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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Avaliação do papel dos eosinófilos nos processos iniciais da vaso-oclusão utilizando camundongos transgênicos para anemia falciforme : participação da via Rho-quinase
Title Alternative: Evaluation of the role of eosinophils in the initial vaso-occlusion process using transgenic mice for sickle cell disease : participation of Rho kinase pathway
Author: Moraes, Athos Rodrigues de, 1993-
Advisor: Penteado, Carla Fernanda Franco
Abstract: Resumo: Na anemia falciforme, os leucócitos possuem um importante papel na fisiopatologia da doença sendo consideradas as células iniciadoras do processo vaso-oclusivo. A vaso-oclusão na anemia falciforme resulta de um processo complexo que envolve diferentes mecanismos e interações dos glóbulos vermelhos, leucócitos, células endoteliais, plaquetas e proteínas plasmáticas. A via da Rho GTPases parece ter um papel importante nos mecanismos moleculares da quimiotaxia, adesão e migração de várias células inflamatórias e pouco se sabe o papel dessas proteínas da via Rho GTPases no rolamento, adesão ao endotélio vascular e extravasamento dos leucócitos. Objetivo desse trabalho foi avaliar in vivo a participação dos eosinófilos no processo de vaso-oclusão na anemia falciforme e o envolvimento da via das Rho GTPases nesse processo na resposta inflamatória induzida por OVA nos animais controles (C57BL/6 J) e camundongos falciformes modelo Townes homozigotos (SS). Os resultados obtidos por microscopia intravital convencional do músculo cremaster dos camundongos mostraram que após 4 horas do desafio com eotaxina foi observado um aumento no número de leucócitos em rolamento e aderidos ao endotélio vascular em todos os grupos sensibilizados investigados, porém, essa inflamação é potencializada quando comparados os animais SS com o grupo controle. Resultados semelhantes foram observados em relação ao extravasamento dos leucócitos. O tratamento com o inibidor específico de Rho GTPase/ROCK, Fasudil, foi capaz de reduzir significativamente tanto o rolamento quando a adesão dos leucócitos ao endotélio vascular do músculo cremaster em todos os grupos, porém foi mais significativamente nos animais falciformes. Em contrapartida à transmigração endotelial, o tratamento com Fasudil foi capaz de reduzir significativamente somente o extravasamento dos leucócitos nos animais SS, não reduzindo nos animais controles. Foi feito microscopia intravital confocal para a diferenciação dos leucócitos totais, observamos que o número de eosinófilos em rolamento e aderidos ao endotélio vascular nos animais controles e SS sensibilizados com OVA foram significativamente maiores quando comparados aos seus respectivos grupos não sensibilizados. No entanto, os parâmetros de adesão e rolamento foram significativamente maiores nos animais falciformes quando comparados com os animais controle. Em relação ao extravasamento transendotelial dos eosinófilos não observamos diferenças significativas entre os grupos não sensibilizados e sensibilizados SS, porém, nos animais controle observamos um aumento significativo de eosinófilos extravasados nos animais sensibilizados em comparação aos não sensibilizados. O tratamento com Fasudil foi capaz de reduziu significativamente o rolamento e adesão dos eosinófilos ao endotélio nos animais do grupo falciforme, além disso o Fasudil reduziu significativamente o extravasamento dos eosinófilos ao endotélio vascular do músculo cremaster nos animais falciformes. Tomados em conjunto, o tratamento com o inibidor de ROCK é capaz de reduzir a interação dos leucócitos e eosinófilos com o endotélio vascular no modelo de inflamação alérgica. Desse modo, sugerimos que inibidores dessa via podem ser novos agentes terapêuticos no tratamento das complicações clínicas da anemia falciforme

Abstract: In sickle cell disease, leukocytes play an important role in the pathophysiology of the disease and are considered the initiating cells of the vaso-occlusive process. Sickle cell disease (SCD) vaso-occlusion results from a complex process involving different mechanisms and interactions of red blood cells, leukocytes, endothelial cells, platelets, and plasma proteins. The Rho GTPases pathway seems to play an important role in the molecular mechanisms of chemotaxis, adhesion and migration of various inflammatory cells and little is known about the role of these Rho GTPases pathways in the rolling, vascular endothelial adhesion and leukocyte extravasation. The objective of this study was to evaluate in vivo the participation of eosinophils in the process of eosinophil-endothelium interaction, and in vaso-occlusion in SCD, besides the involvement of the Rho GTPases pathway in the inflammatory response induced by OVA and challenged with eotaxin in sensitized or not sensitized control animals, and transgenic animals for sickle cell anemia. We used male mice of the C57BL/6 J (control) lineage and sickle cell disease Townes model mice (SS). The results obtained by intravital microscopy of the cremaster muscle of the mice showed that after 4 hours of the challenge with eotaxin it was observed an increase in the number of leucocytes in rolling and adhered to the vascular endothelium in all sensitized groups investigated, however, this inflammation is potentiated when we compare the SS animals to the control group. Similar results were observed in relation to extravasation of leukocytes. Treatment with the specific ROCK inhibitor, Fasudil, was able to significantly reduce the rolling and adhesion of leukocytes to the vascular endothelium of the cremaster muscle in all groups, but was more significant in sickle cells disease group. In contrast to endothelial transmigration, treatment with Fasudil was able to significantly reduce leukocyte extravasation in SS animals, not reducing in control animals. With the objective to evaluate the participation of eosinophils in the initial processes of vaso-occlusion, confocal intravital microscopy was performed for the differentiation of total leukocytes in the cremaster muscle of controls and sickle cells diseases mice in a model of chemokine-induced allergic inflammation. We observed that the number of eosinophils in rolling and adhered to the vascular endothelium in the control and SS animals sensitized with OVA were significantly higher when compared to their respective non sensitized groups. However, adhesion and rolling parameters were significantly higher in sickle animals when compared to control animals. In relation to the transendothelial extravasation of eosinophils, we did not observe significant differences between the non sensitized and sensitized SS groups, however, in the control animals we observed a significant increase of extravasated eosinophils in the sensitized animals compared to the non sensitized animals. Fasudil treatment was able to significantly reduce the rolling and adhesion of eosinophils to the endothelium in animals of the sickle cell disease group, and the specific ROCK inhibitor significantly reduced eosinophil extravasation to the vascular endothelium of the cremaster muscle in sickle cells mice. Taken together, treatment with the ROCK inhibitor is able to reduce the interaction of leukocytes and eosinophils with the vascular endothelium in the allergic inflammation model. Thus, we suggest that inhibitors of this pathway may be new therapeutic agents in the treatment of clinical complications of sickle cell disease
Subject: Anemia falciforme
Eosinófilos
Leucócitos
Quinases associadas a rho
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: MORAES, Athos Rodrigues de. Avaliação do papel dos eosinófilos nos processos iniciais da vaso-oclusão utilizando camundongos transgênicos para anemia falciforme: participação da via Rho-quinase. 2018. 1 recurso online (57 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP.
Date Issue: 2018
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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