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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Avaliação das propriedades adesivas e inflamatórias mediadas pelas interações in vitro das células endoteliais progenitoras circulantes de pacientes com doença falciforme
Title Alternative: Evaluation of adhesive and inflammatory properties mediated by interactions in vitro in endothelial colony-forming cells from sickle cell anemia patients
Author: Saez, Roberta Casagrande, 1989-
Advisor: Ozelo, Margareth Castro, 1970-
Abstract: Resumo: As doenças falciformes são caracterizadas pela presença da hemoglobina S (HbS) resultante da mutação de ponto Glu6Val no gene da globina ?. Em condições de hipóxia, a HbS sofre polimerização, alterando a forma e as propriedades da superfície dos eritrócitos. Indivíduos homozigotos para o alelo da hemoglobina S são portadores de anemia falciforme (AF), uma grave condição decorrente de manifestações clínicas, como ocorrência de hemólise e fenômenos vaso-oclusivos. A terapia transfusional é uma intervenção fundamental na diminuição da morbidade e mortalidade em pacientes com AF. Nos pacientes em regime de transfusão regular, níveis de HbS abaixo de 30% estão associados com menor frequência de agudizações da doença. O processo vaso-oclusivo e a lesão tecidual representam as principais manifestações da doença. O endotélio na anemia falciforme pode sofrer ativação e disfunção endotelial decorrente da hemólise intravascular e da inflamação crônica e, por interagir com hemácias, leucócitos e plaquetas no processo vaso-oclusivo. As células endoteliais ativadas induzem a via de sinalização inflamatória levando ao aumento da produção de mediadores inflamatórios e da expressão das moléculas de adesão. O objetivo desse estudo foi avaliar as propriedades adesivas e inflamatórias entre células endoteliais e plaquetas de pacientes com anemia falciforme em regime de transfusão regular em comparação a indivíduos controles sadios. Em nosso estudo, não encontramos diferenças significativas, por citometria de fluxo, de expressão das moléculas de adesão VCAM-1, ICAM-1 e selectinas P e E na superfície de células endoteliais formadoras de colônias (CEFCs) de pacientes com AF em regime de transfusão regular (N=6) quando comparadas a CEFCs de indivíduos controles (N=6). Entretanto, a agregação plaquetária desses pacientes (N=4) mostrou-se significativamente diminuída para os agentes agregantes ADP (p=0,003), adrenalina (p<0,001) e ristocetina (p=0,001), comparada à agregação de plaquetas de indivíduos controle (N=7). Nossos resultados mostraram que plaquetas de pacientes com AF em regime transfusional apresentam menor capacidade de ativação endotelial, in vitro, em ensaios de co-cultura com CEFCs. As expressões da molécula de adesão celular vascular 1 (VCAM-1) e da selectina P em CEFCs (independente do grupo) aumentaram significativamente em sua superfície após co-incubação com plaquetas de indivíduos controle (p<0,001 e p=0,01, respectivamente). O sobrenadante da co-cultura de CEFCs e plaquetas controles também apresentou maior produção e liberação de VCAM-1 e selectina-P solúveis quando comparadas às co-culturas de CEFCs e plaquetas AF (p=0,003 e p=0,007, respectivamente). A mesma resposta foi encontrada nos ensaios realizados na presença de TNF-?. Os resultados desde estudo mostram pela primeira vez que transfusões regulares de concentrado de hemácias em pacientes com AF podem alterar a função plaquetária, reduzindo a ativação endotelial e o risco de evento vaso-oclusivo

Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is characterized by hemoglobin S (HbS), consequent from a single mutation in the ?-globin gene. Under hypoxic conditions, HbS has the ability to polymerize by changing the shape and surface properties of erythrocytes. Transfusion therapy is an important intervention in reducing morbidity and mortality in SCA patients. In patients on regular transfusion programs, HbS levels below 30% are associated with lower incidence of disease exacerbations. The vaso-occlusive process and tissue injury represent the main manifestations disease. The endothelium in sickle cell anemia may suffer activation and dysfunction caused by intravascular hemolysis and chronic inflammation and by interaction with red blood cells, white blood cells and platelets in the vaso-occlusive process. Activated endothelial cells induce inflammatory signaling pathway leading to increased production of inflammatory mediators and expression of adhesion molecules. The aim of this study was to evaluate the adhesive and inflammatory properties of endothelial cells and platelets from sickle cell anemia patients on regular transfusion program compared to healthy individuals. In our study, we did not detect differences, by flow cytometry, in the expressions of adhesion molecules VCAM-1, ICAM-1 and P and E selectins on endothelial colony-forming cells (ECFCs) of SCA patients under regular transfusions (N = 6) when compared to ECFCs of healthy individuals (N= 6). However, the platelet aggregation results of SCA patients (N= 4) showed a significantly decreased response to the aggregating agents ADP (p= 0,003), epinephrine (p< 0,001) and ristocetin (p= 0,001), when compared to platelet aggregation tests of healthy individuals (N=7). Our results showed that platelets from SCA patients on regular transfusion program have lower in vitro endothelial activation capacity, in co-culture assays using ECFCs. The expression of adhesion molecule VCAM-1 and P-selectin on ECFCs (regardless of the group) increased significantly after co-incubation with platelets from healthy individuals (p< 0,001 and p= 0,01, respectively). The co-culture supernatant of ECFCs and platelets from healthy individuals also presented with higher production and release of VCAM-1 and P-selectin soluble when compared to co-cultures of ECFCs and platelets from SCA patients (p = 0,003 and p = 0,007, respectively). The same result was found in the tests performed in the presence of TNF-?. Our results showed, for the first time, that regular transfusions in SCA patients can alter platelet function, reducing endothelial activation and the risk of vaso-occlusive event
Subject: Anemia falciforme
Células endoteliais
Plaquetas (Sangue)
Adesão celular
Moléculas de adesão celular
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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