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Type: TESE DIGITAL
Title: Busca de novos inibidores da enzima glutaminase = Search of new glutaminase inhibitors
Title Alternative: Search of new glutaminase inhibitors
Author: Paradela, Luciana de Sousa, 1988-
Advisor: Dias, Sandra Martha Gomes
Abstract: Resumo: A descoberta de fármacos é um processo longo e complexo. Em muitos casos, ele é composto pela identificação e validação inicial de alvo, seguida pelo desenvolvimento de ensaios bioquímicos ou celulares, rastreio de alto rendimento (High Throughput Screening, HTS) de uma biblioteca de compostos, identificação de compostos hits, otimização de moléculas leads e finalmente seleção de um candidato para seu desenvolvimento clínico. Glutaminase é uma enzima que desempenha um papel fundamental nas células tumorais e sua inibição ou atenuação da expressão demonstraram ser citotóxicas para vários tipos de tumor, em especial ao câncer de mama triplo-negativo (TN) (sem expressão dos receptores de estrógeno -ER, progesterona -PR e da proteína de membrana Her2). Mesmo sendo um importante alvo terapêutico, até a presente data, não há inibidores de glutaminase aprovados para o uso na clínica. Nosso grupo desenvolveu e realizou um ensaio bioquímico de HTS utilizando uma biblioteca de 30.000 compostos filtrados para seguirem as cinco regras de Lipinski. Neste trabalho, descrevemos no primeiro capítulo a avaliação de 11 dos compostos hits obtida em ensaios secundários celulares com o objetivo de verificar se os mesmos têm ação seletiva para tumores de mama TN em contraste a tumores não-T, células de tumor benigno (fibrose cística) e epitélio de mama imortalizado não tumorigênico. Dentre os compostos avaliados verificamos que os compostos C1 e C10 exibiram potência e seletividade tumoral medidos pela inibição do crescimento celular. Além disto, estes compostos inibiram em 50% o consumo de glutamina nas células tumorais TN MDA-MB-231 e diminuíram, nestas células, a porcentagem de núcleos marcados com Edu, indicando também ação citoestática. Entretanto, ambos compostos não apresentaram ação antitumoral dependente de GLS. Dando continuidade a busca por inibidores de glutaminase, no segundo capítulo desta dissertação, abordamos o estabelecimento de uma nova metodologia de triagem alvo-direcionada baseada em células, ensaio o qual foi empregado para o screening de duas coleções de bibliotecas de produtos naturais. Após validação e realização das triagens foi possível obter um total de 6 extratos/frações com potencial de serem inibidores seletivos de GLS

Abstract: The drug discovery process is a long and complex process composed of an initial target identification and validation, followed by the development of a biochemical or cellular assays, high throughput screening (HTS) of a compound library, hit identification, lead optimization and ?nally the selection of a candidate molecule for clinical development. Glutaminase is an enzyme that plays a key role on Myc-driven tumor cells and its expression inhibition or attenuation has been shown to be cytotoxic for various tumor types, especially triple-negative (TN) breast cancer (without expression of estrogen receptors-ER, Progesterone-PR and HER-2 membrane protein). Although it is an important therapeutic target, until nowadays, there are no glutamine inhibitors approved for use in the clinic. Our group developed and performed a biochemical HTS assay using a 30,000 compounds library filtered to follow the five Lipinsky rule. In this work, we describe in the first chapter the evaluation of 11 hits compounds obtained in secondary cell assays in order to verify if they have selective action against TN breast tumors in contrast to non-TN tumors, benign tumor cells (cystic fibrosis) and non-tumorigenic immortalized breast epithelium. Among the evaluated compounds, we verified that the compounds C1 and C10 exhibited potency and tumor selectivity measured by cell growth inhibition. In addition, these compounds inhibited the consumption of glutamine in TN tumor cells MDA-MB-231 by 50% and decreased the percentage of nuclei labeled with Edu, indicating also its cytostatic action. However, both compounds did not present GLS-dependent antitumor action. Continuing the search for glutaminase inhibitors in the second chapter of this work, we approached the establishment of a new target cell-based screening methodology, which was used to screen two collections of natural compounds libraries. After screening validation and execution, it was possible obtain a total of 6 extracts/fractions with potential to be selective GLS inhibitors
Subject: Glutaminase
Inibidores enzimaticos
Câncer de mama triplo negativo
Ensaios de triagem em larga escala
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2017
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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