CLDT, e por isso foram abandonados. A atividade da toxina CLDT pôde ser observada em cultura de células Vero, HeLa e CHO. Apenas nas células CHO tanto o efeito citopático quanto o citotóxico foram observados. Em ensaios em células Vero e HeLa, o efeito de distensão celular não é evidente, e em células Vero, a viabilidade celular, ao final das 120 hrs de ensaio, é bem maior em relação às outras duas linhagens. A produção de anticorpo policlonal em coelhos albinos pôde ser verificada em teste de imunodifusão radial dupla, e sua capacidade neutralizante foi observada em ensaios de soroneutralização em cultura de células CHO. Os antissoros obtidos apresentaram atividade neutralizante do efeito citotóxico da toxina CLDT no título até 1/1024

Abstract: Pregnancy can be considered as a very successful all graft, but the underlying mechanism is not yet completely understood. HLA all tigens compatibility is very important in c1inic transplant due to their all ore cognition by immune system. Nevertheless, genetic differences between maternal and paternal HLA antigens seem to be an important factor for implantation and development of the concept. Such differences lead to immune active responses but, at same time, they help the development of tolerant responses, important to embryo acceptance. So, couples sharing HLA antigens are more subjected to Recurrent Spontaneous Abortion (RSA). As the fetus can be considered a half-all genetic graft, the patient's previous immunization with husband's lymphocytes could be helpful, since it could induce, in patient sera, the arising of both citotoxic antibodies and mixed Lymphocyte culture (MLC) blocking factors, both against husband's . antigens. Those factors have been seen as important for the normal pregnancies and reflect the immune tolerant status of the pregnant women. Hence, the aims of this study was: (1) to examine the HLA compatibility degree in 111 RSA couples and in 161 fertile couples; (2) to define the incidenceofcitotoxic antibodies against husband's lymphocytes (cross match assay) and MLC blocking factors in 291 RSA patients serum; (3) to verify the changes in previous cited factors ill 178 RSA patients submitted to immune therapy. The therapy consisted of 2 to 6 intradermal inoculations, every four weeks, containing 80 X 106 husband or husband plus unrelated donor mononuc1ear cells; (4) to evaluate the relevance of cytotoxic antibodies and MLC blocking factors in 101 cases of pregnancy outcome. We have found that, in our own population, the number of shared HLA antigens was greater in RSA couples than in normal fertile couples. Additional1y, cytotoxic antibodies and MCL blocking factors were found in low frequency (around 12%) in RSA patients. The immune therapy induced the development aft antibodies against husband's lymphocytes in 84,5% of the cases, as well as MCL blocking factors in 71,5% aft the cases, most of them being not specific to husband's lymphocyte responses. Citotoxic antibodies also reacted against to the cross reacting HLA antigens group bin addition to the husband HLA c1ass I antigens, in 52 % of the patients. The miscarriage incidence fell down to 25,7% with the immunization. But the use of cross match and MLC inhibition assays were found to be a limited value in predicting the pregnancy outcome. We did not find significant differences between term and abortion groups concerning these two factors. Since most of the 17 patients of fertile control group studied were in a 12-week-period of pregnancy, it was difficult to evaluate the direct effects of the blocking factors in sera. It is possible that those factors could be absorbed in the fetus-placenta compartment. Where they could contribute to down regulating HLA molecules and with the help of cytokine profile TH2 could induce the immune tolerance to fetal antigens. So, there is a need for an additional in vitro functional test that gives a qualitative assessment of immunotolerant status before pregnancy establishment. This would enable the clinidian to predict the need of additional immunizations for any particular patient. The results suggest an important aid of immunotherapy in the RSA treatment. However, the assays used in this study resulted in a poor predictive test of miscarriage. Nevertheless the cross match and MCL inhibition tests could be used as a first step for monitoring patients who had undergone immune therapy. The couple HLA typing could help define the inclusion or not of unrelated donor in immunizatioti protocols

Resumo: Fibrose Cística (FC) é uma doença genética, autossômica recessiva, caracterizada por anormalidade no transporte eletrolítico. Pseudomonas aeruginosa é um importante patógeno oportunista, freqüentemente encontrado em pacientes com FC. Nesses pacientes, a colonização inicial é feita com a bactéria na forma não mucóide que, posteriormente, converte-se à forma mucóide. O objetivo desse trabalho foi verificar comparativamente a produção de alguns fatores de virulência por P. aeruginosa em amostras mucóides e não mucóides isoladas de pacientes com FC e em amostras isoladas de pacientes não portadores de FC. O método para detectar hemolisina utilizou placas de ágar sangue contendo 5% de sangue de carneiro. A hidrólise da gelatina foi utilizada para detectar a produção de gelatinase e a produção de elastase foi observada em placas contendo 1 % de elastina. A presença de pili foi analisada pelo método de microhemaglutinação e a cápsula de alginato, pelo método de PCR para identificar os genes algD e algU. As linhagens não mucóides isoladas de pacientes com FC e aquelas isoladas de outros casos clínicos produziram as exoenzimas gelatinas e e elastase em maior freqüência que as linhagens mucóides. A produção de hemolisina e a presença dos genes algD e algU foi semelhante nos três grupos bacterianos. O gene algD foi encontrado em todas as linhagens estudadas e o ensaio de microhemaglutinação não foi satisfatório para detectar a presença de pili em P. aeruginosa

Resumo: Vinte linhagens de Enterobacter cloacae entre isolados de plantas e de origem clínico-hospitalar foram estudadas por meio de serologia, eletroforese de proteínas totais e RAPD. Teste de patogenicidade em bulbos de cebola também foi aplicado. Com a finalidade de se comparar as linhagens, também foram incluídas neste estudo as culturas tipo de Enterobacter dissolvens e Enterobacter nimipressuralis. Serologicamente, foi verificado que as linhagens oriundas de plantas são similares, com exceção de uma linhagem, e puderam ser diferenciadas das linhagens clínicas. Entretanto, quando comparadas por meio de eletroforese de proteínas totais, as linhagens de E. cloacae se mostraram mais homogêneas, embora com diferenças nos padrões de proteínas. Dentre as técnicas empregadas RAPD foi a mais sensível, discriminando três grupos genômicos, onde as linhagens vegetais aparecem homogêneas e são claramente distinguidas, enquanto que as linhagens clínicas foram distribuídas em vários sub-grupos, devido a sua heterogeneidade. A cultura tipo de E. cloacae aparece não relacionada com a maioria das linhagens, o mesmo ocorrendo com E. nimipressuralis. Nos testes de patogenicidade em bulbos de cebola, o grupo das linhagens clínicas também mostrou capacidade fitpatogênica, induzindo colapso interno das escamas, o mesmo ocorrendo com E. dissolvens e E. nimipressuralis. Com base nos resultados obtidos, verificou-se que E. cloacae isoladas de vegetais, embora oriundas de hospedeiros e regiões geográficas distintas, são estreitamente relacionadas. A hipótese de que vegetais contaminados atuem como "vetores" de E. cloacae, introduzindo-a no ambiente hospitalar, deve ser considerada

Resumo: Neste trabalho, foram criteriosamente avaliados nove anticorpos monoc1onais (MAbs) reativos para PCFO2, quanto ao reconhecimento de epítopos na fimbria purificada a partir de duas amostras diferentes, produtoras da mesma e também frente a outros fatores de colonização (PC) purificados, expressos por amostras de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) associada à diarréia humana. Em provas preliminares de "Western blot", este fator apresentou reações positivas não apenas frente aos soros polic1onais anti-PCFO2 como com anti-CF AII, anti-CF A/II (CSl, CS3), anti-CFA/II (CS2, CS3), anti-CFA/III, anti-CFA/IV (CS4, CS6) e anti-PCFO159. Provas de ELISA indireto, desenvolvidas tanto com os 4 MAbs pertencentes ao isotipo IgA, como com os 5 do isotipo IgG2b, confirmaram estes resultados, apenas frente aos FC do complexo CF A/II. Porém, em revelações no "Western blot" apenas bandas com pesos moleculares (p.M.) correspondentes à CSl, CS2, CS3, CFA/III, CS4 e CS6 foram reveladas, demonstrando apresentarem estes antígenos homologia de epítopos com PCFO2. Estes resultados foram confirmados, também de forma direta, em reações de imunomicroscopia eletrônica reveladas com os MAbs lDIC5, do isotipo IgA e 2C4F12, do isotipo IgG2b. Pesquisando-se diferenças de reconhecimento de epítopos entre os MAbs, buscou-se obter subunidades protéicas da fimbria PCFO2 após tratamento com 6M de Guanidina HCI-0,05M Tris. As frações obtidas após ultrafiltrações deste material, em membranas XM50 e YMIO, foram analisadas em SDS-P AGE e em provas de "Western blot". Pelos resultados obtidos, verificou-se a presença de uma única banda reconhecida pelos MAbs apresentando P.M. correspondente à PCFO2. Estes dados comprovam ser esta fimbria constituída por uma única subunidade protéica de 34,5 kDa. Após a avaliação da afinidade e especificidade das soluções preparadas com os 9 anticorpos monoc1onais em "Western blot", estes foram titulados por ELISA indireto, determinando-se que as preparações dos MAbs lDlC5 e 2C4F12 apresentavam maior título. Desta forma, estes foram selecionados para a padronização da Prova de Inibição do ELISA, avaliando-se, paralelamente, também os "pools" preparados com a mistura dos líquidos ascíticos dos dois diferentes isotipos. Assim sendo, a concentração do antígeno e dos MAbs foi padronizada, de tal forma que amostras expressando PCFO2 reduzissem a D.O. da reação controle para valores superiores a 50%. Na adequação da técnica, 66 cepas de E. coli, sendo 51 amostras ETEC e 16 não ETEC, foram avaliadas. Destas, 4 cepas isoladas de dois casos de diarréia no nosso meio, foram identificadas como produtoras de PCFO2

Resumo: Neste trabalho propôs-se a estudar a população carcerária de três presídios da região de Campinas-SP, sendo dois presídios (A e B) com regime carcerário de segurança máxima e um presídio (C) com regime de segurança semi-aberto, com o objetivo de detectar anticorpos anti-HIV, e possível conversão sorológica de amostras coletadas de presidiários. O número de amostras examinadas representou 32,5% da população carcerária dos três presídios. De de um total de 693 presidiários, foram examinadas 766 amostras, onde se obteve 14,43% de positividade para anticorpos anti-HIV. A pesquisa destes anticorpos foi realizada a partir de dois testes sorológicos, sendo um de triagem (MEIA) e um confirmatório (WB). Observou-se que o maior número de resultados positivos foi encontrado nos dois presídios com regime de segurança máxima (presídio A com 17,05% e presídio B com 21,52%) e menor no presídio semi-aberto (presídio C com 10,86%). Foram retestadas 73 amostras negativas após 5 a 7 meses da realização da primeira sorologia. Destas amostras, três se tornaram positivas neste período, o que leva a acreditar em uma provável soroconversão ocorrida dentro dos presídios. Neste estudo pesquisou-se também, em amostras positivas para anticorpos anti-HIV e negativas para estes anticorpos, a presença de anticorpos anti-HTLV-I e/ou II, anticorpos IgG e IgM anti-Citomegalovírus (CMV) e antígeno de superfície da hepatite B (HBs). Na pesquisa de anticorpos anti-HTL V-I e/ou 11 encontrou-se um percentual de positividade de 58,3% nas amostras HIV positivas e 12,5% nas amostras HIV negativas. Na pesquisa de anticorpos IgG anti-CMV foram obtidos para amostras HIV positivas e negativas percentuais de 97,7% e 95% de positividade respectivamente, já para anticorpos IgM encontrou-se 11,36% e 2,5% respectivamente. Foi detectado para pesquisa de antígeno HBs um percentual de 12,8% de positividade em amostras HIV positivas. Sob o ponto de vista epidemiológico, considerando-se a incidência de positividade para anticorpos anti-HIV e outros vírus principalmente HTLV-I e/ou II e HBV encontrada nos presídios,deve-se preocupar seriamente com medidas profiláticas. Um dos fatores provavelmente útil nestas medidas profiláticas, seria tentar anular o parâmetro que foi denominado nesta pesquisa de população carcerária excedente (PCE), o que envolve iniciativas diversas e difíceis de serem viabilizadas a curto prazo

Resumo: O Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), fungo dimórfico, é o agente etiológico de micose sistêmica, a paracoccidioidomicose (PCM). Esta doença, invasiva no homem, é endêmica na América Latina, principalmente no Brasil, Venezuela e Colombia. Os mecanismos de patogenicidade deste fungo ainda não estão bem esclarecidos, porém, existem indícios de que a constituição da parede celular e a produção de antígenos solúveis, como a glicoproteína de 43 kDa (gp43), sejam fatores de virulência responsáveis pelo seu estabelecimento no hospedeiro. Neste sentido, foram realizados estudos in vitro para avaliar possíveis mecanismos e fatores de virulência envolvendo adesão e invasão celular. No presente trabalho, foi analisado o processo de infecção de cinco diferentes cepas do P. brasiliensis em células HeLa (adenocarcinoma cervical humano) e revelados por diferentes técnicas de coloração (May-Grünwald/Giemsa, PAS e Imunofluorescência Indireta). Através de observações em microscopia óptica destas preparações, verificouse que todas as cepas aderiram e invadiram as células em cultura. Em provas imunoenzimáticas, observou-se diferenças quanto a concentração de células fúngicas aderidas às células HeLa. Desta forma, a cepa Pb18 apresentou maior índice de adesão, seguida pelas cepas Pb113 e Pb265. Estes dados apresentam concordância aos diferentes graus de patogenicidade, já descritos na literatura, para estas cepas em experimentos in vivo. Ainda por esta metodologia, foi analisada a inibição da adesão do fungo através de tratamento prévio com diferentes soros imunes (anti-gp43 e "pool" de soros de pacientes com PCM). Dentre estes soros, o tratamento com o "pool" de soros de pacientes apresentou maior índice de inibição da adesão do P. brasiliensis em células HeLa. Ainda pela técnica de contagem de unidades formadoras de colonias (ufc) foi constatada a viabilidade das células fúngicas intracelulares. Estudos complementares foram realizados através de observações em Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), onde foram observadas avaliação do processo de infecção. Nesta abordagem, foi verificada uma provável sequência de infecção do P. brasiliensis às células HeLa. Devido a presença de formas intracelulares não usuais deste agente, apresentando-se como protoplastos, a utilização da técnica de "immunegold" foi conclusiva na comprovação do processo de adesão e invasão celular deste importante patógeno do nosso meio

Resumo: O vírus respiratório sincicial dos bovinos (BRSV) produz uma doença respiratória que está amplamente distribuída no mundo e causa severas perdas econômicas nos países produtores. Com o objetivo de determinar se as doenças respiratórias que afetam os bovinos no Brasil têm alguma relação com o BRSV, realizou-se um estudo soro lógico e isolamento viral. Foram analisadas 864 amostras de soros procedentes dos Estados do sul e sudeste do país (RS, PR, SP, MS, RJ e MG), usando os testes sorológicos de soroneutralização (TSN) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Ambos os testes mostraram um alto nível de positividade anti-BRSV (68% e 75% respectivamente) com diferença significativa a p < 0.05%. Não foram detectadas grandes diferenças entre as regiões estudadas, mas se observa uma ligeira tendência a maior soropositividade com a maior latitude. Animais jovens apresentaram índices maiores de soropositividade (média 85%), sendo o TSN o mais sensível nessa faixa etária, refletindo a maior susceptibilidade a infecções primárias dos bezerros em relação a animais adultos. O isolamento viral foi realizado a partir de 33 amostras de secreções nasotraqueais inoculadas sucessivamente em cultura de células CER e MDBK, caracterizado por testes físico-químicos e observações morfológicas ao microscópio eletrônico. Foi também realizado um teste de TSN cruzada com duas amostras BRSV padrões e seus respectivos antisoros. Os resultados demonstraram que a amostra isolada é um vírus pleomórfico, espiculado, de RNA, envelopado, termolábil e não hemoaglutinante. O TSN cruzada mostrou que existe uma semelhança antigênica entre a amostra isolada no Brasil com as duas cepas BRSV padrões estudadas

Resumo: Considerando níveis de parasistemia e mortalidade, a resistencia e suscetibilidade das raças C3H e C57/BL6 infectados por t. cruzi foram estudados em ralação a cepa y deste parasita. Lotes de camundongos de ambas as raças, foram inoculados respectivamente com 50.000, 5.000 e 500 T. cruzi forma tripomastigota, por via intra peritioneal. A parasitemia foi determinada em diferentes dias de infecção através de amostras de sangue colhidos na estremidade da cauda dos camundongos. A produção de anticorpos específicos anti T cruzi, na fase inicial da infecção, que poderia estar relacionada a resistência e suscetibilidade deste animais foi estudada através de reação de aglutinação e imunoflurescencia. No soro destes camundongos foram também estudados o título e natureza de anticorpos heterófilos. O comportamento do peso do baço, assim como observações histológicas de baço, fígado e coração foram realizadas nestes camundongos. Os resultlados obtidos sugerem que: 1- A resistência de camundongos da raça C57/BL6 é dependente do número de parasitas inoculados. Assim para inóculos de 50.000 T. cruzi estes camundongos são suscetíveis. 2- Quando foram utilizados inóculos de 5.000 e 500 T. cruzi respectivamente, os camundongos da raça C57/BL6 se comportaram como resistentes e os CH3 como suscetíveis. 3- Com todos os inóculos estudados, camundongos da raça C57/BL6 apresentaram níveis de parasistemia mais elevadoas que os da raça C3H ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Resumo: O picobirnavírus (PBV) é um novo vírus, descritos em fezes de humanos, ratos, suínos, cobaias, aves e coelhos. No presente trabalho, é relatada a primeira identificação, através de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGP A), de picobirnavírus em fezes de um animal silvestre mantido em cativeiro, o tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla). Este fato sugere a existência de possíveis novos hospedeiros para o PBV na natureza. Também foram implementados e comparados diferentes métodos de concentração e purificação virais a partir de suspensões fecais de diferentes origens, buscando a obtenção de partículas virais purificadas para posteriores estudos de sua estrutura. Quanto aos métodos de concentração, foram usadas a adição de cloreto de cálcio (CaCI2), a adição de polietilenoglicol (PEG) e cloreto de sódio (NaCl) e a ultracentrifugação em colchão de sacarose, método este que apresentou os melhores resultados. Em relação aos processos de purificação, foram testadas soluções de sacarose, tartarato (ácido tartárico, sal dipotássico), cloreto de césio (CsCI) e cloreto de rubídio (RbCI). A utilização do cloreto de rubídio (RbCI) mostrou-se uma alternativa viável à utilização do cloreto de césio (CsCI), amplamente difundido como protocolo de purificação viral, indicando que soluções de RbCI podem ser usadas como protocolos alternativos de purificação do PBV. Foi ainda implementado o primeiro teste imunoenzimático para detecção de picobirnavírus em amostras fecais de diferentes origens, usando membranas de nitrocelulose como fase sólida. Foram observados resultados positivos nas amostras fecais das três espécies (ratos, suínos e tamanduásbandeira), o que pode indicar que os picobirnavírus que infectam estes animais podem possuir antígenos comuns. O teste pode ser utilizado como triagem de amostras em rotina diagnóstica, ao lado da eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) como teste confirmatório. Esta é a primeira descrição de um ensaio imunoenzimático para detecção do PBV em amostras fecais

Resumo: Pneumovírus aviário (PVA) causa infecção aguda no trato respiratório em perus (rinotraqueítedos perus) e galinhas (síndrome da cabeça inchada) com início abrupto e disseminação rápida. Neste estudo, foi padronizada a reação de RT-PCR quimioluminescente para detecção de um transcrito do gene F do PVA em dois isolados europeus e dois isolados brasileiros. Foram realizadas PCRs de diluição limitante utilizando-se RT-PCR quimioluminescente e "nested PCR" (nPCR) para a comparação quanto à sensibilidade e especificidade entre as metodologias na detecção de PVA. A sensibilidade e especificidade da RT-PCR quimioluminescente foram semelhantes às da nPCR e 100 vezes mais sensível que uma única PCR. O seqüênciamento dos produtos de 175 pb do gene F revelaram 100% de homologia com seqüências depositadas no banco de dados. Em seguida foi realizada a caracterização dos isolados brasileiros através de RT-PCR, análise com enzimas de restrição e seqüênciamento automático de um fragmento do gene G. Os produtos de 600 pb correspondentes aos primeiros 600 nucleotídeos do gene G dos isolados SHS BR 119 e SHS BR 121 revelaram 99% de similaridade com 3 isolados do subgrupo A e 87% de similaridade com isolados do subgrupo B depositadas no banco de dados

Resumo: Foram estudadas 190 amostras não-toxigênicas (L T-I, L T-II, STa, STb, SL T-I, SL T-II, CNF1, CNF2) de Escherichia colí isoladas de diarréia em suínos. Pelo teste de aderência em células HeLa, 47 amostras foram identificadas com diferentes perfis de adesão, a saber: agregativa (EaggEC) 18/47 (38,3%),"cover slip"(CS) 7/47 (14,9%); difusa (DA) 2/47 (4,2%) e não característica (NC) 20/47 (42,5%). Não foram encontradas amostras com adesão localizada (AL). Ao contrário do que ocorre em amostras de origem humana, quando o mesmo teste foi realizado em células HEp-2, houve correspondência de apenas 17% dos resultados, principalmente entre as amostras com perfil NC. O teste de Microhemaglutinação Manose-Resistente (MHMR) não revelou títulos significantes com nenhuma das hemácias testadas ( ovina, bovina, equina, humana, de cobaio e galinha ). A sorologia para detecção de fatores de colonização já descritos identificou a presença das adesinas K99, K88, F41, F42, F165, 987P, F107, 8199 e 2134P entre as amostras estudadas, as quais não estão entre as que apresentaram resultados relevantes em testes posteriores. O teste de FAS para avaliar a polimerização da actina, foi positivo (++) com apenas 07 (14,8%), das amostras aderentes em HeLa, a saber: 817, E3, 2a2, 2d2, 2374c, 2386a, 2387 a, o que poderia indicar presença do gene eaeA. Testes realizados com sonda específica e PC R, contudo, foram negativos, o que foi confirmado pelo teste de Western blot usando-se soro anti-intimina específico. O exame de cultivos de HEp-2 infectados com algumas amostras FAS+, ( E3, 2d2 e 2374c ) e FAS - ( C9), por microscopia eletrônica, revelou lesões "attaching and effacing"{AlE), típicas de amostras eaeA+. Duas destas amostras ( E3 e 2d2 ) testadas em alça-ligada de leitões recém-nascidos, não produziram lesões semelhantes, ou pelo menos, com a mesma intensidade que a amostra E2348/69, padrão EPEC. A descrição da presença do gene eaeA em amostras do sorogrupo 045"K65" isoladas de diarréia em suínos encaminhou-nos na realização de sorotipagem das nossas amostras, sendo encontradas 4 amostras pertencentes a este sorogrupo, as quais não apresentaram resultados relevantes nos demais testes realizados. Conclusivamente, os resultados obtidos permitem supor a existência nos colibacilos não toxigênicos isolados de suíno com diarréia estudados, de alguma estrutura, eventualmente também responsável pelos padrões de adesão encontrados, que à semelhança da intimina de EPEC e/ou EHEC, causariam o fenômeno de AlE na célula hospedeira

Resumo: A bacteriose do maracujazeiro (Pass/flora spp.), causada por Xanthomonas campestrls pv. pass/florae (XCP), é um das principais moléstias desta cultura, sendo fator limitante para sua exploração comercial. Cinquenta e quatro linhagens de X. c. pv. passtnorae foram analisadas pelas técnicas de serologla, por meio de testes de dupla difusão em ágar e de eletroforese em gel de poliacrilamida com sódio dodecil sulfato (PAGE/SDS) de protefnas totais. Foram produzidos amissoros para duas linhagens de X. c. pv. passllJorae originárias de PassllJora a/ata (AS - XCP-444-P.a/ata e AS-XCP-1171-P.a/ata) e um antlssoro para X. c. pv. passlflorae isolada de P.edulls (AS-XCP-748-P.edulls). Antfgenos nas formas de suspensão bacteriana (SB), suspensão bacteriana autoclavada (SBA), exopolissacarfdeos (EPS), complexo proteico das membranas (CPM) e glicoprotefnas (GP) foram testados por dupla difusão em ágar com os três antissoros. As cinqüenta e quatro linhagens foram submetidas â PAGE/SDS da fração SB. Para dez das linhagens testadas, as frações SBA, EPS, CPM e GP também foram submetidas â PAGE/SDS. Os resultados mostraram que os antrgenos na forma de SB e CPM são os mais indicados para experimentos visando a diagnose de X. c. pv. pass/florae em material suspeito de infecção. Os antfgenos na forma de SBA, EPS e GP não devem ser utilizados para diagnose de X. c. pv. passfflorae mas, se purificados, podem ser utilizados em estudos visando a separação de X. c. pv. paa.lnorae em serogrupos. Os perfis de proternas totais das frações S8 apresentaram grande similaridade e também para a PAGEISDS, S8 e CPM foram as frações que revelaram os melhores resultados. Os perfis protéicos obtidos para X. c.pv. passfflorae foram comparados com perfis de Xanthomonaa axonopodls pv. manglferalndlcae, X. a. pv. phaseoll, X. campestrls pv. campestrls e X. ves/catorla. Não foi possrvel detectar-se bandas que pudessem ser consideradas como marcadoras para o pv. pass/florae. As linhagens originarias de P. alata não são diferenciadas daquelas Isoladas de P. edulla por nenhuma das técnicas utillizadas. Além disso, todas as linhagens testadas apresentam grande similaridade, independente do hospedeiro e localização geografica de origem

Resumo: O picobirnavírus (PBV) foi descrito por H.G. Pereira em amostras fecais de humanos no Brasil. Posteriormente, outros pesquisadores também detectaram o ácido nucléico dos PBV por eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), que foi caracterizado como RNAds (fita dupla) e bissegmentado. Através de microscopia eletrônica foram detectadas partículas virais com aproximadamente 35 nm, que cossedimentavam em gradientes de cloreto de césio com RNAds dos PBV, em uma densidade de 1,38-1,40g/ml. Com relação a sua patogenicidade, alguns autores têm tentado associa-los a quadros de gastroenterites. Entre outras características, conhece-se pouco sobre a constituição protéica do vírus e seu mecanismo de replicação. Essa falta de informações se deve em parte à dificuldade em purificar esses vírus de material fecal, onde os mesmos se apresentam em baixas concentrações. Nosso trabalho objetivou adaptar esse vírus para cultivo em sistemas de culturas celulares. Para tal, foram utilizadas culturas primárias de rim de rato e de camundongo, assim como as linhagens estabelecidas em rim de rato sómios LLC-M¿K IND. 2¿ e MA104, e as linhagens intestinais humanas HT-29 e 'CA¿¿CO IND. 2¿. Na tentativa de promover a ativação viral, as amostras fecais positivas para PBV foram tratadas com as proteases tripsina e pancreatina para a infecção em células... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Resumo: Entre 70 amostras de Escherichia coli verocitoto-xigênicas (VTEC) isoladas de bezerros com diarréia foram selecionadas 4 (55/3, 492, 494/4, 495/2), sorologicamente identificadas como pertencentes ao sorogrupo 0125, que, quando examinadas pela prova de microhemaglutinacão manose-resistente (MHMR) foram capazes de aglutinar apenas hemácias humanas. Este dado sugeria a possibilidade de que tais amostras fossem produtoras de um antígeno de aderência, por nós designado provisoriamente de EAF44. Suspensões bacterianas destas amostras cultivadas em meio mínimo solido {MMS), incubado a 379C, e/ou o antígeno EAF44 semi-purifiçado obtido a partir destes cultivos, foram estudados através de diferentes procedimentos que incluíram: a) Atividade MHMR comparada com a descrita para outros fatores de colonização tais como: F4,F5,"F41" e "F42"; b) inibição da MHMR, usando-se antissoros homólogos e heterólogos para os antígenos acima mencionados; c) fatores que poderiam influenciar na expressão do antlgeno EAF44 "in vitro", utilizando-se para tal, a prova de MHMR frente a hemácias humanas e/ou microscopia eletrônica. Entre esses fatores selecionamos: temperatura de incubação das culturas, variação de pH do meio de cultura (MMS) e, adição a este de, compostos tais como glicose, acetato de sódio e DL-alanina; d) teste de aderência às células HeLa em presença de D-manose da amostra de VTEC 55/3 cultivada a 379C e a 169C. Inibição desta aderência com antissoro anti-EAF44; e) estudo através da microscopia eletrônica da amostra de VTEC 55/3 produtora de antígeno EAF44, com a finalidade de identificar na mesma a presença de estruturas do tipo fímbria; f) semi-purificação do antígeno EAF44, usando-se técnicas semelhantes âs descritas, com este objetivo, para outros antlgenos de aderência; g) estudos das relações antigênicas entre o antígeno EAF44 e outros fatores de colonização (F4,F5,"F41" e "F42"), descritos em amostras E. coli enterotoxigênicas (ETEC) de origem animal; h) pesquisa, através de teste de alça ligada de coelho, de possíveis alterações histológicas causadas pelas amostras de E. coli 55/3, produtora do antígeno EAF44 e de verocitotoxina (VT). Os principais resultados e conclusões decorrentes destes estudos podem ser assim resumidos: 1) As amostras de VTEC, isoladas de bezerros com diarréia e por nós estudadas, foram capazes de aglutinar, especificamente, na presença de D-manose, apenas hemácias humanas. Resultados semelhantes foram obtidos com o antígeno EAF44 semi-purificado. Este perfil de MHMR mostrou ser totalmente distinto dos descritos para outros fatores de colonização, mas especificamente F4,F5,"F41" e "F42". 2) Os testes de inibição de MHMR mostraram que apenas antissoro anti-EAF44 foi capaz de inibir efetivamente a hemaglutinação das amostras de VTEC (55/3,494/2,494/4, 495/2), sugerindo, portanto, que o antlgeno em questão era antigenicamente diferente dos demais fatores de colonização por nós estudados. 3) Entre os fatores que poderiam influenciar na expressão do antlgeno EAF44 "in vitro" foi verificado que: 3.1. A produção do antlgeno EAF44, quando medida por teste MHMR e verificada através da microscopia eletrônica/ foi inibida quando cultura da amostra VTEC 55/3 era incubada a 169C. Ao contrário, em cultivos incubados a 379C houve produção do antlgeno EAF44. Estes resultados são bastante semelhantes aos observados com outros fatores de colonização, codificados por plasmídios presentes em amostras de ETEC de origem animal. 3.2. A adição de glicose, ao MMS, a semelhança do que ocorre como antlgeno "F42" é necessário para ex pressão deste antlgeno, detectável pela prova de MHMR. 3.3. A adição de DL-alanina ao MMS não interferiu na produção do antlgeno EAF4 4 em culturas da amostra de VTEC 55/3, quando " examinada pela prova de MHMR. Estes resultados são contrários aos observados com os antígenos F5,"F41" e "F42" cuja produção foi inibida por este aminoácido. 3.4. A produção do antígeno EAF44, mediada pela prova de MHMR, foi inibida por acetato de sódio adicionado ao MMS na concentração de lOOmM. Estes resultados foram parcialmente semelhantes aos obtidos, com relação ao antígeno "F42" que, cuja produção, embora inibida por este sal, ocorreu em con contrações menores. 3.5. Culturas da amostra de VTEC 55/3 cultivadas em MMS com pHs que variaram entre 5,4 a 8,2 mostraram, a semelhança do que já foi relatado para os antígenos F5 e "F42", que a produção do antígeno EAF44, também examinada pela prova de MHMR, não ocorreu em pH ácido. Os resultados obtidos nos testes de aderência às células HeLa ,da amostra de E. coli 55/3 cultivada a 379C, mostrou uma aderência do tipo difuso, mesmo na presença de D-manose. 0 teste de inibição de aderência frente a antissoro anti-EAF44 demonstrou que este fenômeno era efetivamente causado pelo antígeno EAF44. Os estudos de microscopia eletrônica, aliados a outros dados referentes a MHMR e aderência ã células HeLa e respectiva inibição destas propriedades por antissoro anti-EAF44, mostraram que este antígeno era constituído por uma estrutura do tipo fímbria, cuja expressão ocorria em cultivos incubados a 379C, sendo porém, inibida quando a temperatura de inci.bação era 169C. Estes dados são semelhantes aos relatados para outros fatores de co Ionização, presentes em amostras de E. coli do grupo ETEC de origem humana e animal. 6. Os testes de imunodifusão dupla e imunoeletroforese pro varam, que o antígeno EAF44 é antigenicamente diferente dos demais fatores de colonização incluídos na presente pesquisa, ou seja, F4,F5,"F41" e "F42". 7. A inclusão do teste de alça ligada em coelhos, no estudo da amostra de E. coli 55/3 produtora de VT e do antígeno EAF44, partiu do pressuposto de que este antígeno de aderência q na realidade, um provável fator de colonização para os bezerros suceptíveis. Este ensaio te ve, portanto, como objetivo, pelas características do teste, averiguar uma ação direta da VT sobre o epitélio intestinal destes animais. Entre várias alterações observadas foi relevante o achado histológico de uma severa desorganização da estrutura da mucosa do intestino delgado e do intestino grosso, em especial no epitélio do revestimento. Foram observadas ainda alterações na lâmina própria da mucosa, caracterizados por restos nucleares! Estes achados foram semelhantes a outros relatos da literatura sobre experimentos "in vivo" realizados com amostras de VTEC de origem humana e animal. 8. Finalmente, diante de todos os resultados por nós obtidos, podemos afirmar que as amostras de VTEC, isoladas de bezerros com diarréia, pertencentes ao sorogrupo 0125 produzem um antígeno de aderência do tipo fímbria, semelhante em várias propriedades aos antígenos F5,"F41" e "F42", porém, distinto destes, sob o ponto de vista antigênico. Ao que nos consta, é este o primeiro relato na literatura sobre a existência de um antígeno de aderência com estas características em amostras de E. coli do grupo VTEC isoladas de bezerros com diarréia

Resumo: Este estudo objetivou a caracterização ou a confirmação do patovar de diversos isolados bacterianos patogênicos ao pepino, incorporados à Coleção de Culturas da Seção de Bacteriologia Fitopatológica do Instituto Biológico (IBSBF) e caracterizados como Pseudomonas syringae pv. lachrymans, P. s. pv. syringae, P. s. pv. tabaci, ou, então, apenas a nível genérico. Essa caracterização foi feita por testes bioquímicos, culturais, sorológicos e eletroforéticos. Os resultados mostraram que apenas a utilização de testes bioquímicos e culturais podem ser insuficientes para a caracterização de patovares de bactérias patogênicas ao pepino, devido à variabilidade natural ocorrida entre os diferentes isolados. O emprego de reações sorológicas de dupla difusão em ágar com antígeno autoclavado e a eletroforese de proteínas totais em gel de poliacrilamida PAGE/SDS não permitiram, também, a diferenciação a nível de patovar entre os isolados empregados neste estudo. Os dados obtidos revelaram, ainda, que alguns isolados bacterianos possuem características que não permitem enquadrá-los em nenhum dos patovares de Pseudomonas syringae patogênicos ao pepino. Os resultados mostraram também que o isolado 1258, que é a estirpe tipo do patovar lachrymans, possui características que diferem da descrição desse patovar, mostrando a necessidade de se redefinir uma outra estirpe como neopatotipo de Pseudomonas syringae pv. lachrymans

Resumo: No presente estudo o virus da lingua azul-sorotipo 4 (VLA-S4) adaptado às linhagens celulares BHK-21, clone 13 e VERO apresentou efeito citopático característico entre 72 e 96h pos-inoculação, com títulos que variaram entre 10 'POT. 3.6¿ a 10 'POT. 5.6¿ DICC 50%/ml. A partir do sedimento das células infectadas as partículas virais foram purificadas em ultracentrifugações em gradiente de CsCI, e apresentavam densidade de cerca de 1,38 g/cm 'POT. 3¿. Ao microscópio eletrônico foram visualizadas partículas com forma aproximadamente esférica e diâmetro médio de 54,99 '+ ou ¿' 0,12 nm, correspondentes ao virion e de 49,68 '+ ou ¿' 0,08 nm, ao nucleocapsideo. O perfil eletroforético do ARN do VLA-S4 mostrou a presença de dez segmentos com valores de PM 2,92 x 10 'POT. 6¿ d (segmento 1) e 0,49 X 10 'POT. 6¿ d (segmento 10) e o das proteínas, as sete proteínas estruturais -VP1 a VP7- com PM variando de 103,69 x 10 'POT. 3¿ d (VP1) a 30,24 x 10 'POT. 3¿ d ( VP7 ) . O antígeno solúvel (AS), produzido a partir do sobrenadante de culturas de células VERO infectadas pelo VLA e concentrado por ultrafiltração sequencial em membranas com CNL de 10.000 e 25.000, apresentou em teste de identidade com os antígenos do NADC e comercial (COM), uma única linha de precipitação, nítida e confluente. Na análise do perfil eletroforético dos três antígenos observou-se um padrão muito semelhante, o que sugere que as três preparações antigênicas contém proteínas semelhantes. A avaliação semi-quantitativa deste antígeno em imunodifusão radial simples apresentou uma potência relativa 127 ligeiramente superior à do NADC e igual à do COM, e na titulação em bloco por imunodifusão dupla. titulo de uso 1/2, evidenciando-se que o AS poderia ser utilizado em provas rotineiras de 1DGA. para o diagnóstico soro lógico da LA. O componente protéico do AS, principal responsável pela linha de precipitação em 1DGA, apresentou PM 60,00 x 10 'POT. 3' d, sugerindo tratar-se, provavelmente, da proteína NS1 (P5a) ou da VP5. A imunofluorescência indireta (IF1), executada em células VERO adicionadas de soros e conjugados anti-1gG de bovinos ou de ovinos, apresentou fluorescência intracitoplasmática, com aspecto granular, e em algumas células foi observada apenas na membrana celular. Foram testadas 190 amostras de soros sanguíneos de bovinos e 72 de ovinos, pelas técnicas de IDGA e 1FI. Em IDGA obteve-se um total de 134 amostras positivas e 128 amostras negativas, enquanto que em 1FI observou-se 137 amostras positivas e 125 negativas. A análise estatística destes dados registrou uma alta concordância para os soros de bovinos e para os soros de ovinos, entre as duas técnicas. Em 1FI encontrou-se alta sensibilidade, especificidade e valores preditivos dos resultados positivos e dos resultados negativos, em comparação com a IDGA. o que nos permite afirmar que as duas técnicas podem ser utilizadas na rotina laboratorial como instrumento para uma avaliação real da situação epidemiológica da LA no nosso meio. A 1FI oferece a vantagem adicional da possibilidade de ser utilizada para detecção de antígenos virais em cultivos celulares inoculados pelo VLA