Resumo: O distúrbio da diferenciação do sexo ovário-testicular (DDS OT) é uma condição rara caracterizada pela presença de tecido ovariano e testicular no mesmo indivíduo, em gônadas separadas ou na mesma gônada (ovotestis). O cariótipo pode ser 46,XX (o mais frequente), 46,XY, ou conter anomalias de cromossomos sexuais. A diferenciação testicular depende normalmente da expressão do gene SRY, presente em Yp, que ativa o gene SOX9; este, por sua vez, regula a cascata de genes envolvidos na diferenciação testicular. A diferenciação ovariana depende da ausência do gene SRY e da expressão de genes pró-ovarianos, como FOXL2, que inibem a expressão do SOX9. A etiologia do DDS-OT em indivíduos com cariótipo 46,XX ou 46,XY ainda é desconhecida na maioria dos casos. Poucos estudos buscaram detectar mosaicismo ou quimerismo oculto nas gônadas desses pacientes. É escasso o conhecimento sobre a expressão dos genes SRY, SOX9 e FOXL2 no tecido gonadal nesses casos. Ademais, a investigação de desequilíbrios genômicos usando a técnica de análise cromossômica por microarray (CMA) têm permito a caracterização de genes associados a casos de DDS. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de outras linhagens celulares (mosaicismo ou quimerismo oculto) em tecido gonadal através da técnica de Hibridação in situ fluorescente (FISH) e reação em cadeia da polimerase (PCR), analisar a localização das proteínas SRY, SOX9 e FOXL2 através de imunoistoquímica e detectar a presença de deleções e duplicações através de CMA em pacientes com DDS-OT 46,XX ou 46,XY. Trata-se de um estudo retrospectivo em que oito pacientes com DDS OT e cariótipo normal (46,XX ou 46,XY) atendidos no GIEDDS nos últimos 27 anos preencheram os critérios de inclusão. Por se tratar de um estudo retrospectivo, a qualidade do tecido gonadal incluído em parafina impossibilitou a investigação de outras linhagens celulares (mosaicismo ou quimerismo oculto) nos pacientes estudados. Apenas a expressão de FOXL2 ocorreu conforme esperado, ocorrendo marcações positivas apenas em folículos ovarianos. A expressão de SOX9 e SRY foi observada em túbulos seminíferos e em folículos ovarianos em alguns casos, sendo necessária a validação por outra técnica para confirmação do resultado. A técnica de CMA possibilitou a detecção de deleção em 9p e duplicação em 18p em um paciente XY e duplicação em Xq27.1 em um paciente XX. Os resultados do estudo demonstram a importância do uso de CMA no diagnóstico etiológico em casos de DDS-OT e a necessidade de estabelecer protocolos de pesquisa para armazenamento de tecido gonadal a partir de biópsias de pacientes com DDS para estudos genéticos prospectivos Ver menos

Abstract: Ovotesticular disorder of sexual development (OT-DSD) is a rare condition characterized by the presence of ovarian and testicular tissue in the same individual, in separate gonads or in the same gonad (ovotestis). The karyotype may be 46,XX (most common), 46,XY, or contain sex chromosome abnormalities. Testicular differentiation normally depends on the expression of the SRY gene, present in Yp, which activates the SOX9 gene, which is responsible for regulating the cascade of genes involved in testicular differentiation. Ovarian differentiation depends on the absence of the SRY gene and the expression of pro-ovarian genes, such as FOXL2, which inhibits SOX9 expression. The etiology of OT-DSD in individuals with 46,XX or 46,XY karyotype is still unknown in most cases. Few studies have detected the presence of mosaicism or occult chimerism in the gonads of patients with OT-DSD. There is also little knowledge about the expression of SRY, SOX9 and FOXL2 genes in the gonadal tissue in these cases. Furthermore, the investigation of genomic imbalances using the chromosomal analysis by microarray (CMA) technique has enable the characterization of genes associated with DDS cases. Thus, the aim of this work was to investigate the presence of other cell lines (mosaicism or occult chimerism) in gonadal tissue through the technique of Fluorescent in situ Hybridization (FISH) and polymerase chain reaction (PCR), analyze the localization of SRY, SOX9 and FOXL2 proteins through immunohistochemistry and detect the presence of deletions and duplications through CMA in patients with DDS-OT 46,XX or 46,XY. This is a retrospective study with eight OT-DSD patients and normal karyotype (46,XX or 46,XY) attended at GIEDDS in the last 27 years. As this was a retrospective study, the quality of the gonad tissue embedded in paraffin made it impossible to investigate other cell lines (mosaicism or occult chimerism) in the patients studied. Only FOXL2 expression occurred as expected, with positive markings occurring only in ovarian follicles. The expression of SOX9 and SRY was observed in seminiferous tubules and in ovarian follicles in some cases, requiring validation by another technique to confirm the result. The CMA technique enabled the detection of 9p deletion and 18p duplication in an XY patient and Xq27.1 duplication in an XX patient. Our results demonstrate the importance of using CMA in the etiological diagnosis of DDS-OT cases and the need to establish research protocols for storage of gonadal tissue from biopsies of patients with DDS for prospective genetic studies Ver menos