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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Efeito combinado da aplicação de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo e selante de fibrina, no processo de reparo de tendão calcâneo de ratos
Title Alternative: The combined effect of ADSCs and fibrin sealant in the reparing process of the Achilles tendon in rats
Author: Arthur, Katleen, 1989-
Advisor: Pimentel, Edson Rosa, 1949-
Abstract: Resumo: O tendão calcâneo é um dos mais acometidos por lesão entre atletas e praticantes de atividades desportivas ocasionais. Devido à baixa capacidade regenerativa dos tendões após lesões, a morfologia tecidual dificilmente é recuperada integralmente, predispondo os tendões cicatrizados à recorrência de lesões. Com o objetivo de tornar o processo de reparo tendíneo mais eficiente, em nosso laboratório temos utilizado a aplicação de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (CTM). A utilização das CTM apresenta diversas vantagens devido à sua capacidade de diferenciação, coleta pouco invasiva e alto rendimento celular. A associação das CTM com scaffolds também representa uma alternativa para tratamento de lesões, pois mantém as células na região lesionada. O selante de fibrina derivado de peçonha de serpente, pode ser um recurso útil, devido à sua flexibilidade, diversidade de aplicações e baixo risco de transmitir doenças e de causar reações adversas, quando comparado aos selantes de fibrina convencionais. É biodegradável, possui capacidade adesiva, serve como scaffold e pode ser utilizado como um adjuvante em procedimentos de sutura convencionais. Objetivo: Investigar o efeito combinado da aplicação das CTM e selante de fibrina no 21° dia do processo de cicatrização do tendão calcâneo de ratos. Materiais e Métodos: 90 ratos Lewis machos (120 dias) foram distribuídos em 5 grupos: normal (N); transeccionado (T); transeccionado tratado com selante de fibrina (SF); transeccionado tratado com CTM (CTM) e transeccionado tratado com CTM e selante de fibrina (CTM+SF). As técnicas utilizadas foram: imageamento in vivo; RT-PCR array; dosagem de hidroxiprolina; microscopia de polarização; testes biomecânicos; técnicas in vitro para diferenciação osteogênica, condrogênica e adipogênica das CTM, citometria de fluxo e análise da viabilidade celular. Resultados: Na citometria de fluxo para caracterização das CTM na 5° passagem foi observada marcação positiva para CD90 (90%) e CD105 (5%). Na diferenciação in vitro, as CTM foram diferenciadas em osteocitos, condrocitos e adipocitos. Em média, as CTM apresentaram viabilidade de 85.3% no momento da aplicação. Através do imageamento in vivo foi notada a permanência das CTM no tendão até o 14° dia no grupo CTM+SF. Na análise do RT-PCR array, maior expressão de tenomodulin foi observada no grupo CTM em relação ao grupo SF. Na dosagem de hidroxiprolina, maior concentração foi observada no grupo CTM em relação ao grupo N. Na análise em microscopia de polarização, maior birrefringência foi detectada no grupo SF indicando maior organização dos feixes de colágeno, seguido do grupo CTM+SF. Menor índice apoptótico e marcante presença de colágeno III foram observados nos grupos SF e CTM+SF. Na biomecânica o valor de força máxima foi maior em tendões do grupo T em relação aos grupos CTM e CTM+SF. Em conclusão, nossos resultados mostraram que o selante de fibrina, assim como a sua associação com as CTM, foi mais efetivo na organização dos feixes de colágeno, na diminuição do índice apoptótico, no aumento de colágeno tipo III e na manutenção das CTM por um período maior na região lesionada do tendão

Abstract: The Achilles tendon is one of the most affected by injury among athletes and casual sports activities. Due to the low regenerative capacity of tendons after injury, tissue morphology is hardly recovered, predisposing the healed tendons to the recurrence of injury. In order to make the tendon repair process more efficient, we have used the application of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (MSC). The use of the MSC has several advantages due to its ability to differentiate, to be minimally invasive for collecting and high cell yield. The association of the MSC with scaffolds is also an alternative for treatment of injuries, it keeps the cells in the injured area. Fibrin sealant derived from snake venom, can be a useful resource, because of its flexibility, range of applications and low risk of transmitting disease and of causing adverse reactions when compared to conventional fibrin sealants. It is biodegradable, has adhesiveness, and serves as a scaffold to be used as an adjunct to conventional suturing procedures. Aims: To investigate the combined effect of the application of MSC and fibrin sealant on 21th day of the calcaneus tendon healing process. Materials and methods: 90 male Lewis rats (120 days) were distributed in 5 groups: normal (N); transected (T); transected treated with fibrin sealant (FS); transected treated with MSC (CTM) and transected treated with MSC and fibrin sealant (CTM+SF). The techniques used were: in vivo imaging; RT-PCR array; hydroxyproline dosage; polarizing microscopy; Biomechanical tests; techniques for in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation of MSC, and flow cytometry analysis for cell viability. Results: In flow cytometry to characterize the MSC at 5th passage were observed positive markers for CD90 (90%) and CD105 (5%). In vitro differentiation, MSC were differentiated into osteocytes, chondrocytes and adipocytes. On average, MSC showed 85.3% viability at the time of application. Through the in vivo imaging was noted the persistence of MSC in the tendon until the 14th day at the CTM+SF group. In the analysis of RT-PCR array, most tenomodulin expression was observed in the CTM group compared to the SF group. The analysis of dosage of hydroxyproline, showed higher concentration in the CTM group compared to the N group. In polarization microscopy, a higher birefringence was detected in the SF group indicating greater organization of collagen bundles, followed by the CTM+SF group. Lower apoptotic index and strong presence of collagen III were observed in SF and CTM+SF groups. In biomechanics maximum strength value was higher in T group in relation to CTM and CTM+SF groups. Our conclusion is that the fibrin sealant as well as its association with MSC, was more effective in the organization of collagen bundles in the reduction of the apoptotic index, increased the type III collagen and keeped the MSC for longer period in the damaged region of the tendon
Subject: Tendão calcanear
Células-tronco
Selante de fibrina
Regeneração (Biologia)
Colágeno
Editor: [s.n.]
Citation: ARTHUR, Katleen. Efeito combinado da aplicação de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo e selante de fibrina, no processo de reparo de tendão calcâneo de ratos. 2016. 1 recurso online (73 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/321140>. Acesso em: 31 ago. 2018.
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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