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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Avaliação da biocompatibilidade entre células- tronco mesenquimais estromais derivadas de tecido adiposo e biomaterial derivado de Poli (L- ácido lático) : regeneração de traqueia em modelo animal
Title Alternative: Assessment of poly (L- lactic acid) scaffolds biocompatibility using adipose tissue derived mesenchymal stromal stem cells : tracheal regeneration in animal model
Author: Manzini, Bruna Maria, 1981-
Advisor: Luzo, Ângela Cristina Malheiros, 1958-
Abstract: Resumo: Fístulas traqueais relacionadas à traqueostomia, lesões traumáticas agudas ou no coto brônquico, após ressecções pulmonares, dentre outras intercorrências do tratamento podem lesar as vias aéreas. O tratamento envolve complexos procedimentos, diminuindo a qualidade de vida e elevando morbi-mortalidade. A engenharia de tecidos pode ser efetiva por meio da utilização de biocurativo (BC), junção de biomaterial e células tronco na área lesionada. As células-tronco mesenquimais estromais (MSCs) possuem capacidade imunomodulatória, diferenciam-se em várias linhagens e são obtidas de diversas fontes, como tecido adiposo (TA). Biopolímeros sintéticos, como poli (L- ácido láctico) (PLLA), são biodegradáveis e biocompatíveis, podendo ser implantados in vivo, sem necessidade de remoção. Analisamos a biocompatibilidade entre MSCs-TA e PLLA na produção de BC que foi implantado em modelo suíno, submetido à ressecção traqueal parcial, avaliando sua capacidade regenerativa. O PLLA foi eletrofiado e as fibras caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e Calorimetria de varredura diferencial (DSC). O TA foi digerido (colagenase), cultivado (DMEM baixa glicose e SBF) e as células aderentes caracterizadas em MSCs (citometria de fluxo, alterações morfológicas e capacidade de diferenciação para linhagem mesodermal). A estabilidade gênica foi analisada por atividade da enzima telomerase e cariótipo. MSCs-TA foram cultivadas nas fibras e a biocompatibilidade analisada por: adesão celular (MEV), viabilidade celular (LIVE/DEAD®) e citotoxicidade (MTT). Os animais foram divididos em 4 grupos: controle negativo (CN), sham, biocurativo, biocurativo e fio de sutura com MSCs-TA (fio/MSCs-TA). Após 30 dias, a regeneração foi analisada por HE, tricrômico de masson e imunohistoquímica para: Col I / III, MMP2, MMP9, VEGF e IL-10. As fibras do biopolímero foram homogêneas e estáveis. As células aderentes foram caracterizadas como MSCs, sendo estáveis geneticamente, aderiram no BC, mantendo a viabilidade. A imunohistoquímica demonstrou presença de processo inflamatório intenso no grupo Sham, quando comparado ao CN. Nos grupos que receberam o biocurativo, as fibras de colágeno foram restauradas e o processo inflamatório imunomodulado pelas MSCs-TA. O biocurativo associado ao fio/MSCs-TA proporcionou melhor regeneração, sendo similar ao CN. Conclusão: O BC demonstrou ser capaz de regenerar o tecido traqueal lesado

Abstract: Tracheal fistulas due to tracheostomy, acute trauma or bronchial stump following pulmonary resections, among other complications, may happen during the airway diseases¿ surgical treatment injuring the respiratory tract. The treatment involves complex procedures decreasing life quality and increasing morbi-mortality. Tissue engineering can be effective by placing a bio-curative, biomaterial associated with stem cells (BC), in the injured area. Mesenchymal stromal/ stem cells (MSCs) have immunomodulatory capacity, differentiate into several lineages and is obtained from several sources such as adipose tissue (AT). Synthetic biopolymers, such as poly (L-lactic acid) (PLLA), are biodegradable and biocompatible being implanted in vivo with no need for removal. We analyzed the biocompatibility between MSCs-TA and PLLA for BC production, which was implanted in a swine model submitted to partial tracheal resection due to evaluate the regenerative process. The PLLA was processed by electrospinning and the fibers characterized by scanning electron microscopy (SEM) and differential scanning calorimetry (DSC). AT was digested (collagenase), cultured (DMEM low glucose and SBF) and adherent cells were characterized as MSCs (flow cytometry, morphological changes and differentiation capacity for mesodermal lineages). Gene stability was analyzed by the telomerase enzyme activity and karyotype. AT-MSCs were cultured in the fibers and biocompatibility analyzed by: cell adhesion (SEM), cell viability (LIVE/DEAD®) and cytotoxicity (MTT). The animals were divided into 4 groups: negative control (CN), sham, biocurative, bio-curative and suture filaments with attached AT-MSCs (F/AT-MSCs). After 30 days, the regeneration process was analyzed by HE, trichrome masson and immunohistochemistry for: Col I / III, MMP2, MMP9, VEGF and IL-10. The biopolymer fibers were homogeneous and stable. Adherent cells were characterized as MSCs and were genetically stable. The MSCs- TA adhered on the BC, maintaining viability. The immunohistochemical analysis showed the presence of an intense inflammatory process in the Sham group that did not appear in the CN. The collagen fibers were restored and the inflammatory process was immunomodulated by the AT-MSCs in the bio-curative groups. The association of the bio-curative and F/AT-MSCs improved the regenerative process, being similar to CN. Conclusion: BC were able to regenerate the injured tracheal tissue
Subject: Engenharia tecidual
Bioengenharia
Células mesenquimais estromais
Ácido lático
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: MANZINI, Bruna Maria. Avaliação da biocompatibilidade entre células- tronco mesenquimais estromais derivadas de tecido adiposo e biomaterial derivado de Poli (L- ácido lático): regeneração de traqueia em modelo animal. 2018. 1 recurso online (102 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP.
Date Issue: 2018
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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