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Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Comparação da expressão dos genes Dapper com a de marcadores moleculares para desenvolvimento dos membros de aves (Gallus gallus)
Title Alternative: Comparison of the expression pattern of the Dapper genes with the expression of molecular markers for limb development in chicken (Gallus gallus)
Author: Peterlini, Denner Jefferson
Advisor: Alvares, Lucia Elvira, 1968-
Abstract: Resumo: Os membros de vertebrados representam uma aquisição importante do grupo, os quais possibilitaram a expansão destes pela Biosfera. As bases moleculares do desenvolvimento dos membros estão sob intensa investigação, e o papel de diversos genes e moléculas de sinalização começam a ser bem compreendidos tanto no contexto do estabelecimento de seus eixos quanto da padronização dos tecidos e estruturas. A família dos genes Dapper (Dpr) tem sido associada a diversos processos da embriogênese de vertebrados, desde a coordenação de movimentos morfogenéticos durante a gastrulação à morfogênese de estruturas tão distintas quanto encéfalo, olhos e coração. No entanto, pouco se sabe sobre o papel destes genes no desenvolvimento dos membros, um sítio marcante de sua expressão durante a embriogênese de vertebrados. Resultados preliminares obtidos com emprego de hibridação in situ em embrião de galinha no nosso laboratório já haviam mostrado a expressão destes genes nos membros, e isto sugeriu que eles pudessem desempenhar um papel importante na ontogênese destas estruturas. assim, os padrões de expressão dos genes Dpr1 e Dpr2 entre os estádios HH24 e HH34 da ontogênese de aves foram caracterizados por meio de hibridação in situ neste trabalho. Também foram avaliadas a expressão dos marcadores moleculares MyoD para desenvolvimento de músculo esquelético, e Sox9 para desenvolvimento de cartilagem, bem como foi feita coloração dos membros com alcian blue, que evidência matriz extra-celular de tecido cartilaginoso. Os resultados obtidos revelaram que, no estádio HH24, a expressão de Dpr1 está presente no mesênquima proximal e medial dos membros anterior e posterior, e ausente da região distal (autópode). Neste estádio, a expressão de Dpr2 é claramente associada à agregação das células mesenquimais em condensações pré-condrogênicas. No estádio HH25, transcritos de Dpr1 e Dpr2 foram localizados pela primeira vez no autópode, delimitando uma região com o formato dos moldes cartilaginosos dos dígitos em formação. No estádio HH28, o padrão de expressão de Dpr1 ainda acompanha o contorno dos dígitos, além de serem observados altos níveis de expressão nos precursores dos tarsos e carpos. Por sua vez, Dpr2 é expresso fortemente nos dígitos 1 e 5 dos membros anterior e posterior, bem como nos blastemas dos dígitos posteriores. Finalmente, no estádio HH34, transcritos Dpr1 e Dpr2 estão concentrados nas regiões das articulações dos membros em desenvolvimento, enquanto Dpr2 é expresso também em tendões e em anexos ectodérmicos em formação. Este estudo suporta fortemente a hipótese de que os genes Dpr1 e Dpr2 desempenham um papel no processo de condrogênese que antecede a formação dos ossos dos membros de aves, bem como no desenvolvimento de outras estruturas, como articulações, tendões e anexos cutâneos

Abstract: The acquisition of vertebrates limbs represents an important novelty for this group and allowed the expansion of vertebrates through the Biosphere. The molecular basis of limbs development are under intense investigation, and the role of several genes and signaling molecules begin to be understood both within the context of axis determination as well as in the patterning of tissues and structures. The Dapper (Dpr) gene family has been associated with different processes of vertebrates embryogenesis, from the coordination of morphogenetic movements during gastrulation to morphogenesis of structures as different as brain, eyes and heart. However, nothing is known about the role of these genes in limb development, am important domain of Dpr expression during the embryogenesis of vertebrates. Preliminary results of in situ hybridization in chicken embryo obtained in our laboratory had already shown the expression of these genes in limb, suggesting that they could play an important role in the ontogeny of these structures. Thus, in this study the Dpr1 and Dpr2 expression pattern was characterized by in situ hybridization between stages HH24 and HH34 of chicken development. We also determined the expression of the molecular markers MyoD (skeletal muscle) and Sox9 (cartilage) and stained limbs at the different stages with alcian blue, that labels the extracellular matrix of cartilage. The results revealed that, at stage HH24, Dpr1 expression is observed in the proximal and medial mesenchyme in the fore and hindlimb buds but avoids the autopod. At this stage, the expression of Dpr2 is clearly associated with mesenchymal condensations of pre-chondrogenic cells. At stage HH25, Dpr1 and Dpr2 transcripts were found for the first time in the autopod, delimiting a region with the shape of the cartilaginous templates of the developing digits. At stage HH28, Dpr1 is still expressed around the developing digits, and transcripts are found at high levels in the tarsi and carpi precursors. In turn, Dpr2 is expressed strongly in the first and fifth digits of the forelimbs and hindlimbs, as well as in the digit blastemas. Finally, at stage HH34, Dpr1 and Dpr2 transcripts are concentrated in the developing joints, while Dpr2 is also expressed in ectodermal tendons and developing skin appendages. This study strongly supports the hypothesis that Dpr1 and Dpr2 play a role in the process of chondrogenesis before the formation of the limb bones in birds as well as the development of other structures such as tendons and skin appendages
Subject: Condrogênese
Desenvolvimento muscular
Genes Dapper
Desenvolvimento de membros
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2011
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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