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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Caracterização molecular de bactérias isoladas de lagoas salinas do norte do Perú e avaliação do potencial de novas biomoléculas frente a diferentes tipos de células tumorais : Molecular characterization of bacteria the lagoons of northern and evaluation of potential of new biomolecules against different types of tumor cells
Title Alternative: Molecular characterization of bacteria the lagoons of northern and evaluation of potential of new biomolecules against different types of tumor cells
Author: Clavo, Rene Flores, 1986-
Advisor: Fantinatti-Garboggini, Fabiana, 1965-
Abstract: Resumo: As lagoas das Salinas do Norte de Peru são geoformas, caracterizadas por depressões ou subsidências da costa do Oceano Pacífico. São considerados ambientes extremófilos e halofílicos devido à presença de sais na água e no solo, sendo os principais os cloretos, seguidos de sulfetos, bicarbonatos, brometos de magnésio, cálcio e potássio. O cloreto de sódio, comercialmente chamado de sal, é explorado pela população que vive nessas áreas. O presente estudo teve por objetivo isolar, caracterizar taxonomicamente bactérias presentes nas lagoas Salinas de Mórrope e Bayovar e avaliar a atividade antiproliferativa dos extratos brutos e suas frações destes micro-organismos frente a diferentes linhagens tumorais. Foram isoladas 211 bactérias, das quais 166 foram reativadas e caracterizadas morfologicamente e 50 foram identificadas por sequenciamento e análise filogenética do gene RNA ribossomal 16S. A identificação molecular agrupou as bactérias nos gêneros Streptomyces (n=39), Pseudonocardia (n=3), Staphylococcus (n=4), Pseudomonas (n=2) e Bacillus (n=2). Foram obtidos 23 extratos brutos a partir do crescimento microbiano e extração líquido-líquido com o solvente acetato de etila (AcOEt) para os testes antiproliferativos com Sulforodamina B (SRB) frente à linhagens tumorais. Os isolados M-92, B-146, B-81 e B-8 pertencem ao gênero Streptomyces e mostraram resultados promissores frente às células tumorais, U251 glioma; MCF7 mama; NCI-H460 pulmão tipo de não pequenas células. Para a amplificação da escala, fracionamento, isolamento e identificação de substâncias bioativas foram selecionados os isolados M-92, B-146, B-81 crescidos em três diferentes meios de cultura, NB, ISP2 e R2A, destes o meio R2A apresentou os melhores resultados em termos de atividade antiproliferativa, entretanto, o maior rendimento em massa foi obtido do meio ISP2. O extrato bruto e as frações do isolado B-81 foram avaliados por sua potencialidade em relação à atividade antiproliferativa frente a um painel de nove linhagens tumorais, U251 glioma; MCF7 mama; NCI-H460 pulmão tipo de células não pequenas, UACC-62 melanoma, NCI-ADR/RES ovário resistente a múltiplos fármacos, 786-O adenocarcinoma rim, OVCAR-03 ovário, HT-29 cólon e K562 leucemia, e uma não tumoral, HaCaT queratinócito, sendo a fração 3 (MeOH 100%) e a fração 4 (MeOH-AcOEt) as mais ativas. O perfil químico do extrato bruto e das frações do isolado B-81 foi investigado por UHPLC-MS e ESI-MS/MS e as moléculas detectadas por razão massa-carga (m/z) foram desreplicadas sendo possível sugerir a presença de substâncias descritas na literatura como Benastatin A, Phoslactomycin C, Actinomycin A, Asparenomycin A, Azinnomycin B, entre outras; biomoléculas já documentadas, além de novas moléculas que podem pertencer a outras classes químicas de compostos presentes nas actinobactérias do gênero Streptomyces. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que o ambiente halofílico representa uma fonte promissora de microorganismos capazes de produzir novos compostos com potencial antiproliferativo

Abstract: The Salinas lagoons of the North of Peru are geoforms, characterized by depressions or subsidence of the coast of the Pacific Ocean. Saline are considered as extremophilic and halophilic environments due to the presence of salts in water and soil, the main ones being chlorides, followed by sulfides, bicarbonates, bromides of magnesium, calcium and potassium. Sodium chloride, commercially called salt, is exploited by the population living in these areas. The present study aimed to isolate and taxonomically characterize bacteria present in the Salinas de Mórrope and Bayovar lagoons and to evaluate the antiproliferative activity of the crude extracts and their fractions of these microorganisms against different tumoral strains. 211 bacteria were isolated, of which 166 were reactivated and characterized morphologically and 52 were identified by sequencing and phylogenetic analysis of the 16S ribosomal RNA gene. The molecular identification grouped the bacteria in the genera Streptomyces (n = 39), Pseudonocardia (n = 3), Staphylococcus (n = 4), Pseudomonas (n = 2) and Bacillus (n = 2). Twenty-three crude extracts were obtained from the microbial growth and liquid-liquid extraction with the ethyl acetate solvent (AcOEt) for antiproliferative tests with Sulforodamine B (SRB) against tumor lines. The isolates M-92, B-146, B-81 and B-8 belong to the genus Streptomyces and showed promising results against tumor cells, U251 glioma; MCF7 breast; NCI-H460 non-small cell lung type. The isolates M-92, B-146, B-81 grown in three different culture media, NB, ISP2 and R2A were selected for the amplification of the scale, fractionation, isolation and identification of bioactive substances. Results in terms of antiproliferative activity, however higher mass yield was obtained from the ISP2 medium. The crude extract and fractions of the B-81 isolate were evaluated for their potential against antiproliferative activity against a panel of nine tumor lines, U251 glioma, MCF7 breast, NCI-H460 non-small cell lung, UACC-62 melanoma, NCI-ADR / RES multidrug resistant ovary, 786-adenocarcinoma kidney, OVCAR-03 ovary, HT-29 colon and K562 leukemia, and a non-tumor, HaCaT keratinocyte, fraction 3 (MeOH 100%) and fraction 4 (MeOH-AcOEt) the most active. The chemical profile of the crude extract and fractions of the B-81 isolate was investigated by UHPLC-MS and ESI-MS / MS and the molecules identified by m/z were de-replicated It is possible to suggest the presence of substances described in the literature such as Benastatin A, Phoslactomycin C, Actinomycin A, Asparenomycin A, Azinnomycin B, among others; biomolecules already documented, as well as new molecules that may belong to other chemical classes of compounds present in the actinobacteria of the genus Streptomyces. The results obtained in this study demonstrated that the halophilic environment represents a promising source of microorganisms capable of producing new compounds with antiproliferative potential
Subject: Atividade antiproliferativa
Lagoas - Mórrope (Peru)
Lagoas - Bayovar (Peru)
Bactérias - Classificação
Bactérias - Química
Biomoléculas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: CLAVO, Rene Flores. Caracterização molecular de bactérias isoladas de lagoas salinas do norte do Perú e avaliação do potencial de novas biomoléculas frente a diferentes tipos de células tumorais: Molecular characterization of bacteria the lagoons of northern and evaluation of potential of new biomolecules against different types of tumor cells. 2017. 1 recurso online (201 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.
Date Issue: 2017
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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