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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Estudo dos aspectos biológicos de Nyssomyia neivai (Diptera: Psychodidae) e aprimoramento das técnicas de colonização em laboratório
Title Alternative: Study of biological aspects of Nyssomyia neivai (Diptera: Psychodidae) and improvement of colonization techniques in laboratory
Author: Goulart, Thais Marchi, 1982-
Advisor: Pinto, Mara Cristina
Abstract: Resumo: Algumas espécies de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae), transmissoras de leishmania, são de difícil manutenção ou baixa produtividade em laboratório. Essas limitações prejudicam a realização de bioensaios que, de modo geral, utilizam grande quantidade de insetos. As tentativas de manutenção da espécie Nyssomyia neivai (=Lutzomyia neivai), considerada de importância na transmissão da leishmaniose tegumentar Americana, em laboratório são escassas, além de serem observadas altas taxas de mortalidade quando utilizados protocolos para outras espécies de flebotomíneos. Visando aumentar os conhecimentos de biologia básica de Ny. neivai e o aprimoramento de técnicas de criação mais específicas e eficientes, este estudo teve como objetivo principal investigar alternativas possíveis durante as diferentes fases de desenvolvimento do inseto. Basicamente quatro pontos cruciais no processo de criação foram focados: fonte alimentar sanguínea para as fêmeas, fonte alimentar de açúcares para os adultos, dieta das formas imaturas e investigação da presença de feromônios de oviposição. Entretanto, ao longo do processo de colonização de Ny. neivai, e das dificuldades encontradas, observamos outros pontos que poderiam apresentar relevância para um melhor rendimento no número final de adultos produzidos. Como resultado, foi obtida a maior produtividade de adultos e menor perda de larvas adicionando de cinco a dez casais em recipientes de criação (145 mL) para oviposição. A vermiculita mostrou-se um ótimo substrato a ser adicionado por cima do gesso na criação das larvas. A dieta artificial tradicional autoclavada, mostrou-se mais atrativa dentre as testadas e proporcionou o melhor desenvolvimento das formas imaturas. O camundongo mostrou-se a melhor alternativa como fonte alimentar sanguínea para os insetos. A alimentação artificial com membrana não foi eficiente para a manutenção da colônia, porém, para estudos de infecção de poucos indivíduos por micro-organismos, a alimentação artificial com membrana de pele de camundongo e sangue humano pode ser uma alternativa viável. Através da cromatografia gasosa, foram encontrados os carboidratos: frutose, glucose, isomaltose, ribose e trealose em insetos de campo e foi avaliada a curva de sobrevivência dos insetos alimentados com os três primeiros açúcares, separadamente, e com dois alimentos glicosados comerciais, resultando na melhor opção para a rotina laboratorial o alimento glicosado Favinho®. Na procura de feromônios de oviposição, experimentos de evidência biológica foram delineados e em todos esses experimentos não houve indicação da presença de voláteis na superfície dos ovos. Ainda na tentativa de isolamento químico de compostos nos ovos de Ny. neivai testes foram realizados com Microextração em fase sólida (SPME) e GC-MS. Esses testes apresentaram contaminantes nos cromatogramas, impedindo sua real análise e encobrindo possíveis picos de interesse. A partir desses resultados levanta-se a hipótese de que Ny. neivai não possua feromônios de oviposição, apresentando resposta visual. Porém, pode haver um sinergismo entre a resposta visual e os feromônios ainda não detectados pela metodologia adotada

Abstract: Some sandflies species (Diptera: Psychodidae), vector of leishmania are difficult to maintain or to produce in laboratory conditions. These limitations prejudice experiments that demand high number of insects. Nyssomyia neivai (=Lutzomyia neivai) is considered important in the transmission of the American Cutaneous Leishmaniasis and it is a specie with the features above. The attempts to maintain this specie in laboratory conditions are scarce and follow another phlebotomine species protocol resulting in a great mortality of insects. Aiming to increase the knowledge of the basic biology of Ny. neivai and the improvement of the rearing techniques to be more specific and efficient, the main purpose of this project was to investigate possible alternatives during the different development phases of the insect. Basically, four crucial points were focused: blood source for female sandflies, sugar source for adults, diet for immature stages and investigation of presence of oviposition pheromones. However, in this long process of colonization of Ny. neivai and the difficulties found, we were able to observe another points that could be relevant for a higher number of produced adults. The best result was achieved with five to ten couples inside a rearing pot (145 mL) for oviposition and vermiculite grains proved to be a great substrate to cover the plaster of Paris for the larvae rearing. The traditional diet, sterilized by autoclave, proved to be more attractive among the diets tested and provided better development for immature stages. The mice proved to be the best blood source for the female insects. The membrane feeding technique was not efficient to maintain the colony; however, it is a viable method for studies, with few sandflies, of infection with microorganism using mice skin as membrane and human blood as blood source. Fructose, glucose, isomaltose, ribose and trealose were the carbohydrates found in field insects, using gas chromatography, and the survival curve of sandflies was analyzed with the three first sugars mentioned above; two more commercial products were offered to the insects. As result, the commercial product Favinho® proved to be the better one to be used in the laboratory routine. Searching for oviposition pheromones, experiments of biological evidence were performed and the results revealed no indication of volatiles in the surface of the eggs. In the attempt to isolate chemical compounds, Ny. neivai eggs were exposed to Solid Phase Microextraction (SPME) and GC-MS. The tests result presented contamination in the chromatograms, preventing the real analysis and occulting possible peaks of interest. Thus, these results raise the hypothesis that there is no oviposition pheromones in Ny. neivai, presenting visual stimulus. Nevertheless, it could be a synergism between visual stimulus and pheromones not yet detected with the methodology adopted
Subject: Diptero
Flebotomineo
Colonização (Ecologia)
Microextração em fase sólida
GC-MS
Editor: [s.n.]
Citation: GOULART, Thais Marchi. Estudo dos aspectos biológicos de Nyssomyia neivai (Diptera: Psychodidae) e aprimoramento das técnicas de colonização em laboratório. 2016. 1 recurso online (165 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/321156>. Acesso em: 31 ago. 2018.
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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