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Type: TESE DIGITAL
Title: A Influência da hidroxiuréia nas propriedades adesivas de neutrófilos e plaquetas
Title Alternative: Influence of hydroxyurea on the adhesive properties of neutrophils and platelets
Author: Seguin, Cecília Souto, 1990-
Advisor: Zorzetto, Nicola Amanda Conran, 1972-
Abstract: Resumo: A inflamação é a resposta fisiológica normal à ação invasiva de patógenos ou lesão tecidual, a qual desencadeia uma rápida resposta inflamatória, representada pelo recrutamento de células, como leucócitos especialmente neutrófilos, que deixam a circulação e migram em direção ao local inflamado. As células endoteliais participam neste processo, pois são ativadas frente estímulos inflamatórios e atraem os leucócitos ao endotélio, aonde são induzidos ao rolamento, firme adesão e posteriormente diapedese, a fim de fagocitar o invasor. Evidências sugerem que alem dos neutrófilos, as plaquetas possuem importante papel na inflamação, quando ativadas expressam e secretam mediadores inflamatórios, induzindo uma resposta inflamatória em leucócitos e células endoteliais. A resposta inflamatória, quando desregulada, ocasiona danos teciduais e as interações de leucócitos e plaquetas com a parede vascular tem uma importante contribuição para as doenças inflamatórias crônicas, como a anemia falciforme (AF), a aterosclerose, a artrite reumatoide, entre outras. A hidroxiuréia (HU) é um quimioterápico usado no tratamento de carcinoma de cabeça/pescoço/ovário/cervix, melanoma, leucemia mielóide crônica, policitemia vera e AF. A HU atua principalmente interrompendo o ciclo celular, mas dados recentes indicam que HU talvez possua efeitos anti-inflamatórios e a capacidade de doar óxido nítrico (NO). Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar se a HU é capaz de alterar as propriedades adesivas de neutrófilos e plaquetas (obtidas de sangue humano) in vitro. A fim de avaliar esses efeitos, foram realizados ensaios de adesão estática e de adesão em sistema microfluídico, utilizando a plataforma CellixVenaflux®. Neutrófilos de indivíduos saudáveis foram pré-tratados com HU (100 a 1000?M) antes de receberem um estímulo de TNF-?; em seguida a adesão destas células à vários ligantes foram avaliadas. Plaquetas foram pré-incubadas com HU (10 a 100 ?M) e ativadas por adenosina difosfato (ADP) 20?M ou trombina (TB) 50U, e a sua adesão ao fibrinogênio avaliada. A HU foi capaz de diminuir a adesão dos neutrófilos (1000 ?M) e plaquetas (100 ?M). Posteriormente, foram utilizadas ferramentas farmacológicas, PTIO (2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide; um sequestrador de NO) e ODQ (1H-[1, 2, 4] oxadiazolo [4,3-a] quinoxalin-1-one; um inibidor de guanilato ciclase soluvel), para avaliar a participação da via depende de NO e de guanosina monofosfato ciclico nos efeitos da HU. Nos neutrófilos estimulados por TNF-?, dados indicam que estes efeitos, aparentemente são intermediados parcialmente pela propriedade desta droga de liberar NO, quando em solução. A expressão das moléculas de adesão, LFA-1/Mac-1, na sua conformação ativada ou não ativada na superfície dos neutrófilos e da P-selectina, integrina ?IIb?3 na sua conformação de alta afinidade, e a glicoproteina GPIb/IX/V na superfície das plaquetas foram analisadas através da citometria de fluxo. Nos dados obtidos, TNF-? não aumentou a ativação da integrina LFA-1 nos neutrófilos; em contraste a ativação da integrina Mac-1 apresentou um aumento significativo. No entanto, a presença de HU não alterou o efeito do TNF-? em Mac-1. Plaquetas ativadas por TB demostraram aumento significativo da expressão da integrina ?IIb?3 na sua conformação de alta afinidade e da glicoproteina GPIb/IX/V. A HU nas concentrações de 10, 100 e 500?M, preveniu parcialmente o aumento da expressão da integrina ?IIb?3 na sua conformação de alta afinidade. Assim sendo, o nosso trabalho indica que o uso da HU como uma abordagem anti-inflamatória deve ser estudado em pacientes com doenças inflamatórias

Abstract: Inflammation is a normal physiological response to the invasive action of pathogens or tissue injury, which trigger a rapid inflammatory response initiated by the recruitment of cells, such as leukocytes, especially neutrophils, which leave the circulation and migrate towards the site of inflammation. In order for this to happen, endothelial cells become activated state and attract neutrophils to the endothelium where they then roll and firmly adhere to the vessel wall before migrating to the site of pathogen invasion. The sterile inflammatory response to tissue lesions and cell death is required for normal healing; however, deregulated sterile inflammation causes tissue damage, giving rise to several chronic inflammatory diseases, including metabolic diseases, syndromes, and autoimmune diseases that can cause loss of organ function. Currently, evidence suggests that besides the neutrophils and leukocytes, platelets play an important role in inflammation when they are activated, by expressing and secreting inflammatory mediators that induce an inflammatory response in leukocytes and endothelial cells that produce a series of mediators that are capable of activating platelets. The interactions of leukocytes, and platelets, with the vascular wall make an important contribution to chronic inflammatory diseases, such as sickle cell disease (SCD), atherosclerosis, and rheumatoid arthritis among others. Hydroxyurea (HU) is a chemotherapeutic drug used in the treatment of head/neck/ovarian/cervix carcinoma, melanoma, chronic myeloid leukemia, polycythemia vera and SCD. HU works mainly by disrupting the cell cycle, but recent data indicate that HU may have anti-inflammatory effects and the ability to donate nitric oxide (NO). Thus, the aim of this study was to evaluate, in vitro, whether HU is able to alter the adhesive properties of neutrophils and platelets. In order to evaluate these effects, in vitro static adhesion and microfluidic adhesion assays were performed using the CellixVenaflux® platform. Neutrophils were pretreated with HU (100-1000?m) and received a TNF-? stimuli, and the adhesion of these cells to various ligands was evaluated. Platelets were preincubated with 10 -1000 ?m HU and activated with adenosine diphosphate (ADP) or thrombin (TB) and their adhesion to fibrinogen evaluated. HU was able to decrease neutrophil and platelet adhesion. The pharmacological tools, PTIO (2-phenyl 4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide and ODQ (1H-[1, 2, 4] oxadiazolo [4,3-a] quinoxalin-1-one), were used to evaluate the role of NO generation and cyclic guanosine monophosphate in the effects of HU. We observed a possible role of this pathway in the effects mediated by HU. The expression of the LFA-1/Mac-1 molecules in their activated conformations on the surface of neutrophils was analyzed by flow cytometry. Aditionally, the expressions of P-selectin, integrin ?IIb?3 in its high affinity conformation, and glycoprotein GPIb/IX/V on the platelet surface were determined. TNF-? did not increase neutrophil LFA-1 integrin activation. In contrast, activated Mac-1 integrin expression was significantly increased by TNF-?; however, the presence of HU did not alter the effect of TNF-? on Mac-1. TB-activated platelets demonstrated a significant increase in the expression of the integrin ?IIb?3 in its high affinity conformation and glycoprotein GPIb/IX/V. HU, at concentrations of 10, 100 and 500?M, partially prevented the increase in activation of the integrin ?IIb?3 that was induced by TB, but not by ADP. Therefore, our study indicates that HU has direct effects on the adhesive properties of leukocytes and platelets when activated. These effects, apparently in leukocytes, are intermediated partly by the property of this drug to release the anti-inflammatory molecule NO when in solution. The use of HU as an anti-inflammatory should be studied in patients with inflammatory diseases
Subject: Inflamação
Neutrófilos
Plaquetas (Sangue)
Óxido nítrico
Hidroxiureia
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2017
Appears in Collections:FCM - Dissertação e Tese

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