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Type: Artigo
Title: Methodological variants contributing to detection of abnormal DNA-protein complexes in bull spermatozoa
Author: Beletti, Marcelo Emilio
Mello, Maria Luiza S.
Abstract: Efficient, simple and inexpensive methods for detecting abnormal DNA-protein complexes in sperm cells present in the semen of bulls with different fertility characteristics were tested cytochemically. The methods are based on nuclear metachromasy induced after toluidine blue staining and on different fluorescence emissions after acridine orange staining of spermatozoal nuclei bearing abnormal DNA-protein complexes. Treatments with 2-mercaptoethanol plus urea and NaCl, with SSC solution and with 4 N HCl were found to be the most efficient for inducing nuclear metachromasy. The 4 N HCl treatment was found to be the least efficient among these, though the simplest and cheapest. With the methods employing acridine orange as the dye solution, the frequency of sperm cell nuclei exhibiting high fluorescence intensity resembled that of the metachromatic nuclei highlighted with toluidine blue staining, if preceded by treatment with 4 N HCl or 2% citric acid. Although the animals with morphological defects associated with low fertility rates generally exhibited a higher frequency of metachromatic sperm cell nuclei and greater acridine orange (AO) fluorescence intensity, this could not be taken as a precise rule.
metadata.dc.description.abstractalternative: Esfregaços de sêmen de touros com níveis conhecidos de fertilidade foram submetidos a variantes metodológicas que visavam à identificação de anomalias no complexo DNA-proteína, baseando-se na metacromasia induzida após coloração com azul de toluidina (TB) e na diferença em fluorescência após coloração com o alaranjado de acridina (AO). Buscou-se o estabelecimento de métodos simples, eficazes e de baixo custo para a evidenciação de espermatozóides portadores de complexos DNA-proteína anômalos, no sêmen de touros com diferentes características de fertilidade. Dos métodos testados, aqueles envolvendo pré-tratamento com 2-mercaptoethanol mais uréia e NaCl, com solução SSC e com HCI 4 N mostraram-se os mais eficientes na evidenciação da metacromasia induzida, sendo os dois primeiros mais eficazes que o último. Contudo, este mostrou-se mais simples e menos oneroso que os primeiros. Nos preparados em que se realizou coloração com AO, a freqüência de núcleos de espermatozóides com maior intensidade de fluorescência foi semelhante à de núcleos metacromáticos (TB), desde que os esfregaços fossem pré-tratados com HCI4 N ou ácido cítrico a 2%. De maneira geral os animais com problemas de fertilidade apresentaram maior freqüência de espermatozóides meta cromáticos e com maior intensidade de fluorescência com o AO, porém nem todos os animais se comportaram segundo esta regra.
Subject: Touro - Espermatozoides
Análise do sêmen - Métodos
Fertilidade
DNA
Proteínas
Corantes
Country: Brasil
Editor: Sociedade Brasileira de Genética
Citation: Brazilian Journal Of Genetics. Soc Brasil Genetica, v. 19, n. 1, n. 97, n. 103, 1996.
Rights: fechado
Date Issue: 1996
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