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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Investigação de homocisteína e seus metabólitos por eletroforese capilar como potenciais biomarcadores de esclerose lateral amiotrófica
Title Alternative: Investigation of homocysteine and metabolites by capillary electrophoresis as potential biomarkers of amyotrophic lateral sclerosis
Author: Cieslarová, Zuzana, 1987-
Advisor: Simionato, Ana Valéria Colnaghi, 1974-
Abstract: Resumo: A esclerose lateral amiotrófica (ALS) é uma doença neurodegenerativa progressiva causada pela degeneração dos neurônios motores superiores e inferiores no cérebro e na medula espinhal. Vários estudos mostraram níveis alterados de homocisteína (Hcy), cisteína (Cys), metionina (Met) e ácido glutâmico (Glu) em pacientes com ALS. A eletroforese capilar (CE) é uma técnica de separação usada principalmente na análise de amostras biológicas devido a sua rapidez, alta eficiência e baixo consumo de amostras e solventes. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um método de análise de Hcy, Cys, Met e Glu em plasma por CE. Foram comparados três modos de detecção ¿ por absorção UV, condutométrica sem contato acoplada capacitivamente (C4D) e espectrometria de massas (MS). A CE-UV e CE-C4D apresentaram altos limites de quantificação (LoQ). Assim, foi desenvolvido um método por SPE-CE-UV on-line para aumentar a detectabilidade do método, porém os picos de Hcy e Cys apresentaram baixa resolução. A CE-MS se mostrou mais adequada, apresentando LoQs entre 0,1170 (HCy) e 0,8944 (Glu) µmol/L, precisão intra-dia e inter-dia com coeficientes de variação menor que 6% e 11%, respectivamente, sendo então selecionada para análise de amostras de plasma. As concentrações dos analitos foram comparadas por métodos univariados (teste t para dados paramétricos ou teste de Mann-Whitney para dados não paramétricos) e multivariados (Análise de componentes principais), revelando diferenças significativas entre os níveis de Cys e Glu em plasma de pacientes em relação a indivíduos sadios, indicando sua potencialidade como biomarcadores de ALS

Abstract: Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disease that affects both lower and upper motor neurons, leading to muscle atrophy and weakness. Recently, altered levels of homocysteine (Hcy), cysteine (Cys), methionine (Met) and glutamic acid (Glu) have been observed in plasma of ALS patients. Capillary electrophoresis (CE) is a frequently applied method for the analysis of biological samples due to short analysis time, high efficiency and low sample and solvent consumption. The aim of this work was to develop a method for analysis of Hcy, Cys, Met and Glu in plasma by CE. Three modes of detection were compared ¿ UV absorption, capacitively coupled contactless conductivity (C4D) and mass spectrometry (MS). CE-UV and CE-C4D showed high limits of quantification (LoQ). Therefore, on-line coupling of solid phase extraction and CE (SPE-CE) was developed to increase method detectability. However low resolution between the peaks of Hcy and Cys precluded the use of this method for the analysis of real samples. The CE-MS method was the most appropriate method for the analysis of plasma samples revealing LoQs between 0.1170 (HCy) and 0.8944 (Glu) µmol/L, and intra-day and inter-day precision with variations lower than 6% and 11%, respectively. Plasma samples of heathy individuals and patients were analyzed and analytes concentrations were compared by univariate methods (t-test and Mann-Whitney) as well as multivariate methods (Principal component analysis). Significant differences between concentration of Cys and Glu in plasma of heathy individuals and patients with ALS were found, indicating their potential as biomarkers of ALS
Subject: Metabólitos
Esclerose amiotrófica lateral
Aminoácidos
Marcadores biológicos
Eletroforese capilar
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IQ - Tese e Dissertação

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