Resumo: O estresse oxidativo é um dos mecanismos subjacentes mais importantes na patogênese da proteinúria em pacientes diabéticos. A epigalocatequina galato é uma substância que se mostrou efetiva na redução do estresse oxidativo e da doença renal em estudos pré-clínicos. Além disso, a redução na atividade da AMPK foi proposta como o ponto crítico na fibrose renal em modelos experimentais de DRC. A metformina foi capaz de melhorar a doença renal e reduzir a fibrose em estudos pré- clínicos de DRC, quando administrada antes ou no momento do insulto renal. Na presente série de estudos, propusemos investigar o efeito do polifenon E (epigalocatequina galato) na albuminúria de pacientes diabéticos com nefropatia e possível mecanismo envolvido. Investigamos, ainda, se a metformina é capaz de reduzir a progressão da DRC já estabelecida em ratos submetidos à nefrectomia subtotal 5/6 (Nx) e se tal efeito está associado à ativação da AMPK. Os estudos foram descritos nos seguintes artigos publicados: Artigo 1- Os pacientes foram randomizados para 2 grupos: polifenon E (contendo 800 mg de epigalocatequina galato) e placebo. Após 12 semanas de tratamento, o polifenon E reduziu a albuminúria em 41%, enquanto no grupo placebo foi observado aumento de 2% (p = 0,019). A apoptose dos podócitos (p = 0,001) e a permeabilidade da albumina in vitro (p < 0,001) foram maiores em podócitos humanos imortalizados expostos ao plasma de indivíduos diabéticos em comparação aos podócitos tratados com plasma de indivíduos normais. Neste artigo, concluímos que a administração de polifenon E reduz a albuminúria em pacientes diabéticos com dose máxima recomendada de inibidores do sistema renina- angiotensina (SRA). A ativação da via Wnt e a consequente redução na apoptose dos podócitos pode ter contribuído para tal efeito. Artigo 2 - Ratos machos Munich-Wistar adultos foram submetidos às cirurgias de nefrectomia subtotal 5/6 (Nx) ou sham. Trinta dias após a cirurgia, os ratos Nx que apresentavam pressão arterial sistólica > 170 mmHg e níveis de albuminúria >40mg/24h foram randomizados para 3 grupos: Sham, Nx e Nx + metformin (300mg/Kg/dia). Após 60 dias de tratamento, não observamos diferenças nos parâmetros da doença renal entre os ratos tratados com metformina e os não tratados. No entanto, após 120 dias, os ratos Nx tratados com metformina apresentaram reduções significativas nos níveis de albuminúria e em marcadores de fibrose renal. Esses efeitos foram independentes de quaisquer outros efeitos sobre a pressão arterial ou a glicemia. O tratamento com metformina também foi capaz de ativar a AMPK renal e, portanto, melhorar a biogênese mitocondrial. Concluímos que a metformina pode interromper a progressão da doença renal estabelecida no modelo Nx, provavelmente, via ativação da AMPK. Em resumo, a presente tese fornece evidências de que o Polifenon E, associado aos inibidores do SRA, é capaz de reduzir a albuminúria de pacientes com nefropatia diabética e de que tal efeito pode ser devido à ativação da via Wnt, com consequente redução na apoptose de podócitos. Adicionalmente, a metformina reduz a fibrose renal em ratos Nx e doença renal estabelecida, possivelmente pela ativação da AMPK Ver menos

Abstract: Oxidative stress is one of the most important underlying mechanisms in the pathogenesis of proteinuria in diabetic patients. The epigallocatechin gallate is a substance that has been shown to be effective in reducing oxidative stress and kidney disease in preclinical studies. In addition, the reduction in AMPK activity has been proposed as a mechanism involved in renal fibrosis in experimental models of chronic kidney disease (CKD). Metformin was able to improve kidney disease and reduce fibrosis in preclinical studies of CKD, when administered before or at the time of renal insult. In the present series of studies, we proposed to investigate the effect of polyphenon E (epigallocatechin gallate) on albuminuria in diabetic patients with nephropathy and to investigate the possible mechanism involved. We furthermore investigated whether metformin is able to reduce the progression of CKD already established in rats submitted to 5/6 subtotal nephrectomy (Nx) and whether this effect is associated with AMPK activation. The studies were described in the following published articles: Article 1 - Patients were randomized to two groups: polyphenon E (containing 800 mg of epigallocatechin gallate) or placebo. After 12 weeks of treatment, polyphenon E reduced albuminuria by 41%, while in the placebo group an increase of 2% was observed (p = 0,019). Apoptosis of podocytes (p = 0,001) and permeability to albumin in vitro (p < 0,001) were greater in immortalized human podocytes exposed to the plasma of diabetic individuals compared to podocytes treated with plasma from normal individuals. In this article, we concluded that the administration of polyphenon E reduces albuminuria in diabetic patients who receive the maximum recommended dose of renin-angiotensin system inhibitors. The activation of the Wnt pathway and the consequent reduction in apoptosis of podocytes may have contributed to thiseffect. Article 2 - Adult male Munich-Wistar rats underwent 5/6 subtotal nephrectomy (Nx) or sham surgery. Thirty days after surgery, Nx rats with systolic blood pressure> 170 mmHg and albuminuria levels> 40 mg / 24 h were randomized into three groups: Sham, Nx and Nx + metformin (300mg/Kg/day). After 60 days of treatment, we found no differences in renal disease parameters between rats treated with metformin and untreated rats. However, after 120 days, Nx rats treated with metformin showed significant reductions in albuminuria levels and in renal fibrosis markers. These effects were independent of any other effects on blood pressure or blood glucose. In addition, metformin treatment was also able to activate renal AMPK and therefore improve mitochondrial biogenesis. We conclude that metformin can halt the progression of kidney disease established in the Nx model, probably via AMPK activation. In summary, the present thesis provides evidence that Polyphenon E associated with RAS inhibitors is able to reduce albuminuria in patients with diabetic nephropathy and this effect may be secondary to the activation of the Wnt pathway with a consequent reduction in podocyte apoptosis. Additionally, metformin reduces renal fibrosis in Nx rats and established kidney disease, possibly by activating AMPK Ver menos