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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Avaliação funcional da proteína ligante de ácidos graxos tipo 4 (FABP4) e modulação via PPAR-gama na infecção por Leishmania amazonensis
Title Alternative: Functional evaluation of fatty acid-binding protein 4 (FABP4) and modulation by PPAR-gamma in Leishmania amazonensis
Author: Piffer, Amanda de Barros, 1990-
Advisor: Miguel, Danilo Ciccone, 1984-
Abstract: Resumo: Formas amastigotas do gênero Leishmania parasitam células do sistema fagocítico mononuclear dividindo-se por fissão binária em vacúolos parasitóforos. Atualmente, pouco se compreende sobre os mecanismos moleculares que controlam o metabolismo de Leishmania nestas organelas, tanto sob o ponto de vista de biossíntese de macromoléculas como do controle metabólico da célula hospedeira pelo parasito. Estudos preliminares de análise transcriptômica mostram que há aumento dos níveis de transcritos de FABP4 (fatty acid binding protein 4) em macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis por 48h. Por serem pequenas proteínas intracelulares as FABPs acessam o núcleo celular em determinadas condições fisiológicas atuando como transportadoras de ácidos graxos ligantes de fatores de transcrição, como os receptores ativados por proliferador de peroxissomo (por ex. PPAR-gama), sendo as FABPs do tipo 4 responsáveis pelo transporte de ácidos graxos para diferentes compartimentos celulares tanto em macrófagos como adipócitos. Com base nas propriedades biológicas descritas para a FABP4, além do fato de formas amastigotas dependerem do metabolismo de ácidos graxos para biossíntese de aminoácidos, especula-se que a FABP4 macrofágica possa desempenhar função importante na homeostase de lipídios na célula infectada durante o processo de infecção por Leishmania. Assim, pretendeu-se investigar neste projeto o papel da FABP4 a partir de ensaios de infecção in vitro em macrófagos na presença de inibidor específico para FABP4 bem como com reduzida expressão do gene da FABP4, a partir de interferência por RNA. Somado a isso, investigou-se a participação de PPAR-gama, que sabidamente interage com FABP4, ao longo de infecções por L. (L.) amazonensis in vitro. Com diferentes técnicas foi possível validar a influência de ambas as proteínas no estabelecimento e sobrevivência destes parasitos. Estudos in vivo foram conduzidos para avaliação do papel do PPAR-gama na evolução da lesão causada por L. (L.) amazonensis em camundongos C57BL/6 nocauteados para esta proteína, sugerindo que com inóculo reduzido de parasitos há retardo no aumento de lesões entre a 6a. e 8a. semana na ausência de PPAR-gama. Resumidamente, embora não tenha sido possível elucidar completamente a relação entre tais componentes celulares durante este evento, confirmamos que alterações nesse equilíbrio interferem na capacidade infectiva de L. (L.) amazonensis. Com isso, tanto FABP4 quanto o PPAR-gama apresentam relativa importância durante o processo de infecção in vitro

Abstract: Amastigote forms of the genus Leishmania parasitize cells of the mononuclear phagocytic system dividing by binary fission within parasitophorous vacuoles. Currently, little is understood about the molecular mechanisms that control Leishmania metabolism in these organelles, both from macromolecule biosynthesis and the host cell metabolic control by the parasite aspects. Preliminary transcriptomic analysis studies showed an increase in FABP4 (fatty acid-binding protein 4) transcripts in macrophages infected with L. (L.) amazonensis for 48h. Because they are small intracellular proteins, FABPs access the cell nucleus under certain physiological conditions carrying fatty acids to transcription factors, such as peroxisome proliferator-activated receptors (e.g. PPAR-gamma). FABP type 4 is responsible for the transport of fatty acids to different cell compartments in both macrophages and adipocytes. Based on the biological properties described for FABP4, in addition to the fact that amastigote forms depend on fatty acid metabolism for amino acid biosynthesis, it is speculated that macrophagic FABP4 may play an important role in lipid homeostasis in the infected cell during the infection process by Leishmania. Thus, it was intended to investigate in this project the role of FABP4 in in vitro infection assays using macrophages in the presence of FABP4-specific inhibitor as well as with reduced expression of the FABP4 gene, via RNA interference. In addition, the participation of PPAR-gamma, which is known to interact with FABP4, was investigated L. (L.) amazonensis infections in vitro. With different techniques it was possible to validate the influence of both proteins on the establishment and survival of these parasites. In vivo studies were conducted to evaluate the role of PPAR-gamma in the lesion evolution caused by L. (L.) amazonensis in C57BL/6 mice knocked out for this protein, suggesting that with reduced parasite inoculation, there is a delay during lesion progression between the 6th and 8th week in the absence of PPAR-gamma. Briefly, although it was not possible to fully elucidate the relationship between such cellular components during this event, we confirm that changes in this balance interferes with the infectious capacity of L. (L.) amazonensis. Thus, both FABP4 and PPAR-gamma are relatively important during the in vitro infection process
Subject: Leishmania
Macrófagos
PPAR gama
Proteína de ligação a ácido graxo 4
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: PIFFER, Amanda de Barros. Avaliação funcional da proteína ligante de ácidos graxos tipo 4 (FABP4) e modulação via PPAR-gama na infecção por Leishmania amazonensis. 2019. 1 recurso online ( 136 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.
Date Issue: 2019
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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