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Type: TESE
Degree Level: Doutorado
Title: Extração de pró-insulina humana recombinante produzida em sementes de milho trangênico
Author: Farinas, Cristiane Sanchez
Advisor: Miranda, Everson Alves, 1959-
Abstract: Resumo: Bioprodutos de aplicação fannacêutica têm sido produzidos em sistemas transgênicos diversos, incluindo células de animais, bactérias e leveduras. No futuro, é esperado que a demanda por novas proteínas terapêuticas cresça substancialmente, sendo que o uso de plantas como bioITeatores tem se mostrado como uma das alternativas economicamente mais atraentes para a produção de proteínas recombinantes em larga escala. O objetivo deste trabalho foi estudar o processo de extração da pró-insulina humana recombinante produzida no endosperma de milho transgênico. Neste contexto, avaliaram-se os extratos aquosos de seis variedades de milhos comerciais quanto às epropriedades relacionadas purificação de à recuperação bioprodutos (RPB) ? concentração componentes nativos do milho de (carboidratos. compostos fenólicos e proteínas), taxa de filtração e teor de lipídeos - e realizou-se a seleção e otimização das variáveis operacionais relevantes na extração da pró-insulina em conjunto com a rninimização dos componentes nativos do milho. A análise das superfícies de resposta, geradas a partir do planejamento experimental, e do teste de Tukey indicou que a condição õtima para a extração de pró-insulina, utilizando tampão bicarbonato de sódio 50 rnM pH 10,0 e DTT 5 mM. é aquela na qual a razão volume:massa (v:m) é de 10:1 e a temperatura é de 25°C. Esta condição. em um tempo de extração de 2h e agitação a 500 rprn, é a indicada como ótima para a extração da pró-insulina humana recombinante do milho transgênico. Os valores máximos de concentração de pró-insulina obtidos foram 20,72 j.1g/rnl ou 0,45% da proteína total solúvel. Como conclusões gerais, constatou -se que a escolha da variedade de milho comercial influenciou a complexidade do extrato; a presença do agente redutor no tampão de extração foi importante na solubilização da pró-insulina; a extração de pró-insulina foi mais eficiente em tampão alcalino em relação ao tampão alcoólico e, finalmente, as variáveis de processo que mais influenciaram a extração foram a temperatura e a razão v:m

Abstract: Biopharmaceutical products have been produced by different transgeníc systems such as animal cells, bacteria and yeasts. In the future, a substantial increase iTI the demand for new therapeutic proteins is expected and the use of plants as bioreactors is arising as an alternative system for large-scale production of recombinant proteíns. The purpose of the present work was to study the extraction of recombinant human proinsulin from transgenic maize endosperm. Aqueous extracts from six commercial maize varieties were evaluated in terms of dO rrlstream processing parameters - concentration af native components (carbohydrates, phenolíc compounds and proteíns), filtration flux and lipids content - and a selection and optimization of operational variables was canied out in conjunction ith minimization of the extraction of maize native components. Analysis of response surlace plots and Tukey test both indicated mat me optinn.un condition for proinsulin extraction (using 50 mM sodium carbonate buffer at pH 10.0 and 5 mM D1T) was at volume:mass (v:m) ratio of 10:1 and temperature of 25°C. 111is condition, at an extraction time of 2h and 500 rpm of agitation, was me optimum condition for proinsulin extraction from transgenic maize. The maximum proinsulin concentration value found was 20.72 J.,lg/ml or 0.45% of the total soluble protein. As general conclusions, we noted that the choice of commercial maize wiU have an influence on extract quality; the presence of the reducing agent was crucial to proinsulin solubilization; proinsulin extraction was more efficient for an alkaline buffer than for alcoholic buffers, and the variables that had a more important influence on the extraction were the temperature and the v:rn ratio
Subject: Extração (Química)
Insulina
Plantas transgênicas
DNA recombinante
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: FARINAS, Cristiane Sanchez. Extração de pró-insulina humana recombinante produzida em sementes de milho trangênico. 2004. 166 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP.
Date Issue: 2004
Appears in Collections:FEQ - Tese e Dissertação

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