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Resumo: A administração de doses altas ou moderadas do inibidor da síntese de NO, L-NAME, a ratos, causa hipertensão arterial, hipertrofia ventricular e fibrose miocárdica. O objetivo do presente estudo é avaliar os efeitos do enalapril e losartan nas mudanças estereológicas do ventrículo esquerdo causadas pela ingestão diária de baixa dose de L-NAME em ratos (7.5 mg/kg/dia). O enalapril (25 mg/kg/dia) e o losartan (30 mg/kg/dia) foram administrados a ratos machos Wistar (200 ± 18 g), adicionados à ingestão hídrica concomitantemente ao L-NAME. Os animais foram sacrificados aos 2 (N=44), 4 (N=45) e 6 (N=44) meses depois do tratamento. A atividade da cNOS foi inibida em 50% no grupo L-NAME, independentemente do tempo estudado. O tratamento com enalapril ou losartan, administrados individualmente, não mudaram a atividade da cNOS. A pressão sangüínea elevou em 13±1.2, 15±1.1 e 15±2 mmHg (P<0.05) nos ratos tratados com L-NAME aos 2, 4 e 6 meses, respectivamente, sendo tais alterações prevenidas pelo tratamento com enalapril ou losartan. A fração de volume (Vv), e a densidade de área (Sv) e de comprimento (Lv) da microcirculação nos ventrículos esquerdos foram significativamente reduzidas pelo L-NAME, sendo tais alterações prevenidas tanto pelo enalapril, quanto pelo losartan. A quantidade de tecido fibroso não foi alterada de modo significativo pelo tratamento com L-NAME. Em resumo, a redução marcante dos parâmetros vasculares cardíacos indicam a existência de intensa vasoconstrição coronariana nos ratos tratados com L-NAME, mesmo na vigência de modesta elevação da pressão arterial; indicando uma elevada sensibilidade da microcirculação coronariana ao NO

Resumo: O envenenamento botrópico leva ao desenvolvimento de eventos como necrose, hemorragia e distúrbios da coagulação, gerando um quadro fisiopatológico de grande complexicidade. O trabalho de Lôbo de Araújo et al. de 1998 descreveu uma proteína de cadeia polipeptídica simples (PII1A), a qual apresentou atividade enzimática tipo esterolítica, proteína esta, proveniente do veneno da Bothrops lanceolatus, uma serpente habitante da ilha da Martinica, no Caribe. A imunodifusão e a imunoeletroforese apresentaram uma linha simples de imunoprecipitado. A fração em questão ainda hidrolisou as cadeias a e b do fibrinogênio, o que levou a classificar esta proteína como uma enzima fibrino(geno)lítica. No presente trabalho, nos propusemos a dar continuidade ao estudo desta proteína parcialmente purificada e caracterizada e investigar sua atividade como ativadora de plasminogênio ou portadora de atividade fibrinolítica, assim a atividade plasmina símile foi determinada pela ação da proteína diretamente sobre substrato cromogênico específico (S-2251ä), estando de acordo com achados publicados por Lôbo de Araújo et al (1998) e que revelou também discreta atividade ativadora de plasminogênio, quando compara-se incubação na presença e ausência deste. Determinamos 71% da seqüência de aminoácidos da PII1A por espectrometria de massa ¿ Q-tof, este método revelou um peso molecular de 28.360 kDa. A análise da seqüência em base de dados mostrou homologia com outras proteínas se serpentes e com enzimas como tripsina e fatores da cascata de coagulação

Resumo: O objetivo do presente trabalho foi verificar o potencial antimicrobiano de 6 soluções anestésicas tópicas comerciais utilizadas em Odontologia. O estudo desenvolveu-se através de 3 métodos, a saber: a) verificação da capacidade bactericida com o método para o teste de difusão em gel de ágar com as soluções em contato com as culturas de germes; b) o método de MILLER, DOMINIC & CRIMMEL (1973) modificado, para o teste das capacidades bactericidas das soluções e c) verificação das capacidades bactericidas através de um teste "in vivo", segundo metodologia proposta por SAHADE et alii (1975). , Os resultados obtidos no presente trabalho, permitem concluir que: 1. nos testes de difusão em"ágar, a solução anestésica 11 mostrou eficiente atividade antimicrobiana, seguida das soluções anestésicas V e VI que somente não apresentaram atividade antimicrobiana frente a cultura mista proveniente da mucosa oral quando incubada em anaerobiose. Por outro lado, as soluções anestésicas I e III, foram eficazes perante algumas culturas testadas, enquanto que a solução anestésica IV não apresentou atividade antimicrobiana frente a nenhum dos inóculos. 2. nos testes de ação bacterecida a solução anestésica II foi a que melhor desempenho apresentou, apesar de não ser efetiva pará todas as culturas, enquanto que a solução IV revelou-se inefetiva contra todos os germes testados. As soluçôes anestésicas I, III, V e VI não puderam ser classificadas como eficientes já que não mostraram atividade antimicrobiana frente à maioria dos inóculos. 3. no estudo "in vivo" todas as soluçôes anestésicas foram eficientes em descontaminar o local de punção da agulha, embora em graus diferentes. A solução anestésica V apresentou o maior índice de esterilidade (100%) enquanto que a solução IV apresentou o menor índice (70%). 4. a solução anestésica II demonstrou maior eficiência conjuntamente nos testes "in vitro" e no estudo "in vivo", além de um bom desempenho leveduricida. 5. as culturas puras e mistas utilizadas, mostraram-se adequadas para o estudo realizado

Resumo: Doenças periodontais são lesões que afetam os tecidos que protegem e sustentam os dentes em seus alvéolos e são as principais causas das perdas dos dentes após os 35 anos. Os achados mais antigos datam de 20.000 a 30.000 anos a.C. A patogênese total da doença ainda não é conhecida, mas um dos principais fatore s responsáveis pela destruição das estruturas periodontais de suporte é a participação do sistema imunológico, como mediador da resposta imunológica.
Neste estudo foi avaliado, através de radiografias, o efeito da ciclosporina, que é um imunossupressor seletivo para linfócitos T, na evolução da doença periodontal induzida em ratos. Foram utilizados 36 ratos, machos (Rattus Norvergicus, Albinus,
Wistar, SPF) com peso inicialmente variando de 200 a 240 g e com aproximadamente 2 meses de idade. as animais foram dividos em 3 grupos: GRUPO I recebeu sacarose e irritante; GRUPO 11, sacarose, irritante ,e ciclosporina; GRUPO 111, água e irritante. Ao final dos períodos experimentais, os animais foram sacrificados, suas mandíbulas retiradas, separadas
na sínfese mentoniana e radiografadas. As interpretações das imagens radiográficas foram realizadas através de computador com o software AutoCAD versão 12 for MS-DOS, com o aplicativo CAD OVERLA Y versão GSX 4.1 - número de série 110-108112. Os resultados obtidos mostraram uma redução na perda óssea no GRUPO 11, quando comparado aos demais, embora, não detectada por testes estatísticos. Isto não descarta a possibilidade da ciclosporina participar, em algum grau, nos mecanismos de destruição periodontal

Resumo: o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método sensível para quantificar minociclina em plasma humano. A minociclina foi quantificada em plasma humano pela técnica de cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas (LC-MS/MS), usando a claritromicina como padrão interno. A minociclina e o padrão interno - claritromicina, foram extraídos de plasma humano através de uma extração líquido-líquido composta de Diethyléter/diclorometano (70:30). Após a retirada do solvente, os fármacos foram dissolvidos em um pequeno volume de fase móvel, sendo que uma alíquota desta amostra foi analisada por cromatografia líquida de fase reversa acoplada ao espectrômetro de massas sequencial no modo "eletrospray" positivo, sendo o íon filho monitorado, previamente selecionado no modo de monitoração de reação múltipla (MRM). O método foi considerado rápido ( extração líquida simples e tempo de corrida inferior a 3 minutos) e sensível ( limite de quantificação de 5 ng/mL), e sendo empregado em estudo de bioequivalencia de duas formulações de concentração 100 mg em 24 voluntários sadios

Resumo: Catuama é um fitoterápico amplamente usado pela população brasileira. É constituído por quatro plantas medicinais: Tríchílía catígua (catuaba), Paullínía cupana (guaraná), Ptychopetalum olacoides (muirapuama) e Zinziber offícinalis (gengibre). A Catuama é empregada como medicação tônica em casos de astenias neuromusculares, convalescenças, fraquezas em geral e impotência sexual masculina. O objetivo deste trabalho foi o de investigar o efeito e o mecanismo de ação da Catuama e separadamente os extratos de T. catígua, P. cupana, P. olacoídes e Z. offícínalís em corpo cavernoso isolado de coelho e humano. Os experimentos foram realizados com segmentos de corpo cavernoso de coelhos (1,5 a 2,5 Kg). Após anestesiados (Sagatal, 30-40 mg/Kg, i.v.), o pênis do animal foi retirado, dissecado e perfundido em sistema de cascata com uma solução aquecida e oxigenada de Krebs. Após o período de 60-90 min de estabilização, os tecidos foram pré-contraídos com KCI (40 mM). Os experimentos com corpo cavernoso de humanos foram aprovados pelo Comitê de Ética do Hospital das Clínicas da UNICAMP. Os tecidos retirados de cadáveres foram dissecados e montados em um sistema de cascata, conforme descrito acima. A Catuama (1, 3 e 10 mg) causou relaxamentos dose-dependentes dos segmentos de corpo cavernoso de coelho (11 .:t 7%, 26 .:t 5% e 82.:t 9%, respectivamente; n=6), com perfil de relaxamento semelhante àquele induzido pela acetilcolina e gliceriltrinitrato. A infusão de L-NAME (10 µM), inibidor inespecífico da síntese de NO, induziu aumento do tônus dos tecidos e reduziu os relaxamentos de corpo cavernoso de coelho induzidos por acetilcolina (ACh; 0.6 nmol; 72 + 23% antes e 7 + 4% durante a infusão de L-NAME; n=6 p< 0.01), sem afetar aqueles induzidos pela Catuama. De modo similar, a infusão do ODa (1 O µM, n=6), um inibidor potente da atividade de guanilato ciclase solúvel, induziu aumento do tônus dos tecidos e aboliu os relaxamentos de corpo cavernoso de coelho induzidos por acetilcolina e gliceriltrinitrato. Entretanto, o OOQ não modificou o relaxamento induzido pela Catuama (10 mg; 85± 17% antes e 91 ± 17% durante a infusão de 000). A cromacalína (CMK), agonista de canais de potássio ATP-dependentes, causou relaxamento dose-dependente e de longa duração dos segmentos de corpo cavernoso. A infusão do antagonista desta classe de canais de K+, glibenclamida (10µM, n=6), reduziu significativamente os relaxamento induzidos pela CMK (30 nmol; 102 ± 11 % antes e 47 ±8% durante a infusão de glibenclamida, p<0.05) sem afetar aqueles induzidos por ACh. Na concentração utilizada, a glibenclamida não modificou o relaxamento de corpo cavernoso induzido pela Catuama (10 mg; 64± 10% antes e 63 ± 4% durante a infusão de glíbenclamida). O bloqueador de canais de sódio, tetrodotoxina (TTX, 1 µM, n=4) e o antagonista de receptores muscarínicos atropina (1 µM, n=4), não modificaram os relaxamentos induzidos pela Catuama (10 mg; 62 :t 10% antes e 67 :t 14% durante a infusão de TTX) e GTN. Os extratos de P cupana (0.5 - 5 mg), Z. officinalis (1 -10 mg), T. catigua (1 - 10 mg) e P. olacoides (2 - 20 mg) produziram relaxamentos dependentes da dose em corpo cavernoso de coelho que não foram modificados pelo L-NAME (10 µM, n=4). A infusão da nifedipina (10 nM, n=4), um bloqueador de canais de Ca2+ do tipo L, reduziu parcialmente o tônus dos tecidos e inibiu seletivamente os relaxamentos de corpo cavernoso de coelho induzidos pela T. catigua, P. olacoides e Catuama. Os relaxamentos induzidos pela acetilcolina, P. cupana e Z. officinalis não foram significantemente afetados pela nifedipina. Resultados semelhantes, com exceção do P. olacoides, foram observados com outro bloqueador de canais de Ca2+ do tipo L, o verapamil (10 nM). A infusão contínua do extrato de Trichilia catigua (10 mg/ml, n=4) aboliu a contração de corpo cavernoso induzi da pelo Bay-K 8644 (10 nmol; 61 ± 14.4% antes e 8 ±3.1 % durante a infusão da catuaba, p< 0.01). As contrações causadas pela noradrenalina e pelo próprio KCI (0.1 mmol) não foram significantemente afetadas pela infusão de Trichilia catigua. Em corpo cavernoso humano, a Catuama (1, 3 e 10 mg) causou relaxamentos dose-dependentes (15 ± 10%, 37 ± 18% e58 ± 29%, respectivamente; n=14) com perfil de relaxamento semelhante aquele induzido pela ACh (0.6 nmol) e GTN (1.3 nmol). A infusão de L-NAME (3 µM, n=4) induziu aumento do tônus dos tecidos e reduziu marcantemente o relaxamento de corpo cavernoso induzido pela ACh. Com relação ao Catuama, notamos que o L-NAME causou pequena, porém significativa, redução no relaxamento. O ensaio dos componentes de P. cupana (1.5 mg), Z. offícínalís (3 mg), T. catígua (10 mg) e P. olacoídes (10 mg) revelou que todos foram capazes de produzir relaxamentos significantes dos segmentos de corpo cavernoso humano. A infusão de L-NAME (3 IJM; n=4) reduziu parcialmente os relaxamentos induzidos pelos extratos de P. cupana, Z. offícínalís, T. catígua e P. olacoídes. A incubação do homogenato de corpo cavernoso isolado de coelho com o inibidor da fosfodiesterase (+IBMX; n=8), causou um aumento da ordem de 600 % dos níveis de AMPc. Com relação ao extrato de P. cupana, notamos um aumento dos níveis de AMPc não relacionado à concentração empregada, e menor do que aquele produzido pelo IBMX. Os outros extratos não modificaram os níveis de AMPc em relação ao controle, mesmo em concentrações elevadas (100 mg/ml). Isto indica que o mecanismo de relaxamento de corpo cavernoso isolado de coelho causado pela Catuama e seus componentes não indica ser através da inibição da fosfodieserase. Podemos concluir que, em tecido de. coelho, as respostas relaxantes causadas pela Catuama e seus componentes, não estão diretamente envolvidas com a liberação de NO. Em tecido isolado de' humano, o NO demonstra estar associado ao mecanismo de relaxamento desses compostos. Investigações futuras serão necessárias para o esclarecimento completo do mecanismo de relaxamento induzido pela Catuama e componentes, em coelhos e humanos

Resumo: A sepse e ainda causa de muitos óbitos em hospitais do mundo todo. A gravidade da sepse esta relacionada ao estado de ativação de plaquetas. Trabalho prévio do nosso grupo mostrou que o tratamento de ratos com lipopolissacarideo (LPS) leva a inibição da agregação plaquetaria e aumento da formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) via NADPH oxidase. Entretanto, o efeito inibitório do LPS na agregação não e dependente da liberação de EROs. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi investigar as vias de sinalização envolvidas na inibição da agregação e na ativação da NADPH oxidase em plaquetas de ratos tratados com LPS. Para tanto, ratos Wistar machos foram injetados com LPS (1 mg/kg, i.p.) e apos 6h ou 48h o sangue foi coletado. A agregação plaquetaria foi induzida por ADP (10 ?M) na ausência e na presença de diferentes inibidores enzimáticos. A formação de EROs em plaquetas foi determinada por citometria de fluxo utilizando a sonda fluorescente DCFH-DA e a concentração intraplaquetaria de GMPc por imunoensaio. Também foram realizados ensaios de western blotting para a analise da ativação das enzimas c-Src, AKT e NADPH oxidase, bem como para a detecção de proteínas contendo resíduos de nitrotirosina. A analise do western blotting mostrou que a fosforização da c-Src quinase no resíduo Tyr 416, que indica ativação da enzima, foi semelhante em plaquetas de ratos injetados com salina ou LPS em 6h ou 48h. Alem disso, a inibição de Src com PP2 (10 ?M) não modificou a agregação plaquetaria de ratos tratados com LPS. Nos verificamos que a inibição da agregação foi acompanhada por um aumento significativo dos níveis de GMPc, bem como da nitracao de proteínas, em plaquetas de ratos 6h ou 48h apos o tratamento com LPS. A incubação das plaquetas com o sequestrador de peroxinitrito -(-) epigalocatequina gallato (10 ?M) aumentou significativamente a agregação de ratos injetados com LPS em 48h, mas não alterou a agregação em 6h. Entretanto, a inibição da agregação plaquetaria em ratos tratados com LPS em 6h foi revertida pelo inibidor da enzima guanilil ciclase ODQ (25 ?M) ou pelo inibidor de PKG Rp-8-Br (25 ?M). De forma semelhante, o inibidor nao seletivo de PKC GF109203X (10 ?M) reverteu o efeito inibitório do LPS em 6h na agregação e reduziu os niveis de GMPc em plaquetas. Nos mostramos que a fosforização da AKT no resíduo Thr308 foi significativamente maior em plaquetas de ratos tratados com LPS quando comparado com ratos injetados com salina. A incubacao das plaquetas de ratos tratados com LPS com o inibidor de PI3K wortmannin (100 nM) nao modificou a agregação. Entretanto, o inibidor da AKT PPI-1 (20 ?M) aumentou a agregação para níveis semelhantes aos observados nos ratos injetados com salina. A agregação plaquetaria de ratos 48h apos o tratamento com LPS não foi afetada por nenhum dos inibidores enzimáticos utilizados neste trabalho. O aumento da geração de EROs em plaquetas de ratos tratados com LPS em 6h ou 48h foi acompanhado pelo aumento significativo da fosforização do resíduo Ser345 na subunidade p47-phox da NADPH oxidase. A incubação de plaquetas de ratos tratados com LPS com GF109203X inibiu a fosforização da p47-phox bem como reduziu a geração de EROS. A produção aumentada de EROs em plaquetas de ratos tratados com LPS em 6h também foi reduzida em 42% por PP2. A inibição de PI3K ou AKT não modificou a produção de EROS em plaquetas de ratos tratados com LPS. A incubação de plaquetas com ODQ ou com Rp-8-Br (5?M) reduziu significativamente a produção de EROS somente em plaquetas de ratos 48h apos o tratamento com LPS. Portanto, no presente trabalho podemos concluir que a inibição da agregação plaquetaria observada 6h apos a injeção de LPS e mediada pela via NO/GMPc/PKG e também e modulada pela PKC e AKT, enquanto que, o efeito inibitório do LPS em 48h e essencialmente dependente da formação de peroxinitrito. A produção aumentada de EROs em plaquetas de ratos tratados com LPS envolve a fosforização da subunidade p47-phox da NADPH oxidase pela PKC. Alem da PKC, são importantes no aumento da liberação de EROs em plaquetas a Src em 6h e a via GMPc/PKG em 48h apos a injeção de LPS

Resumo: Estudos de utilização de medicamentos e de Fannacovigilância entre pacientes pediátricos são escassos. O objetivo foi avaliar a ocorrência de eventos adversos a medicamentos entre crianças atendidas no Hospital das Clínicas da Unicamp em 2001. A metodologia utilizada foi um estudo transversal retrospectivo no PS de Pediatria e no CCI. No primeiro foram avaliadas todas as fichas de atendimento dos 2 dias sorteados em cada mês, e no segundo foram avaliadas todas as fichas de atendimento de pacientes com idade < 15 anos, por uso de medicamentos, telefônicos e presenciais. Foram analisados perfil demográfico, diagnósticos, medicamentos utilizados e possíveis eventos adversos. Obtivemos os seguintes resultados: 1. PS: 1902 fichas de atendimento avaliadas, 38 fichas (2.0%) com dados que permitiram suspeitar de eventos adversos a medicamentos, principalmente por antiinfecciosos, sendo 63.2% em pacientes do sexo masculino, e 36.8% com idade de 1 a 4 anos. 2. CCI: 524 atendimentos, 490 telefônicos e 34 presenciais. Fichas de atendimentos presenciais: 57.1 % masculino, 37.1 % 1 a 4 anos; principais eventos: 16 acidentes, 6 tentativas de suicídio, 4 reações adversas, 4 erros de administração. Concluindo, os dados mostram que tanto no PS como no CCI eventos adversos a medicamentos nem sempre são diagnosticados. Recomendamos que Reação Adversa a Medicamento deve sempre ser considerada no diagnóstico diferencial

Resumo: A hiperhomocistememia vem sendo considerada um fator de risco para trombose, portanto mvestigar os fatores genéticos relacionados com o aumento da concentração da homocisteína plasmática é importante para prevenção e tratamento. As mutações C677T e A1298C no gene da MTHFR e a mutação A66G no gene da MTRR podem aumentar a concentração da homocisteína, assim como fatores adquiridos e ambientais. A quase totalidade dos estudos que avaliaram a homocisteína plasmática foram realizados em indivíduos adultos, poucos estudos avaliaram crianças.Portanto, neste estudo correlacionamos as concentrações de homocisteína plasmática com as mutações C677T e A1298C no gene da MTHFR e A66G no gene da MTRR assim como com as concentrações de ácido fólico e vitamina B12 em um grupo de 220 crianças com idade entre 1 a 8 anos. Todas as crianças incluídas não estavam fazendo uso de qualquer medicação e não apresentavam sintomas clínicos de nenhuma doença.Todos os parâmetros analisados incluindo vitamina B12, ácido fólico, perfil renal, hepático e lipídico estavam dentro dos valores de referência.Na análise multivariada, os polimorfismos estudados não apresentaram nenhuma influência nas concentrações de homocisteína e sua importância como fator genético para hiperhomocistememia não foi estabelecida. Foram encontradas 37 crianças (17%) heterozigotas para ambas as mutações C677T e A1298C no gene da MTHFR. Entretanto, em contraste ao observado em adultos, a heterozigose para ambas as mutações não mostrou aumento nas concentrações de homocisteína plasmática quando comparada a outros grupos. Estes resultados adicionalmente sugerem que o fator genético por si só não está associado com as concentrações de homocisteína plasmática. Embora nenhuma relação foi observada entre o genótipo TI da mutação C677T no gene da MTHFR e a homocisteína, as crianças que apresentaram o genótipo TI tiveram concentrações de ácido fólico mais baixos do que as crianças com o genótipo CC e CT, esta observação sugere que doenças cardiovasculares podem ser prevenidas, durante a infância, através da suplementação alimentar com ácido fólico. A média da concentração de homocisteína ácido fólico e vitamina B12 foi determinada entre os diferentes haplótipos. O haplótipo CCACGG foi o único que apresentou diminuição significativa da concentração de homocisteína independente de vitamina B12 e ácido fólico. Por outro lado, alguns haplótipos mostraram diminuição significativa das concentrações de vitamina B12 e ácido fólico, sem alterar a concentração de homocisteína. Estes resultados sugerem que apesar de nenhum polimorfismo ter sido identificado como fator de risco para hiperhomocisteinemia, estas associações podem ter algum efeito. A contribuição de nossos dados para o entendimento dos fatores genéticos relacionados com hiperhomocisteinemia é de grande importância, pois foram analisados em crianças que ainda não apresentavam os fatores adquiridos que podem ter relação com a hiperhomocisteinemia

Resumo: O tabagismo é considerado um problema de saúde pública, uma vez que é responsável por cerca de 4 milhões de morte anualmente em todo o mundo. Nos últimos anos tem ocorrido um aumento dramático na procura por métodos de quantificação da nicotina e outros derivados do tabaco, na intenção de se avaliar as terapias de cessação do hábito de fumar. Nesse trabalho foram feitas a padronização e a validação de uma metodologia para a quantificação da nicotina e de seu principal metabólito, cotinina, em 1 mL de. plasma de tabagistas com adesivo transdérmico de nicotina, após submetidos a um período de abstinência ao tabaco de 24 horas. O plasma foi extraído com diclorometano e analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em sistema cromatográfico da Shimadzu, Japão, em coluna LUNA (Phenomenex , USA), 150 mm de comprimento, 4,6 mm de diâmetro interno e 5 f.tm de partícula. Nas condições padronizadas a nicotina, a cotinina e o 2-fenilimidazol (padrão interno) eluíram em 4,6 :t 0,1 min., 6,2 :t 0,1 mino e 15,2 :t 0,1 min., respectivamente. A linearidade do método foi observada com amostras de plasma adicionadas com padrões nas concentrações de 10 a 50 ng/mL para a nicotina e de 10 a 500 ng/mL para a cotinina, mostraram -se adequadas aos propósitos do estudo, com coeficientes de determinação de 0,9928 para a nicotina e 0,9978 para a cotinina. A recuperação média do estudo foi de 75,8% e 77,7% para a nicotina e a cotinina, respectivamente. A precisão intra-ensaio teve coeficiente de variação médio de 6,3% (:tO,01) para a nicotina e 7,0% (:tO,01) para a cotinina, e a precisão interensaio apresentou coeficientes de variação médios de 7,1 (:t 0,02) e 7,6 (:t 0,02) para a nicotina e a cotinina, respectivamente. Os limites de detecção foram 5 e 3 ng/mL e de quantificação 10 e 5 ng/mL para a nicotina e a cotinina. O método mostrou-se adequado aos estudos de exatidão por apresentar variação entre a concentração teórica e a calculada pelo método inferior a 10 %. O estudo de estabilidade comprovou que as amostras podem ser armazenadas em geladeira por um período de até 3 meses sem apresentarem perdas dos princípios ativos maior que 10%. O método forneceu uma separação adequada da cafeína, considerada o principal contaminante da amostra. A técnica padronizada e validada permitiu a análise de amostras de tabagistas com adesivo transdérmico de 21 mg e a possibilidade de realização de estudos futuros correlacionando a farmacocinética e a farmacodinâmica da nicotina com o rítmo circadiano da pressão arterial

Resumo: Os fagócitos, dentre eles, macrófagos, granulócitos e eosinófilos contêm uma NADPH oxidase associada à membrana, a qual produz superóxido e outros intermediários do oxigênio, os quais têm importante papel na defesa contra infecções. O colostro humano, além de suas propriedades nutricionais, é considerado uma importante fonte de fatores imunoprotetores para os neonatos. Os macrófagos do colostro constituem parte destes fatores imunoprotetores. O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade do sistema NADPH oxidase e a expressão do gene CYBB, que codifica a glicoproteína gp91-phox, em macrófagos do colostro humano, e compará-Ias às de monócitos do sangue periférico e células mielomonocíticas humanas THP-l. Tais células foram cultivadas com IFN-y e TNF-a durante 48 horas. A seguir, a liberação de superóxido foi determinada espectrofotometricamente por meio da redução do cito cromo c especificamente inibida pela superóxido dismutase. A expressão do gene CYBB, que codifica o componente gp91-phox, foi determinada por meio de RT -PCR quantitativo-relativo. Nossos resultados mostram que a liberação espontânea de superóxido por macrófagos do colostro foi superior à de monócitos do sangue periférico. Contudo, ao serem estimulados com PMA e as citocinas IFN-y e TNF-a, macrófagos de colostro e monócitos do sangue periférico apresentam atividade NADPH oxidase equivalente. A liberação de superóxido por macrófagos do colostro e monócitos do sangue periférico foi sempre superior à de células THP-l, mesmo sendo estas, estimuladas com PMA e as citocinas IFN-y e TNF-a. Tais citocinas aumentaram a expressão relativa do gene gp91-phox em células THP-l, mas não em monócitos de sangue periférico e em macrófagos do colostro. Desta forma, após a cultura com as citocinas, as células THP-l passaram a apresentar expressão relativa do gene gp91- phox semelhante às outras duas populações, sem contudo, apresentar atividade NADPH oxidase equivalente, demonstrando que a atividade NADPH oxidase final na linhagem mielomonocítica humana é regulada em parte pela expressão do gene CYBB, é o produto de diferentes eventos do metabolismo celular e está relacionada ao estado de diferenciação celular