Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/330962
Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Caracterização do perfil de interação da proteína cinase humana NEK3 e sua contextualização funcional = Chracterization of the protein interaction profile of the human kinase NEK3 and assignment of its functional context
Title Alternative: Chracterization of the protein interaction profile of the human kinase NEK3 and assignment of its functional context
Author: Cardoso, Vanessa Bomfim, 1988-
Advisor: Kobarg, Jörg, 1965-
Abstract: Resumo: NEKs (NIMA-related kinases) são um grupo de proteínas cinases que compartilham alta identidade entre suas sequências de aminoácidos na região do domínio cinase com a proteína NIMA (Never in mitosis gene A) e estão envolvidas na regulação do ciclo celular. Dentre as NEKs já estudadas, funções frequentemente encontradas incluem: funcionamento dos cílios, progressão do ciclo celular ¿ principalmente durante os "checkpoints" ¿ e a resposta a danos no DNA. Até o presente momento, 11 NEKs humanas foram descobertas no genoma, com os seus ortólogos presentes em camundongos. NEK3 é uma serina/treonina cinase de 506 aminoácidos, presente no citoplasma e no núcleo, com o seu gene humano localizado no cromossomo 13, região q14.2. Em função das correlações entre NEK3 e diversas patologias e processos, tais como o câncer de mama, degeneração axonal, e por seu gene estar localizado em uma região de freqüentes mutações, tornam-se necessários maiores esclarecimentos de como ocorre a sua participação, através de estudos funcionais, moleculares e estruturais, buscando mapear a rede de interações na qual ela está envolvida. Utilizando o Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid system, uma triagem para a busca de parceiros de interação foi realizada e 65 clones encontrados, que codificam 27 proteínas diferentes foram identificados. Os interatores identificados estão envolvidos em diversos processos celulares tais como sumoilação, ubiquitinação, regulação da transcrição, reparo de DNA, processamento de RNA e a regulação da proliferação celular, invasividade e metástase. Alguns parceiros de interação da NEK3 estão localizados no núcleo e membrana plasmática, mas a maioria está presente no citoplasma. Um dos interatores citoplasmáticos, RhoGDI2, é um regulador das RhoGTPases e inibe a ativação de ambas Rac1 e RhoA. Em nosso ensaio de pull down, a superexpressão de NEK3 aumenta os níveis de Rac1-GTP enquanto a superexpressão concomitante com RhoGDI2 reduz Rac1-GTP a níveis não detectáveis. Nossos dados sugerem que a interação de NEK3 com RhoGDI2 é um importante elemento regulador da sinalização de Rac1. Ademais, o papel da NEK3 no ciclo celular também foi investigado em células depletadas para NEK3 que apresentaram um atraso da citocinese causada por pontes citoplasmáticas e de DNA, que corrobora com o papel de outros interatores de NEK3 e confirma a importância dos resultados apresentados neste trabalho

Abstract: NEKs (NIMA-related kinases) are a group of kinase proteins that share high identity of their amino acid sequences with NIMA (Never in mitosis gene A) and are involved in cell cycle regulation. Among mammalian NEKs already studied, frequently found functions include: cilia function, cell cycle progression - especially during checkpoints- and the DNA damage response. Eleven NEKs have been discovered, with all their orthologous present in mice. NEK3 is a 506-amino acid serine/threonine kinase, present in the cytoplasm and nucleus, and its gene is located at chromosome 13, bands q14.2 According to the association of NEK3 to several disease processes, including breast cancer and axonal degeneration, as well frequent mutations in its chromosomal site, and since it has characteristics different from other more studied NEKs, it becomes necessary to further clarify its role, through functional, molecular and structural studies, aiming to map the interaction network in which it is involved. Using the Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid system, a screening for interaction partners was performed and 65 clones were obtained, which cDNAs encode 27 different proteins. The identified candidate interacting proteins are functionally involved in sumoylation, ubiquitination, transcriptional regulation, DNA repair, RNA processing, and the regulation of cell proliferation, invasiveness and metastasis. Some interaction partners for NEK3 are located in the nucleus and plasma membrane but most of them localize to the cytoplasm. One of the cytoplasmatic interactors for NEK3, RhoGDI2, is a regulator of RhoGTPases and inhibits Rac1 and RhoA activation levels. In our pull down assay, NEK3 overexpression increases Rac1-GTP while concomitant overexpression of RhoGDI2 reduces it to non-detectable levels. Our data suggest that NEK3 interaction with RhoGDI2 are important new regulatory elements in Rac1 signaling pathways. Moreover, the role for NEK3 in cell cycle was also investigated. ShRNA constructs for NEK3 were responsible for cytokinesis delay induced by cytoplasmic and DNA bridges, which corroborate with some NEK3 interactors role and supports the implications of the results from this work
Subject: Câncer
Proteina quinases
Interatoma
Quinases relacionadas à NIMA
Proteína Nek3 humana
Editor: [s.n.]
Citation: CARDOSO, Vanessa Bomfim. Caracterização do perfil de interação da proteína cinase humana NEK3 e sua contextualização funcional = Chracterization of the protein interaction profile of the human kinase NEK3 and assignment of its functional context. 2016. 1 recurso online ( 160 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/330962>. Acesso em: 31 ago. 2018.
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

Files in This Item:
File SizeFormat 
Cardoso_VanessaBomfim_D.pdf81.04 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.