Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/325484
Type: TESE DIGITAL
Title: Caracterização da expressão das vias ubiquitina-proteassomo, fatores de transcrição miogênicos MyoD e miogenina, gene da miostatina durante a regeneração de músculo esquelético após injeção de veneno botrópico  
Title Alternative: Characterization of the expression of ubiquitin-proteasome pathway, myogenic transcription factors MyoD and myogenin, myostatin gene during skeletal muscle regeneration after bothropic venom injection  
Author: Kenzo-Kagawa, Bruno, 1991-
Advisor: Cruz-Hofling, Maria Alice da, 1944-
Höfling, Maria Alice da Cruz
Abstract: Resumo: O veneno botrópico apresenta efeitos miotóxico, hemorrágico e proteolítico que são amplamente conhecidos. Acidentes com a serpente Bothrops jararacussu mostram que as alterações locais no músculo, geralmente de membros inferiores, são rápidas. Dados experimentais revelam que a miotoxicidade deve-se à ação direta das miotoxinas Bothropstoxina I e II, e indiretamente pela anóxia do tecido, devido à falência da microcirculação causada por toxinas hemorrágicas, ambas presentes no veneno. Nesse trabalho foi caracterizada a expressão dos fatores de transcrição miogênicos MyoD e Myog, via ubiquitina-proteassomo (Fbx-32 e MuRF-1) e gene GDF-8. Camundongos Swiss (Mus musculus) machos, adultos jovens (6 - 8 semanas/22 ¿ 25 g) foram divididos em 4 grupos Bjussu, BthTx1, BthTx2 e Sham. Os animais do grupo Bjussu receberam injeção intramuscular (mm. gastrocnêmio direito) (20 µl) do veneno liofilizado (diluído em NaCl 0,9%) de serpente do gênero Bothrops jararacussu (Bjssu) na dose de 1 mg/Kg. BthTx-I e BthTx-II receberam injeção i.m. de bothropstoxina I e II respectivamente, isoladas do veneno de B. jararacussu, na dose de 2,5 mg/Kg e o grupo Sham recebeu injeção i.m. de NaCl 0,9%. Animais de todos os grupos foram sacrificados e tiveram o músculo gastrocnêmio direito coletado nos períodos de 24, 48, 72 e 96 horas pós-tratamento para análise de expressão qualitativa e localização proteica (imunohistoquímica) e quantitativa (Western Blotting). Além disso, foi realizada análise da função motora dinâmica por meio do sistema CatWalk para os grupos Sham e Bjussu, nos períodos pré-lesão, 3, 24, 48, 72 e 96 horas. Os animais do grupo Bjussu não realizaram apoio do membro posterior direito (mantiveram postura flexora reflexa) no período de 3 horas pós-injúria (p=0.001) diferentemente do grupo Sham. Após 24 horas a função motora foi reestabelecida. Na análise de imunohistoquímica foi observada expressão de MyoD, Myog, GDF-8, Fbx-32 e MuRF-1 em todos os períodos analisados para o grupo Bjussu; no grupo Sham não foi possível observar expressão de nenhuma das proteínas. Na análise por Western Blotting e comparando-se o grupo Bjussu com Sham foi observado aumento de expressão de MyoD e GDF-8 no período de 96 horas (p=0.01), Myog em 72 horas (p=0.01) e queda de expressão de MuRF-1 em 96 horas (p=0.05), sendo que a expressão de Fbx-32 permaneceu inalterada. Para BthTx-I observam-se aumentos significativos para Myog (p=0.001), GDF-8 (p=0.01), Fbx-32 (p=0.01) e MuRF-1 (p=0.01) no período de 48 horas e Fbx-32 no período de 96 horas (p=0.05). Na análise de BthTx-II observa-se queda na expressão de MyoD (p=0.01), GDF-8 (p=0.01), Fbx-32 (p=0.01) e MuRF-1 (p=0.01) no período de 24 horas , e elevação da expressão de Myog (p=0.01) e GDF-8 (p=0.01) no período de 48 horas. De maneira geral, podemos sugerir que o veneno bruto de Bothrops jararacussu e a BthTx-II são capazes de ativar o processo molecular de regeneração, ao contrário do que ocorre com a BthTx-I. Considerando ainda que a via ubiquitina-proteassomo não sofreu alterações em nenhum dos modelos de injúria reproduzidos

Abstract: Bothropic venom presents myotoxic, hemorrhagic and hemolytic effects that are widely known. Bothrops jararacussu snakebite accidents show that local changes in skeletal muscle occurs in a fast pace, usually affecting lower limbs. Experimental data show that local changes in skeletal muscle usually affect the lower limbs and evolve fast due to direct myotoxin action (mainly Bothropstoxin I and II) and also indirectly by tissue anoxia, due to failure in microcirculation caused by hemorrhagic toxins, both present in the venom. In this work, we characterized the expression of Myogenic Regulatory Factors MyoD and Myogenin, the GDF-8 gene and the ubiquitin-proteasome pathway (Fbx-32 and MuRF-1). Young adult male Swiss mice (Mus musculus) (6-8 weeks/22-25g) were divided in four groups Bjussu, BthTx1, BthTx2 and Sham. Animals from Bjussu received intramuscular injection (right gastrocnemius) (20µl) of lyophilized Bothrops jararacussu venom (eluted in NaCl 0,9%) at a concentration of 1mg/Kg. BthTx1, BthTx2 received i.m. injection of lyophilized bothropstoxin 1 and 2 respectively, isolated from Bothrops jararacussu crude venom at a concentration of 2,5mg/Kg, similarly Sham group was administered a 0,9% NaCl i.m. injection. Animals from all groups were sacrificed and had their muscles collected 24, 48, 72 and 96 hours post treatment for qualitative protein expression (immunohistochemistry) and quantitative (Western Blotting). In addition, the groups Sham and Bjussu went through dynamic function motor analysis (CatWalk system) in the periods of pre-injury, 3, 24, 48, 72 and 96 hours post injury. The animals from Bjussu did not perform support of the right hindlimb (kept a flexed in a reflex posture) 3 hours post injury (p=0.001), unlikely Sham group. Motor function was reestablished 24 hours post injury. For the immunohistochemistry analysis staining for MyoD, Myog, GDF-8, Fbx-32 and MuRF-1 was observed in all periods studied in Bjussu group, no staining was observed in Sham. In Western Blotting analysis, comparing Bjussu with Sham, it was possible to observe increased expression of MyoD and GDF-8 in 96 h (p=0.01), Myog in 72 h(p=0.01), and decreased expression of MuRF-1 in 96 h (p=0.05), taking into account that Fbx-32 expression remained inaltered. In BthTx1 expression occurs to increase for Myog (p=0.001), GDF-8 (p=0.01), Fbx-32 (p=0.01) and MuRF-1 (p=0.01) in 48 h and for Fbx-32 in the 96 h post injury (p=0.05). Analysis for BthTx2 revealed decrease for MyoD (p=0.01), GDF-8 (p=0.01), Fbx-32 (p=0.01) and MuRF-1 (p=0.01) in 24 h and increase for Myog (p=0.01) and GDF-8 (p=0.01) in 48 h. We suggest that crude Bothrops jararacussu venom and BthTx-2 are capable of activating the molecular regeneration process, in contrary to BthTx-1 inability. Considering that, the ubiquitin-proteasome pathway has remained inaltered in all present injury models
Subject: Músculo esquelético
Venenos de serpentes
Músculos - Regeneração
Fatores de regulação miogênica
Via ubiquitina-proteossomo
Bothrops jararacussu
Capacidade motora - Testes
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

Files in This Item:
File SizeFormat 
Kagawa_BrunoKenzo_M.pdf5.01 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.