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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Análise proteômica comparativa do secretoma de ligamento periodontal de dentes decíduos e permanentes = Comparative proteomics analysis of periodontal ligament secretome from deciduos and permanent teeth
Title Alternative: Comparative proteomics analysis of periodontal ligament secretome from deciduos and permanent teeth
Author: Giovani, Priscila Alves, 1990-
Advisor: Kantovitz, Kamila Rosamilia
Abstract: Resumo: A reabsorção radicular e esfoliação dos dentes decíduos, concomitante a erupção dos sucessores permanentes, implica na reabsorção do ligamento periodontal (LP) dos decíduos. Entretanto, distinções entre a dentição decídua e a permanente necessitam de melhor investigação. A hipótese desse estudo é que há um perfil proteômico distinto entre células do LP de dentes decíduos (DD) e permanentes (DP). Para abordar essa hipótese, culturas celulares primárias foram obtidas a partir do LP de DD (n=3) e DP (n=3) e processadas para obtenção de extratos de peptídeos para análise por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS). Os achados foram validados a partir de LP fresco coletados de DD (n=6) e DP (n=6) por meio de Western Blotting e qPCR. Realizou-se ainda análise histológica, microscopia de luz e polarização, a partir de mandíbulas de BR1 minipigs (n=6). Os valores de "fold-change" (FC) foram calculados pela razão normalizada da contagem de espectros para LP de DP e DD, e o teste estatístico beta-binomial foi aplicado sobre a contagem dos espectros para determinar as proteínas diferencialmente (PDE) e exclusivamente expressas (PEE). O teste t de Student (??0,05) foi utilizado para a análise dos dados de expressão proteica (Western Blotting) e gênica (qPCR), enquanto os resultados histológicos foram apresentados de forma descritiva. Um total de 456 proteínas foram identificadas no secretoma [72 exclusivas aos DD (15,8%), 94 exclusivas aos DP (20,6%) e 290 comuns (64,0%)]. Dezesseis proteínas (3,5%) foram diferencialmente expressas das quais 9 (56,2%) foram mais expressas em DD, incluindo laminin subunit gamma 1 (LAMC1) (FC=0,49; p=0,02) e laminin subunit beta 2 (LAMB2) (FC=0,13; p=0,03), e 7 (43,7%) proteínas foram mais expressas em DP, incluindo o chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4) (FC=9,71; p=0,02) e collagen type IV alpha 2 (COL4A2) (FC=Infinito; p=0,03). qPCR revelou que os níveis de RNAm de LAMB1, LAMB3, LAMC1, LAMC2 foram significativamente mais elevados nos tecidos do LP de DD, enquanto que os níveis transcritos de LAMB2 foram superiores no DP (p <0,05). Western blotting confirmou maior expressão de LAMC1 em DD quando comparado com DP. Nossos achados histológicos sugerem distinções na organização e fisiologia do periodonto de DD e DP. Concluiu-se que embora haja um padrão bastante semelhante no perfil de proteínas expressas por células do LP de DD e DP, existem claras distinções que podem exercer um papel importante no controle das diferenças fisiológicas entre esses tecidos, com destaque para a expressão diferencial de membros da família das lamininas

Abstract: Root resorption and exfoliation of deciduous teeth, the concurrent eruption of permanent successors, implies the resorption of the periodontal ligament (PDL) of deciduous. However, distinctions between the primary teeth and permanent require further investigation. The hypothesis of this study was based on the assumption that there is a distinct proteomic profile between cells of the periodontal ligament (PDL) of deciduous teeth (DT) and permanent (PT). To address this hypothesis, primary cell cultures were obtained from the PDL of DT (n=3) and PT (n=3) and the secreted proteins were harvested and processed to obtain the peptide mixtures for analysis by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS / MS). The findings were validated from PDL tissues collected from DT (n = 6) and PT (n = 6) by Western blotting and qPCR. A histologic analysis by polarizing and light microscopy from minipigs jaws BR1 (n = 6) was performed. The fold-change calculation was based on the ratio of the mean of the normalized counts of PT and DT [mean (perm-PDLs) / mean (dec-PDLs)] and the beta-binomial model for analysis of spectrum counts to determine the differentially proteins (PDE) and exclusively expressed (PEE). Data from protein (Western Blotting) and gene (qPCR) expression were analyzed by Student's t test (??0,05), while the histological results were presented descriptively. A total of 456 proteins were identified in secretome [72 take the DT (15.8%), 94 to take PT (20.6%) and 290 common (64.0%)]. Sixteen proteins (3.5%) were differentially expressed of which 9 (56.2%) were over expressed in DT, including laminin subunit gamma 1 (LAMC1) (FC = 0.49; p = 0.02) and laminin subunit beta 2 (LAMB2) (FC = 0.13; p = 0.03), and 7 (43.7%) proteins were more expressed in PT including chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4) (FC = 9.71; p = 0.02) and collagen type IV alpha 2 (COL4A2) (FC = Infinity; p = 0.03). qPCR revealed that mRNA levels LAMB1, LAMB3, LAMC1, LAMC2 were significantly higher in PDL tissues DD, while LAMB2 transcripts levels were higher in PT (p <0.05). Western blotting confirmed increased expression of LAMC1 in DT compared with PT. Our histological findings suggest distinctions in the organization and physiology of periodontium between DT and PT. It was concluded that although there is a very similar pattern in the protein profile expressed by cells from DT and PT PDL, there are clear distinctions that can play an important role in controlling the physiological differences between these tissues, particularly the differential expression of members the laminin family
Subject: Proteômica
Dentes deciduos
Dentição permanente
Ligamento periodontal
Reabsorção da raiz (Dentes)
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FOP - Tese e Dissertação

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