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Resumo: As proteinas sao macromoleculas que possuem importancia vital para o funcionamento celular, participando da maioria das reacoes biologicas e tambem como componentes estruturais. Para que uma proteina possa exercer sua funcao, precisa atingir sua estrutura nativa atraves de um processo denominado enovelamento proteico. Neste contexto, as chaperonas moleculares sao proteinas capazes de auxiliar no enovelamento de outras proteinas, atuando na prevencao de agregados, desagregacao, translocacao, ativacao, entre outros. Dentre os muitos tipos de chaperonas existentes, neste trabalho foram abordadas as chaperonas das familias Hsp100 e Hsp90, as quais estao relacionadas aos processos de desagregacao e auxilio do enovelamento de proteinas-substrato, respectivamente. O presente trabalho pretendeu produzir as proteinas recombinantes Hsp100 e Hsp82 de cana-de-acucar para a caracterizacao de suas respectivas relacoes estrutura-funcao. Para isto foram empregadas tecnicas como: dicroismo circular, fluorescencia, espalhamento dinamico de luz e ultracentrifugacao analitica. Assim, foi observado que a forca ionica do meio e capaz de influenciar a estrutura quaternaria da proteina Hsp100, a qual se apresenta hexamerica em menores concentracoes de sal. Alem disto, e capaz de reconhecer agregados proteicos formados pelas proteinas luciferase e citrato sintase em ensaios in vitro. Ja a proteina Hsp82 apresentou uma estrutura dimerica, a qual nao e influenciada pela presenca de nucleotideos e apresenta grande estabilidade termica. Finalmente, a proteina p23 humana, a qual e responsavel por auxiliar a proteina Hsp90 no enovelamento de muitas proteinas/complexos proteicos, tambem foi caracterizada. Foram observados indicios de que a regiao C-terminal, rica em residuos de aminoacidos carregados, pode possuir algum grau de estruturacao, apesar de alguns estudos na literatura indicarem o contrario. O estudo das chaperonas de cana-de-acucar foi direcionado por um trabalho previo de anotacao de sequencias relacionadas as chaperonas moleculares no banco de dados do projeto SUCEST (Sugarcane EST Genome Project), o qual foi realizado por nosso grupo de pesquisa. Alem disto, sao apresentados os resultados da anotacao das sequencias relacionadas as chaperonas de eucalipto no banco de dados FORESTs (Eucalyptus Genome Sequencing Project Consortium), possibilitando futuros estudos com estas proteinas.

Resumo: A dor é definida como uma sensação complexa e indefinida envolvendo múltiplos fatores como estilo de vida, ambiente. Muitas vezes a dor é produto de um processo inflamatório. As inflamações são uma resposta do sistema imune a diferentes estímulos, microorganismos, danos teciduais, estímulos miogênicos ou até traumas cirúrgicos que liberam mediadores endógenos. Ao receber o estímulo, diferentes enzimas como fosfolipases e ciclooxigenases originam mediadores inflamatórios (prostaglandinas, citocinas, leucotrienos) dando continuidade à cascata inflamatória muitas vezes de maneira exacerbada, que é caracterizada pelos cinco sinais cardinais da inflamação: calor, rubor, tumor, dor e perda de função. Para o tratamento das inflamações as drogas de primeira escolha são os antiinflamatórios não esteroidais (DAINES), que atuam na inibição da ciclooxigenase (COX-2), contudo, o uso das DAINES pode provocar o advento de úlceras pépticas, ou até mesmo falência renal e problemas cardíacos no caso dos inibidores seletivos da COX. Em inflamações crônicas utilizam-se os Glicocorticóides (GC), que são potentes antiinflamatórios, mas provocam efeitos colaterais sistêmicos como hipoglicemia, ação no sistema nervoso central e uma deficiência no sistema imune. A utilização de princípios ativos vegetais é uma alternativa para o controle das inflamações, entre elas destacam-se plantas da família Agavaceae, principalmente do gênero Agave, com destaque para Agave sisalana rica em saponinas esteroidais. As saponinas são uma classe de metabólitos secundários que apresentam diferentes funções terapêuticas, de grande interesse comercial e farmacológico. Esses compostos apresentam um núcleo esteroidal envolto por cadeias de açúcares denominado aglicona ou sapogenina. A partir das folhas da Agave sisalana obteve-se a fração hexânica de Agave sisalana (FHAS), que teve seu potencial terapêutico avaliado em diferentes testes de inflamação, algesia e toxicidade. A FHAS apresentou uma redução significativa (p<0,05) edema nos modelos agudos de inflamação; edema de orelha por Xilol e edema de pata induzido por carragenina. A FHAS também apresentou diminuições significativas no modelo crônico de inflamação Granuloma cotton pellet, que avalia a infiltração celular. Os valores obtidos no cotton pellet foram corroborados pelo modelo de pleurisia, em que também houve redução do infiltrado celular. A FHAS demonstrou um potencial antinociceptivo nos modelos de analgesia, porém com uma ação bem menor do que os fármacos padrão, o que indica que o mecanismo de ação parece não envolver atuação com receptores opióides em modelos de analgesia. Com relação à toxicidade a FHAS não apresentou aumento significativo (p<0,05) de proteínas plasmáticas. Na avaliação do peso animais nenhuma das doses da FHAS apresentou efeito significativo sobre a evolução ponderal de peso dos animais, como foi o caso do controle positivo GC, o que indica ausência de efeitos colaterais graves, semelhantes aos GC. Através da análise dos dados, indicam que ação antiinflamatória e analgésica encontrada deve-se a presença das sapogeninas esteroidais na FHAS, principalmente a hecogenina. Devido a esses resultados, novas avaliações serão feitas para elucidar o mecanismo de ação antiinflamatório apresenta ação semelhante aos GC, trazendo assim perspectivas de uso medicinal da Agave sisalana.

Resumo: O gene Opaco2 (02) é um fator de regulação da transcrição do tipo bZIP envolvido no controle da síntese de proteínas de reserva no endosperma do milho. Um cDNA de Arabidopsis thaZiana que codifica uma proteína do tipo bZIP homóloga ao fator de transcrição 02 de milho denominado BZ02Hl masic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) foi isolado e caracterizado. A seqüência do gene BZ02Hl foi identificada nos bancos de dados do projeto genoma de Arabidopsis thaZiana. O gene BZ02Hl é composto por sete exons e seis íntrons e está presente em cópia única no genoma de Arabidopsis thaZiana. A estrutura do gene BZ02Hl, assim como a alta similaridade entre as seqüências do domínio bZIP de BZ02Hl e 02 confirmaram que BZ02Hl pertence à Fanulia Multigênica de 02. Transcritos de RNA mensageiro de BZ02Hl foram detectados em todos os tecidos investigados e a incidência ou ausência de luz sobre as plantas jovens pareceu não afetar a expressão do gene. O domínio bZIP da proteína BZ02Hl foi produzido em E. coZi para determinar sua especificidade de ligação ao DNA. O domínio bZIP de BZ02Hl reconhece seqüências relacionadas ao sítio GCN4 como GLM (5'- TGACTA-3') e a seqüência palíndrome (5'-GACATGTC-3'), além dos motivos G-box e, menos intensamente, C-box. A especificidade de ligação do domínio bZIP de BZ02Hl foi comparada com a da proteína 02 de Coix e as diferenças encontradas foram discutidas

Resumo: O excesso de sais no solo afetao metabolismo geral da planta, causando alterações fisiológicas e morfológicas. Visando avaliar os efeitos do sal no crescimento e metabolismo sob estresse salino, foram comparadas as respostas de Vigna luteola (halófita) e Vigna unguiculata (sensível). As plantas foram cultivadas na presença de NaCl nas concentrações de: 100mM, 250mM e 500mM. V. unguiculata apresentou reduções significativas de massas fresca e seca, área foliar e número de folhas sob salinidade. Estes parâmetros não foram afetados em V. luteola. Há dados na literatura que mostram que plantas adaptadas à salinidade apresentam a razão raiz/parte aérea maior que plantas sensíveis. Contudo, este aumento foi evidenciado na espécie mais sensível ao sal, sob salinidade, mantendo-se constante em V. luteola. O aumento de suculência, que é considerado uma adaptação ao estresse salino, não foi verificado em nenhuma das espécies estudadas. A resistência ao estresse salino tem sido relacionada com a atividade de enzimas antioxidantes, que removem espécies ativas de oxigênio. O aumento da atividade de peroxidases totais foi observado apenas em V. luteola, associado ao estresse salino. Sob estresse salino, ocorreu o aumento da atividade de siringaldazina oxidase somente em V. unguiculata. Não foi observada relação entre crescimento de raízes e atividade desta enzima, pois nesta espécie a salinidade provocou maior crescimento da raiz. A atividade de peroxidases totais em Vigna luteola está localizada na epiderme, córtex e cilindro central e, em V. unguiculata na epiderme e cilindro central. Sob estresse salino, a atividade foi mais intensa nas duas espécies. Em V. luteola foi observada em toda raiz, em V. unguiculata, além da epiderme e do cilindro central, foi possível observa-la em porções do córtex. A respeito da localização da enzima siringaldazina oxidase, em V. unguiculata restringiu-se à epiderme, expandindo - se para o córtex e cilindro central sob estresse salino. Já em V. luteola estava presente em todas as regiões da raiz, intensificando - se com a aplicação de NaCl no meio de cultivo. A alteração da permeabilidade das membranas é um dos resultados da salinidade, que está relacionado ao aumento do teor de espécies ativas de oxigênio. Foi observado aumento de liberação de eletrólitos em ambas as espécies de Vigna. Entretanto, em V. unguiculata, o acréscimo neste parâmetro foi altamente significativo na presença de NaCl e com resultados sempre maiores aos mesmos tratamentos de V. luteola. A manutenção da razão Na+/K+ nas células é um fator relevante para a tolerância à salinidade. O acúmulo de Na+ foi observado em raízes e folhas das duas espécies de Vigna. Em raízes, obteve-se valores maiores em V. luteola, em decorrência a alta concentração de Na+ neste órgão. Em folhas, a maior razão Na+/K+ foi obtida em V. unguiculata. As análises de parâmetros bioquímicos sob estresse salino, indicaram que não houve variação no teor de proteínas (folhas), sacarose (folhas) e açúcares solúveis totais (raiz e folhas) em Vigna luteola. Sob salinidade, o teor de proteínas foi reduzido em folhas de V. unguiculata. Já as concentrações de açúcares solúveis totais (raízes e folhas), sacarose (folhas) e malondialdeído (raiz) ficaram inalterados. Mediante salinidade, não ocorreram alterações significativas nos parâmetros bioquímicos em V. luteola, o que permitiu seu crescimento e desenvolvimento normal. As mudanças de indicadores bioquímicos e ausência de resposta antioxidante em V. unguiculata sob salinidade, podem estar relacionadas com o comprometimento do seu crescimento sob estresse salino

Resumo: As amidas glutamina e a asparagina são, reconhecidamente, importantes formas de transporte do nitrogênio em muitas plantas. Representam a fonte principal de nitrogênio para a síntese de proteína de reserva em sementes imaturas. Entretanto, nada se conhece a respeito da maneira pelo qual o nitrogênio desses aminoácidos se torna disponível para a biossíntese de outros aminoácidos protéicos. Objetivando esclarecer este ponto, foi realizada uma investigação sobre enzimas possivelmente envolvidas neste processo. O endosperma do milho foi escolhido para se estudar a utilização de glutamina, em virtude da importância deste composto no sistema de transporte dessa planta. Verificou-se que o endosperma apresentou atividade da enzima glutamina oxoglutarato amida transferase (GOGAT, E.C. 2.6.1.53), em níveis suficientemente altos para metabolizar toda glutamina translocada ao grão. A enzima apresentou um padrão de atividade bem definido durante a fase de maturação do endosperma, com um pico de atividade (Max. = 56 umoles GLU/min/endosperma) correspondente ao período de síntese mais intensa de proteína. Os dados sugerem que a glutamina pode ser metabolisada mediante amida para a posição 'alfa' do acetoglutarato. O glutamato assim formado poderia doar o nitrogênio para outros aminoácidos, mediante transaminação. Para se estudar a utilização de asparagina, foi escolhida a semente imatura de ervilha, em virtude da importância deste composto no seu sistema de transporte bem como no de outras leguminosas... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Resumo: Foram estudados os efeitos da secagem artificial e de diversas condições de armazenamento na germinação e manutenção de viabilidade de sementes de limão cravo (Citrus reticulata var. austera Hib. -Swingle), respectivamente. A influência de fatores ambientais (temperatura e luz) e dos tegumentos das sementes na germinação foi analisada, bem como as relações entre as mudanças de níveis hormonais endógenos nas diferentes fases do armazenamento com a manutenção ou a queda da viabilidade das sementes. A secagem artificial de sementes causou um pequeno decréscimo inicial de germinação, mas estatisticamente diferente quando comparado com as sementes frescas. Entretanto, com a evolução do período de armazenamento, as sementes secas mantiveram a mesma porcentagem de germinação (em torno de 80%), enquanto que as sementes frescas perderam rapidamente o poder germinativo, que atingiu zero aos 8 meses. Estes resultados foram corroborados por testes de tetrazólio. Através de testes de germinação em condições de laboratório mostrou-se que a secagem das sementes até 6% de umidade, seguida de enlatamento hermético e conservação sob temperatura de '4 GRAUS'C foi a melhor das condições de armazenamento testadas, resultado este confirmado posteriormente em condições de campo e em testes de tetrazólio. Sob temperaturas constantes de 5, 10, 40 e '45 GRAUS'C não ocorreu a germinação de semente... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Resumo: O recurso do treinamento intensificado é comum no esporte de alto rendimento, uma vez que pode levar ao aumento no desempenho previamente atingido em um curto espaço de tempo. Esse treino pode ser manipulado através de aumentos substanciais nas cargas, duração, freqüência, intensidade e, principalmente, pela redução do período regenerativo. Por outro lado, já está bem documentado que essa intervenção pode resultar em perda do nível de desempenho anteriormente atingido. Embora existam diferentes nomenclaturas para descrever essa perda do desempenho em indivíduos previamente bem adaptados, utilizamos aqui a posição adotada em 2006 pelo Colégio Europeu de Ciências do Esporte, que denominou o período de treinamento intensificado de overtraining (OT) e os possíveis estados, de manutenção ou eventual melhora no desempenho de Overreaching Funcional (FOR), e de queda no desempenho de Overreaching Não Funcional (NFOR). Devido às limitações de se estudar o OT em seres humanos, desenvolvemos um protocolo em esteira para modelo animal (ratos Wistar) que gera os estados FOR e NFOR após um período de adaptação ao treinamento (TR). O objetivo do presente trabalho foi verificar qual a relação entre o estado do miocárdio e o nível de desempenho dos animais frente ao protocolo de OT. Para tanto, determinamos indiretamente a presença ou não de estresse oxidativo (EO) bem como alterações teciduais e eletrofisiológicas que pudessem mostrar prejuízo da função cardíaca. Assim, além do acompanhamento longitudinal do eletrocardiograma (ECG), ao término do protocolo foi feita análise histológica (Hematoxilina-Eosina/Sirius Red); quantificação de células apoptóticas (TUNEL - marcador de apoptose), dosagem de TBARS (marcador de peroxidação lipídica), e atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa redutase (GR). Nossos resultados mostraram que não houve alterações nos parâmetros eletrocardiográficos ao longo do protocolo, nem nas análises histológicas e na dosagem de TBARS realizadas em cada um dos grupos de animais. A GR apresentou aumento significativo nos animais que treinaram (TR, FOR e NFOR) frente ao grupo controle (CO) enquanto a SOD, CAT e apoptose aumentaram de forma significativa somente no grupo NFOR. A manutenção dos níveis de TBARS e a ausência de alterações morfológicas ou eletrofisiológicas que poderiam comprometer a atividade contrátil do coração sugerem que o miocárdio adaptou-se positivamente ao treinamento mesmo no grupo NFOR. Todavia, o aumento da apoptose e das enzimas SOD e CAT no NFOR, sugerem uma maior produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) neste grupo, que estaria mais susceptível a instalação de um quadro de estresse oxidativo. Portanto, apesar da queda de desempenho do grupo NFOR estar associada a outros fatores que não apenas o comprometimento do miocárdio, nossos dados apontam que a atividade física regular com alto volume deve ser conduzida com cautela e com avaliação periódica da função cardíaca

Resumo: O efluxo de 'CA POT. 2+' mitocondrial é estimulado pelo estado oxidado de NADP mitocondrial. Em mitocondria não energizada uma completa oxidação de NAD e NADP pode ser induzida por oxaloacetato ou acetoacetato enquanto que em mitocondria energizada estes substratos oxidam exclusivamente NAD. Esta diferença deve-se ao efeito do potencial protônico de membrana gerado pela respiração ou hidrólise de ATP sobre a constante de equilíbrio da reação catalizada pela enzima NAD(P)-transidrogenase. No último caso o efluxo de 'CA POT. 2+' não é estimulado pelos referidos oxidantes. O efluxo de 'CA POT. 2+' mitocondrial induzido por 'NADP POT. +' é necessariamente associado ao efluxo de 'MG POT. 2+' e nucleotídeos de adenina endógenos mediado pelo transportador especifico uma vez que "bongkrekato", inibidor especifico deste transportador, inibe tanto o efluxo de nucleotídeos de adenina como de 'CA POT. 2+'. A diminuição no título de grupamentos -SH de membrana mitocondrial que acompanha a oxidação de NADP, bem como a similaridade entre as características do efluxo de 'CA POT. 2+' induzida por 'NADP POT. +' e diamida (oxidante de grupos -SH) indicam o envolvimento destes no mecanismo. Ambos, oxidação de NADP e diamida induzem aumento de pequena amplitude no volume mitocondrial que também é sensível a "bongkrekato". Estes resultados indicam que o efluxo de 'CA POT. 2+' mitocondrial induzido por 'NADP POT. +' está associado a alterações conformacionais da mitocondria resultantes da oxidação de grupamentos -SH da membrana em equilíbrio de óxido-redução com NADP através do sistema enzimático glutationa redutase/glutationa peroxidase