Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/322405
Type: TESE DIGITAL
Title: Determinação do perfil clínico e imuno-inflamatório de pacientes com a síndrome de Chediak-Higashi
Title Alternative: Determination of clinical and immune inflamatory profile of patients with Chediak-Higashi syndrome
Author: Rebouças, Pedro Diniz, 1990-
Advisor: Kantovitz, Kamila Rosamilia
Abstract: Resumo: A síndrome de Chediak-Higashi (CHS) é uma doença letal autossômica recessiva rara caracterizada por mutações no gene regulador do tráfico lisossomal (LYST/CHS1), levando a imunodeficiência e infecções generalizadas, incluindo a doença periodontal. Fibroblastos gengivais (FG) são a primeira barreira contra a invasão de patógenos, e, portanto, FG provenientes de pacientes CHS representam um excelente modelo para estudar as vias relacionadas à biogênese de lisossomos e seu papel no processo inflamatório periodontal, bem como compreender os mecanismos responsáveis pela maior suscetibilidade de pacientes CHS à doença periodontal. A hipótese deste estudo é que mutações patológicas em LYST/CHS1 alteram a resposta imune-inflamatória de FGs de CHS. Os objetivos desse estudo foram (1) caracterizar clinicamente as condições periodontais de indivíduos CHS clássicos e atípicos e (2) determinar comparativamente o padrão de expressão de genes/proteínas em FG obtidos de pacientes controle e CHS expostos ou não ao LPS de Escheria coli (Ec) e extrato total de Fusobacterium nucleatum (Fn). Sete indivíduos com CHS: atípicos (n=4) e clássicos (n=3) foram examinados clínica e radiograficamente. Um examinador treinado avaliou lesões orais das mucosas, cárie dentária, perda dentária e periodonto (boca-completa, seis sítios/dente). Cultura primária de FGs foi estabelecida para indivíduos CHS e controle por digestão enzimática (n=3). A reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e a análise "multiplex" foram utilizadas para determinar o perfil imune-inflamatório de células expostas ou não ao LPS de Ec (10 ng/mL-3 horas) e de Fn (2 ug/mL-3 horas). Os dados foram submetidos ao teste t de Student ou Mann-Whitney (?=0,05). Considerando os achados clínicos e radiográficos, pacientes CHS atípicos apresentaram significativamente maior profundidade de sondagem (PS) (2,42±0,6mm vs 2,14±0,6mm, p<0,0001) e porcentagem de sítios com PS>4mm (4,55±2,6 vs 0,20±0,3, p=0,037), além de uma tendência para mais sítios com perda de inserção clínica (PIC)?3mm (18% versus 6%) do que CHS clássicos. Em relação ao perfil de expressão do gene/proteína, a expressão de receptores "toll-like" (TLR)-4 foi aumentada em células de CHS atípicos (2,52 e 1,17 vezes para gene e proteína, respectivamente), enquanto que TLR-2 apresentou uma tendência para níveis mais baixos. Os níveis de RNAm de interleucina (IL)-6 (6,82 vezes) e IL-1? (2,38 vezes) foram mais expressos, enquanto que a ciclooxigenase (COX)-2 apresentou menor expressão (1,21 vezes) em células de CHS atípicos. Quando tratados com LPS de Ec, CHS atípicos apresentaram menor magnitude da IL-6 (1.339 vezes), IL-1? (12.091 vezes) e COX-2 (5,95 vezes) (p<0,05). Considerando-se a análise de expressão proteica, as células de CHS atípicos expostas ao extrato total de Fn, apresentaram magnitude significativamente elevada de Interferon (IFN)-?, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-15, IL-17, IL-9 e IL-6 (78, 27, 13, 7, 1, 9, 3 e 22 vezes, respectivamente) em comparação ao controle. Como conclusões do presente estudo temos que (1) clinicamente, as condições clássicas e atípicas de CHS podem resultar em fenótipos periodontais distintos e (2) em fibroblastos gengivais de indivíduos com a forma atípica da CHS, níveis elevados de TLR-4 no baseline podem contribuir para uma resposta imunológica alterada a bactérias gram-negativas, favorecendo a destruição dos tecidos periodontais

Abstract: Chediak-Higashi syndrome (CHS) is a rare autosomal recessive lethal disease characterized by mutations in the lysosomal trafficking regulator gene (LYST/CHS1), leading to immunodeficiency and generalized infections, including periodontal disease. The gingival fibroblasts (GF) act as the primary barrier against invasion of pathogens, and therefore GF from CHS patients represent an excellent model for studying the pathways related to lysosomal biogenesis and its role on periodontal inflammation and to understand the mechanisms responsible for the increased susceptibility of CHS patients to periodontal disease. We hypothesized that pathological mutations in LYST/CHS1 gene exhibit altered immune-inflammatory response in GFs of CHS. The aims of this study were to perform a clinical characterization of the periodontal status in classic and atypical CHS individuals, and to determine the comparative response pattern of gene/proteins expression of GF from control and atypical CHS individuals exposed or not to E. coli (Ec) LPS and whole extract of Fusobacterium nucleatum (Fn). Seven subjects: atypical (n=4) and classic (n=3) CHS were enrolled and panoramic radiographs taken. A trained examiner assessed oral mucosal lesions, dental caries, tooth loss and periodontal status (full-mouth, six sites/tooth exam). Primary cultures of human GF from atypical CHS and control individuals were obtained by enzymatic digestion (n=3). Quantitative real-time polymerase chain (qPCR) and multiplex analyses were used to determine the expression profile of gene/protein related to inflammation challenged or not with Ec LPS (10 ng/mL-3 hours) and extract of Fn (2 ?g/mL-3 hours), while Western Blotting were used to validate the main findings at baseline. Gene and protein expression data analyses were performed by the Student's t-test or Mann-Whitney (?=0.05). Considering clinical and radiographic findings, atypical CHS subjects presented significantly increased probing depth (PD) (2.42±0.6mm vs. 2.14±0.6mm, p=<0.0001) and percent of sites with PD>4mm (4.55±2.6 vs. 0.20±0.3, p=0.037), and a trend towards increased percentage of sites with clinical attachment loss (CAL) ?3mm (18% versus 6%) than classic CHS. Regarding the expression profile of gene/protein, at baseline, toll-like receptor (TLR)-4 was increased in atypical CHS cells (2.52-fold and 1.17-fold for gene and protein, respectively), whereas TLR-2 presented a trend towards lower levels than control cells. Interleukin (IL)-6 (6.82-fold) and IL-1? (2.38-fold) mRNA levels were higher, whereas cyclooxygenase (COX)-2 was lower (1.21-fold) in atypical CHS cells. When treated with Ec LPS, atypical CHS cells presented lower magnitude of IL-6 (1,339-fold), IL-1? (12,091-fold) and COX-2 (5.95-fold) transcripts increase (p<0.05). Considering multiplex analysis, atypical CHS cells challenged with Fn featured significantly higher magnitude of interferon (IFN)-? (78-fold), IL-1ra (27-fold), IL-2 (13-fold), IL-4 (7-fold), IL-15 (1-fold), IL-17 (9-fold), IL-9 (3-fold) and IL-6 (22-fold) induction compared to treated control cells. Our findings indicate that (1) clinically, classical and atypical CHS conditions can result in different periodontal phenotypes and (2) in gingival fibroblasts from patients with atypical form of CHS, elevated levels of TLR -4 baseline can contribute for an altered immunological response to gram-negative bacteria, promoting the destruction of the periodontal tissues
Subject: Imunidade
Receptores Toll-like
Doenças periodontais
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FOP - Dissertação e Tese

Files in This Item:
File SizeFormat 
Reboucas_PedroDiniz_M.pdf1.8 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.