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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Purificação e caracterização da LmTah1 recombinante de Leishmania major, uma co-chaperona TPR da Hsp90
Title Alternative: Purification and characterization of recombinant LmTah1 from Leishmania major, a TPR co-chaperone of Hsp90
Author: Araujo, Sara Aparecida, 1988-
Advisor: Ramos, Carlos Henrique Inacio, 1967-
Abstract: Resumo: Chaperonas moleculares compreendem famílias de proteínas que auxiliam no enovelamento e na manutenção da homeostase proteica. Dentre estas famílias está a ubíqua Hsp90 que atua principalmente nos últimos estágios do enovelamento, auxiliando na ativação e na translocação de proteínas regulatórias e sinalizadoras. Tais funções são executadas principalmente com a cooperação de proteínas parceiras conhecidas como "co-chaperonas". O sofisticado complexo R2TP consiste nas proteínas Rvb1, Rvb2, Pih1 e Tah1, esta última descrita como uma co-chaperona da Hsp90. Este complexo atua sobre vias essenciais para a sobrevivência da célula como a estabilização de proteínas fosfatidilinositol-3-quinases (PIKKs), montagem do BOX C/D snoRNPs, RNA polymerase II e reparo do DNA. A cochaperona Tah1 é uma proteína que possui um motivo TPR no domínio N-terminal responsável pela interação com o motivo MEEVD no C-terminal da Hsp90. Evidências indicam que a Tah1 é essencial para diversas funções, entre elas viabilidade celular, biogênese e transcrição gênica. Este é o primeiro estudo de Tah1 em protozoários do gênero Leishmania spp, agente causador da doença de leishmaniose, uma doença tropical negligenciada que afeta milhares de pessoas principalmente em países subdesenvolvidos. Neste trabalho caracterizamos a co-chaperona Tah1 de Leishmania major, denominada de LmTah1. O gene da LmTah1 foi expresso em Escherichia coli BL21(DE3) e a proteína foi obtida na forma solúvel. A proteína foi isolada e purificada através dos passos de cromatografia por afinidade e exclusão molecular e obteve-se alto grau de pureza (>95%). Análises espectroscópicas por dicroísmo circular e fluorescência mostraram que a proteína purificada foi produzida enovelada com cerca de 40% de hélice-alfa e estável, mantendo sua estrutura secundária até 42°C. Medidas hidrodinâmicas determinaram a massa molecular, o coeficiente de difusão e o raio de Stokes da proteína em solução, indicando que LmTah1 é predominantemente monomérica e tem formato alongado em solução com massa molecular de 57,1 kDa

Abstract: Molecular chaperones comprise families of proteins that aid in protein folding and thus in the maintenance of protein homeostasis. Among these families is the ubiquitous Hsp90 that acts mainly in the last stages of folding, aiding in the activation and translocation of regulatory and signaling proteins. Such functions are performed primarily with the cooperation of partner proteins known as "co-chaperones". The sophisticated R2TP complex consists of the Rvb1, Rvb2, Pih1 and Tah1 proteins, the latter described as a Hsp90 co-chaperone. This complex acts on pathways essential for cell survival such as the stabilization of phosphatidylinositol-3-kinase (PIKKs) proteins, assembly of BOX C/D snoRNPs, RNA polymerase II and DNA repair. The co-chaperone Tah1 has an TPR motif in its N-terminal domain responsible for the interaction with the MEEVD motif at the C-terminal of Hsp90. Previous studies indicate that Tah1 is essential for several functions, including cell viability, biogenesis and gene transcription. This is the first study of Tah1 in protozoa of the genus Leishmania spp, the causative agent of leishmaniasis disease, a neglected tropical disease that affects thousands of people mainly in underdeveloped countries. In this work we characterize the co-chaperone Tah1 of Leishmania major, named LmTah1. The LmTah1 gene was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) and the protein was obtained in soluble form. The protein was isolated and purified by affinity and molecular exclusion chromatography steps and obtained with high purity (> 95%). Spectroscopic analyzes by circular dichroism and fluorescence showed that the purified protein was produced folded with about 40% of alfa-helix and stable, maintaining its secondary structure up to 42°C. Hydrodynamic measurements determined the molecular mass, the diffusion coefficient and the Stokes' radius of the protein in solution, indicating that LmTah1 is predominantly monomeric with a molecular weight of 57.1 kDa and has an elongated form
Subject: Complexo R2TP
Chaperonas moleculares
Co-chaperonas
Leishmania major
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: ARAUJO, Sara Aparecida. Purificação e caracterização da LmTah1 recombinante de Leishmania major, uma co-chaperona TPR da Hsp90. 2019. 1 recurso online ( 77 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/355130. Acesso em: 2 Feb. 2021.
Date Issue: 2019
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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