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Type: TESE DIGITAL
Title: Estudo dos nichos perivascular e vásculo-nervoso como fonte de células estromais mesenquimais na polpa dentária humana
Title Alternative: Study of perivascular and neurovascular bundle niches as sources for mesenchymal stromal cells at human dental pulp
Author: Oliveira, Natássia Cristina Martins, 1987-
Advisor: Marques, Marcelo Rocha, 1976-
Abstract: Resumo: Células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) têm sido reportadas em uma estreita relação espacial com vasos sanguíneos em diversos tecidos adultos humanos e, mais recentemente, com o feixe vásculo-nervoso (FVN) que acompanha arteríolas em modelo de incisivo murino. Tal localização parece ser importante nas funções que estas células exercem nos tecidos pós-natais, uma vez que estariam estrategicamente posicionadas para manter a homeostasia e o reparo dos mesmos. Neste sentido, o presente projeto teve como objetivo avaliar uma possível associação de células estromais mesenquimais indiferenciadas com os nichos perivascular e vásculo-nervoso na polpa dentária humana. Para tanto, foram selecionados 14 pacientes de ambos os gêneros, com idade entre 13 e 30 anos, e que tinham indicação de remoção de dois terceiros molares contralaterais hígidos e sem doença periodontal. Um dos dentes foi destinado à cultura de células: a polpa dentária foi coletada, digerida e plaqueada para determinação da frequência de células estromais mesenquimais (por meio do ensaio de CFU-F) e para caracterização das mesmas (por ensaios de diferenciação in vitro e imunofenotipagem). O outro dente foi fixado e destinado ao processamento histológico de rotina para imunomarcação de CD34, ?-SMA e S100, a fim de localizar na polpa vasos sanguíneos em geral e arteríolas associadas a fibras/feixes nervosos. A frequência de CFU-F foi contada para cada paciente e os cortes histológicos foram digitalizados para determinação da densidade de área vascular (DAV) e densidade de área de arteríolas associadas a nervos (DAAN) no software Image-Pro Plus®. Aproximadamente 0,01 a 0,05% do total de células isoladas da polpa no presente estudo eram células estromais mesenquimais indiferenciadas, capazes de formar CFU-Fs em cultura. Este resultado foi confirmado pela habilidade desta pequena população de células da polpa, de todos os pacientes, se diferenciarem em pelo menos duas linhagens mesodérmicas, e pelo fenótipo antigênico das mesmas, com média de positividade maior que 95% para CD105, CD90 e CD73 e menor que 4% para marcadores de origem hematopoiética. Após a plotagem das médias de CFU-Fs vs. as médias de densidades de área para cada paciente, não houve correlação significativa entre as variáveis CFU-F e DAV (r= 0,188; p= 0,52), rejeitando-se a hipótese de que o nicho perivascular (e provavelmente pericitos) fosse a maior fonte de células indiferenciadas da polpa. No entanto, houve uma significativa associação entre as médias de CFU-F e DAAN (r= 0,62; p= 0,0179), aceitando-se a hipótese de que o nicho vásculo-nervoso (e provavelmente células ao redor de arteríolas associadas a nervos) originaria a maior parte das células mesenquimais indiferenciadas da polpa in vitro. Estes dados preliminares são a primeira evidência, na polpa dentária humana, de ligação indireta entre progenitores mesenquimais e arteríolas envolvidas por fibras/feixes neurais

Abstract: Multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) have been reported in a close spatial relationship with blood vessels in several human adult tissues and, more recently, with the neurovascular bundle (NVB) accompanying arterioles in mouse incisor model. This localization appears to be important for the functions these cells exert on postnatal tissues, once it would be strategically positioned to maintain homeostasis and repair, in case of lesions. In this sense, this project aimed to evaluate a possible association of undifferentiated mesenchymal stromal cells with perivascular and neurovascular niches in human dental pulp. Fourteen patients were selected of both genders, aged between 13 and 30, undergoing extraction of two healthy contralateral third molars, with no periodontal disease. One of the teeth was used for cell culture: the pulp was collected, digested and plated to determine the frequency of mesenchymal stromal cells (through CFU-F assay) and to characterize them (for in vitro differentiation assays and immunophenotyping). The other tooth was fixed and histologically processed for subsequent labeling by immunohistochemistry for CD34, ?-SMA and S100, in order to localize blood vessels and arterioles associated with nerve fibers/bundles at the dental pulp. The frequency of CFU-F was counted for each patient and the histological slides were scanned to determine the vascular area density (DAV) and arterioles associated with nerves area density (DAAN) at Image-Pro Plus® software. In the present study, about 0.01 to 0.05% from the pulp-isolated total cells were undifferentiated mesenchymal stromal cells, capable of CFU-F formation under culture. This result was confirmed by the ability of these pulp cell small populations, from all patients, to differentiate into at least two mesodermal lineages, and for their antigenic phenotype with positivity mean greater than 95% for CD105, CD90 and CD73, and less than 4% for markers of hematopoietic origin. After plotting the data of CFU-F frequency vs. area densities for each patient, there was no significant correlation between the averages of CFU-F number and DAV (r= 0.188; p= 0.52), rejecting the hypothesis that perivascular niche (and probably pericytes) would be the major source of pulp undifferentiated cells. However, there was a significant association between the averages of DAAN and CFU-F (r= 0.62; p= 0.0179), accepting the hypothesis that the NVB (and probably the cells around arterioles associated to nerves) could originate most of pulp undifferentiated mesenchymal cells in vitro. These preliminary data are the first evidence, in human dental pulp, of indirect link between mesenchymal progenitors and arterioles associated with neural fibers/bundles
Subject: Polpa dentária
Células mesenquimais estromais
Nicho de células-tronco
Vasos sanguíneos
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FOP - Dissertação e Tese

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