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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Regulação de splicing alternativo por quinase em células glioblastoma
Title Alternative: Alternative splicing regulation by kinases in glioblastoma cells
Author: Di Pillo, Fulvia, 1980-
Advisor: Massirer, Katlin Brauer, 1975-
Abstract: Resumo: SRPKs são serina arginina proteínas quinases que reconhecem e fosforilam de forma específica repetições de dipeptídeos arginina (R) e serina (S). Seus principais substratos estão envolvidos na regulação de splicing de pre-mRNA, como por exemplo SRSF1. As SR proteínas são necessárias à formação dos componentes do spliceossoma, sendo SRSF1 especificamente associada com a snRNP U1, que se liga à porção 5¿SS do éxon e que leva a formação do pre-spliceossoma. SRPK1 tem sido mostrado super regulado em diversos tipos de canceres, inclusive em tumores do sistema nervoso, como por exemplo gliomas. Já foi demonstrado na literatura que a redução da expressão de SRPK1 em glioblastomas inibe o crescimento, invasão e migração celular. Com objetivo de pesquisar novos alvos de splicing alternativo ligados a SRPK1 foi usada a estratégia de modular geneticamente essa quinase, em linhagens de glioblastoma, tanto por super-expressão quanto por knockdown com short-hairpin. Após diversos tratamentos dos dados por análises de bioinformática foi gerada uma lista de eventos de splicing alternativo relevantes. Dentre os eventos validados por real time PCR destacam-se os genes MBNL1, RBM39, TAU e MYL6, que tiveram alteração regulada pela modulação de SRPK1 Com este trabalho foi possível achar e validar novos eventos de splicing alternativo relacionados com glioblastoma que são regulados por SRPK1. Dentre eles houve o achado de uma isoforma inédita na literatura, da miosina de cadeia leve MYL6. Foi demonstrado com esta pesquisa que este alvo teve alteração no splicing de forma específica pela quinase SRPK1. Também colhemos evidências que indicam que o éxon alternativamente usado por SRPK1 em MYL6 poder estar relacionado à capacidade de migração celular desta miosina. Em paralelo, através de ensaios de fosfoproteômica foi realizada uma busca inicial por novos substratos de fosforilação em células da linhagem HEK sob tratamento com inibidor químico específico para SRPK1

Abstract: SRPKs are serine arginine protein kinases that recognize and phosphorylate repeats of dipeptides arginine (R) and serine (S). The major substrates are involved in the regulation of pre-mRNA splicing, such as SRSF1. The neurological proteins are related to the formation of spliceosome components, SRSF1 being associated with a snRNP U1, which binds to the 5'SS portion of the exon and leads to pre-spliceosome formation. SRPK1 has been shown to be over-regulated in cancers, including nervous system tumors, such as gliomas. It has already been demonstrated in the literature the reduction of SRPK1 expression in glioblastomas can inhibit cell growth, invasion and migration. In order to investigate new splicing targets linked to SRPK1, the strategy of genetically modulating this kinase in glioblastoma lines was used both for superexpression and knockdown. After several data treatments by bioinformatics analyzes, a list of relevant alternative splicing events was generated. Among the events validated by real time PCR, the genes MBNL1, RBM39, TAU and MYL6 were regulated by the modulation of SRPK1. In this present research it was possible to find and validate new alternative splicing events related to glioblastoma that are regulated by SRPK1. Among them it was possible to find an isoform unpublished in the literature of MYL6, a light chain myosin. It has been demonstrated by this research that this target had alternative splicing specifically by the SRPK1 kinase. We also gather evidence indicating that the exon alternatively used by SRPK1 in MYL6 may be related to the cell migration capacity of this myosin. In parallel, an initial search for new phosphorylation substrates was carried out in phosphoprotein assays in HEK cells under treatment with SRPK1-specific chemical inhibitor
Subject: RNA splicing
Proteínas quinases
RNA
Glioblastoma
Language: Multilíngua
Editor: [s.n.]
Citation: DI PILLO, Fulvia. Regulação de splicing alternativo por quinase em células glioblastoma. 2019. 1 recurso online (193 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.
Date Issue: 2019
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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