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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Aplicação do método "fluorescence lifetime imaging microscopy" (FLIM) em exsudatos no pulmão
Title Alternative: Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) applied in lung exsudates
Author: Racanelli, Ana Paula, 1988-
Advisor: Metze, Konradin, 1956-
Abstract: Resumo: Anatomia Patológica baseia-se predominantemente em métodos criados na segunda metade do século 19. A introdução de novas tecnologias poderia ser útil na elaboração dos diagnósticos. O método FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) é uma nova técnica de fluorescência em que o contraste se baseia no tempo de vida de fluoróforos individuais. Foram utilizados blocos de parafina do arquivo de autópsias e biópsias do Departamento de Anatomia Patológica da FCM-Unicamp. Selecionamos 53 casos de forma randômica de 1966 até 2014, que apresentaram exsudatos e transudatos eosinofílicos nas laminas histológicas do pulmão. Foram confeccionadas lâminas coradas fracamente com hematoxilina, posteriormente analisadas em microscópio óptico confocal utilizando o método FLIM. Para validar o método em lâminas histológicas, analisamos pequenas artérias presentes nas amostras pulmonares, onde observamos o tempo de vida FLIM nas diferentes estruturas ali presentes. Os valores do tempo de vida da fluorescência da hemácia, musculatura lisa e do colágeno variaram entre os casos, porém houve co-variação entre eles. Com ajuste de pseudocores relacionados a diferentes tempo de vida, obtemos imagens reprodutíveis. Na análise dos exsudatos eosinofílicos, houve uma diferença significativa entre a média dos tempos FLIM. A média do tempo de vida da proteinose alveolar foi significantemente maior do que a média dos outros exsudatos. O teste de aleatoriedade mostrou que a textura do edema e da proteinose alveolar foram significativamente diferentes das pneumonias e das membranas hialinas. A distribuição dos tempos de vida na membrana hialina pode ser mostrada por uma parábola. O estudo mostra que o método FLIM pode revelar valiosas informações complementares para a análise de amostras pulmonares

Abstract: Pathology is mainly based on methods introduced in the second half of the 19th century. New technologies could be very helpful for making diagnosis. Fluorescence lifetime imaging (FLIM) is a new technique, where the contrast in the fluorescence image is based on the lifetime of the fluorophores. We used paraffin blocks from the files of surgical and autopsy pathology of the department of Pathology, FCM/UNICAMP. 53 cases with pulmonary eosinophilic transudates or exsudates were randomly selected from the time span between 1966 and 2014. Slightly hematoxylin stained paraffin sections were examined with the help of a confocal microscope with a FLIM equipment. In order to validate the method we analyzed first small arteries. The lifetimes between erythrocytes, smooth muscle , collagen and elastic fibres were different in each of the cases and we were able differentiate these structures in the virtual images by pseudocolors, although the lifetime values of a certain structure varied considerably between the cases, we were able to create reproducible virtual images by adjustment of the pseudocolors. Regarding eosinophilic exsudates and transudates, the lifetime of the alveolar proteinosis cases was significantly longer than those of the other groups. Tests of randomness showed that the texture of the edema and proteinosis were significantly different from that of the pneumonias or hyaline membranes. The distribution of the lifetime values across a hyaline membrane could be approximated by a parabolic curve. Our study suggests that FLIM can reveal valuable complementary information for the examination of lung specimens
Subject: Fluorescência
Microscopia confocal
Pulmão
Exsudatos e transudatos
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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