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Type: TESE DIGITAL
Title: Evidências da participação nitrérgica no controle dos tônus de aortas e corpos cavernosos dos répteis "Chelonoidis carbonaria" (jabuti-piranga) e "Pantherophis guttatus" (cobra dos milharais)
Title Alternative: Evidence of nitrergic participation in the control of aortae and corpora cavernosa tonus of reptiles "Chelonoidis carbonaria" (turtle) and "Pantherophis guttatus" (corn snake)
Author: Campos, Rafael de Morais, 1988-
Advisor: De Nucci, Gilberto, 1958-
Abstract: Resumo: Aves e mamíferos são animais endotérmicos que evoluíram de ancestrais comuns aos répteis. Devido à frequência cardíaca em répteis ser baixa, a manutenção da pressão arterial nestes animais ocorre, em grande parte, pela regulação local do tônus vascular. Os répteis também constituem uma classe importantíssima no estudo evolutivo da fisiologia da ereção, pois constituem os primeiros animais a desenvolverem pênis intromitente. Visto que o óxido nítrico é um importante mediador endógeno envolvido na regulação do tônus vascular e cavernosal de mamíferos, este trabalho propõe investigar o envolvimento deste neurotransmissor no controle do tônus de aorta e corpo cavernoso dos répteis Chelonoidis carbonaria (jabuti-piranga) e Pantherophis guttatus (cobra dos milharais). Anéis de aortas de ambos os répteis foram contraídos através de estimulação de campo elétrico (EFS) na presença e ausência de fentolamina, guanetidina e tetrodotoxina. Anéis de aorta isolados de C. carbonaria foram pré-contraídos por acetilcolina (ACh) e submetidos a diferentes concentrações de adenosina trifosfato (ATP), adenosina difosfato (ADP) e histamina na presença e ausência do inibidor da sintase de óxido nítrico, L-NAME (100 uM). Curvas concentrações-respostas ao nitroprussiato de sódio (SNP), tadalafil, BAY 41-2272 e BAY 60-2770 foram realizadas na presença do inibidor do sítio heme da enzima guanilato ciclase solúvel (ODQ; 10 uM). Foram realizadas análise transcriptômica em aortas de C. carbonaria para proteínas envolvidas na síntese de catecolaminas e na via NO-GCs-GMPc. Aortas de P. guttatus foram pré contraídas por fenilefrina (PHE) e curvas concentrações-respotas à ACh, SNP e BAY 41-2272 foram construídas na presença de L-NAME e ODQ, respectivamente. A fim de caracterizar a regulação do tônus de corpos cavernosos de P. guttatus, os tecidos foram contraídos por EFS na presença e ausência de fentolamina, guanetidina, tetrodotoxina e substituição equimolar de cloreto de sódio por N-metil D-glucamina (NMDG). Corpos cavernosos de P. guttatus foram pré contraídos por fenilefrina e realizado curvas concentrações-repostas à ACh e SNP, na ausência e presença de L-NAME e ODQ, respectivamente. Em outro momento, realizou-se relaxamento induzido por EFS na presença de TTX e L-NAME em tecidos pré-contraídos por fenilefrina. Estímulo de campo elétrico induziu resposta direta ao músculo liso de aorta de C. carbonaria inviabilizando a caracterização farmacológica do evento, entretanto contrações induzidas por EFS em aorta de P. guttatus foram reduzidas na presença de fentolamina e guanetidina e resistentes ao tratamento a TTX. ATP, ADP e histamina promoveram respostas relaxantes dependente de concentração em aorta de C. carbonaria e seus efeitos máximos foram reduzidos na presença de L-NAME. SNP induziu resposta relaxante em aorta das duas espécies investigadas e tadalafil promoveu resposta relaxante em aorta de C. carbonaria. SNP e tadalafil tiveram suas curvas deslocadas para direita na presença de ODQ. BAY 41-2272 e BAY 60-2770 promoveram relaxamento em aorta de C. carbonária. Proteínas para eNOS e sGC foram encontradas no perfil transcriptômico com identidade superior a 80% quando comparado às proteínas humanas. Não foi encontrado proteína para nNOS e as demais proteínas investigadas não foram aprovadas no processo de validação transcriptômico. A resposta relaxante promovida por ACh foi inibida na presença de L-NAME em aorta de P. guttatus e a potência do BAY 41-2272 é menor quando comparado a encontrada em aorta de C. carbonaria. Corpo cavernoso de P. guttatus é sensível ao tratamento a fentolamina e guanetidina, entretanto assim como em aorta de P. guttatus, é resistente à TTX. O relaxamento induzido por ACh foi parcialmente abolido por L-NAME em corpo cavernoso de P. guttatus. Neste tecido, as curvas concentrações-respostas a SNP foram intensamente deslocadas na presença de ODQ e relaxamentos induzidos por EFS foram insensíveis ao tratamento com TTX e a L-NAME. Concluímos que a via NO-GCs-GMPc está envolvida no controle do tônus de aortas e de corpos cavernosos de C. carbonaria (jabuti-piranga) e P. guttatus (Cobra dos milharais) e que existem canais de sódio resistentes TTX em tecidos de P. guttatus

Abstract: Due to their low heart rate the regulation of blood pressure in reptile is mainly controled by peripheral resistance arterial pressure. Reptiles are also the first animals to develop an intromitent pênis being an important animal model to study the evolution of penile erection. As a result of nitric oxide (NO) being an endogenus mediator involved on vascular and corpora cavernosa tônus in mammals in this study is investigated the functional presence of NO pathway in aortae and corpora cavernosa of Chelonodis carbonaria (turtle) and snake Pantherophis guttatus (snake). Electrical field stimulation-induced contractions were performed in aortic rings of both reptiles in presence and absence of phentolamine, guanethidine and tetrodotoxin. Aortic rings of C. carbonaria were pre-contracted with acetylcholine (ACh) and concentration-response curves to adenosine thriphosphate (ATP), adenosine diphosphate (ADP) and histamine in presence and absence of nitric oxide synthase inhibitor (L-NAME 100 uM) were performed. Concentration-response curves to sodium nitroprusside (SNP), tadalafil, BAY 41-2272 and BAY 60-2770 were also constructed in presence of soluble guanilate cyclase inhibitor (ODQ; 10 ?M) in aortic rings of C. carbonaria. Transcriptomic analysis were performed for proteins involved on catecholamine synthesis and NO-sGC-GMPc pathway. Aortic rings of P. guttatus were pre-contracted with phenylephrine (PHE) and concentration-curves were constructed to ACh, SNP and BAY 41-2272 in presence and absence of L-NAME e ODQ, respectively. In order to characterize the regulation of corpora cavernosa tônus, EFS-induced contractions were performed on corpora cavernosa of P. guttatus corpora cavernosa in presence and absence of phentolamine, guanethidine, tetrodotoxin and Krebs¿ modified solution (equimolar substituition of sodium clohride by N-metil D-glucamine) (NMDG). Strips were also pre-contracted with phenylephrine and concentration response-curves to ACh and SNP were constructed in presence and absence of L-NAME and ODQ, respectively. In other set of protocols, EFS-induced-relaxation were performed in presence and absence of L-NAME (100 ?M) and TTX (1 ?M) in tissue pre-contracted with phenylephrine. EFS induced a direct stimulus on C. carbonaria aortic rings, however in P. guttatrus aortic rings EFS-induced contractions were reduced in presence of phentolamine and guanethidine. No alteration was observed in TTX treatement in P. guttatus aortic rings. ATP, ADP and histamine induced relaxation concentration-dependently in C. carbonaria aortic rings and their effects were reduced in the presence of L-NAME. SNP evoked relaxant response in both tissues investigated. BAY 41-2272 and BAY 60-2770 promoted relaxation on C. carbonaria aortic rings. Tadalafil relaxed C. carbonaria aortic rings. eNOS and sGC proteins were found on transcriptome analysis with identity superior to 70 % when compared with human library. nNOS was not found on C. carbonaria aortic ring transcriptome and the other proteins investigated were not validated on transcriptome analysis. ACh-induced relaxation was abolished in presence of L-NAME on P. guttatus aortic ring and BAY 41-2272 potency was lower in snake and compared to turtle. EFS-induced contractions in P. guttatus corpora cavernosa strips were reduced in presence of phentolamine and guanethidine. No alteration was observed after TTX treatment in P. guttatus corpora cavernosa. ACh-induced relaxations were partially inhibited by L-NAME and pre-treatment with ODQ promoted a rightshift on SNP curves. EFS-induced relaxations were not altered in presence of TTX or L-NAME in P. guttatus corpora cavernosa precontracted with phenylephrine. In conclusion, the NO-sGC-cGMP pathway are involved on regulation of vascular and corpora cavernosa of C. carbonaria and P. guttatus and tetrodotoxin sodium channels resistance were found on P. guttatus preparations
Subject: Músculo liso
Óxido nítrico
Répteis
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2017
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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